李 丹,吳海紅,岳 玲,呂春晶,王麗波
(1.遼寧省農業(yè)科學院花卉研究所,遼寧 沈陽 110161; 2.遼寧省農業(yè)科學院果樹研究所,遼寧熊岳115009)
中華枸杞組培快繁技術研究*
李 丹1,吳海紅1,岳 玲1,呂春晶2,王麗波1
(1.遼寧省農業(yè)科學院花卉研究所,遼寧 沈陽 110161; 2.遼寧省農業(yè)科學院果樹研究所,遼寧熊岳115009)
試驗以中華枸杞帶嫩芽的莖段作為外植體開展組培快繁技術研究,通過不同激素濃度配比對外植體芽誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)各個階段最佳培養(yǎng)基組合進行研究。試驗表明:芽誘導培養(yǎng)基以Ms+6-BA 0.5+IAA 0.1為最佳;芽增殖以Ms+6-BA 0.5+IAA 2.0為最佳;生根培養(yǎng)以1/2Ms+NAA 0.1-0.5為最佳,栽培基質以草炭∶河沙=1∶1為宜。
中華枸杞;植物激素;組織培養(yǎng)
枸杞(Lycium chinense),落葉小灌木,茄科,枸杞屬,17世紀中葉被引種到法國,其后在歐洲、地中海沿岸國家及美洲國家相繼栽培和發(fā)展。枸杞為名貴的中藥材,又是良好的滋補品。近年來,枸杞又發(fā)展成為保健飲料和食品的加工原料,需求量日益增加。中華枸杞分布在我國東北、河北、山西、陜西等地區(qū)。中華枸杞用種子繁殖,其后代分離嚴重,選出的優(yōu)良植株,靠分蘗繁殖很慢,用常規(guī)扦插方法,存在繁殖材料來源有限,成活率低等問題。本試驗以遼寧省農業(yè)科學院引進的中華枸杞的嫩芽作為外植體,采用組培的方法擴繁,具有用材少,繁殖系數(shù)高,速度快等優(yōu)點。
1.1 材料選擇
材料于2015年7月采于遼寧省農業(yè)科學院院內,選生長旺盛、健康的中華枸杞植株,采當年生的嫩枝作為外植體。
1.2 外植體處理
選用優(yōu)良單株當年生嫩枝,剪去葉片,只留有嫩芽,用洗衣粉水洗去表面污垢,用流水沖洗30 min左右。將嫩枝剪成2 cm左右?guī)?個芽的小段,放入75%乙醇溶液中浸泡5~10 s,用無菌水沖洗,用濾紙吸干,再放入0.1%的氯化汞溶液中消毒,芽消毒時間設計3、5、7 min,用無菌水沖洗3~4次,將帶芽的莖段兩端與氯化汞接觸處各切掉0.5 cm,接種到誘導培養(yǎng)上。
1.3 培養(yǎng)基選擇
1.3.1 誘導培養(yǎng)基選擇
以Ms為基本培養(yǎng)基,分別添加6-BA 0.5、1.0、2.0 mg/L和 IAA 0.1、0.5、1.0 mg/L濃度的激素,共計9個組合,pH值調為5.8,添加3% 濃度的綿白糖。將處理好的外植體接種到以上培養(yǎng)基中,每瓶接種一個芽。
1.3.2 增殖培養(yǎng)基
以Ms為基本培養(yǎng)基,分別添加6-BA 0.5、1.0、2.0 mg/L和 IAA 0.5、1.0、2.0 mg/L濃度的激素,共計9個組合,pH值調為5.8,添加3% 濃度的綿白糖。將誘導出的愈傷組織切成0.5 cm見方的小塊,接種到增殖培養(yǎng)基中,每瓶接種1塊。
1.3.3 生根培養(yǎng)基
以1/2 Ms為基本培養(yǎng)基,分別添加 NAA0、0.1、0.5、1.0 mg/L,共計 4個組合,添加 2%濃度的綿白糖。待不定芽長到2 cm左右時切下接種到生根培養(yǎng)基中,每瓶接種4個芽,接種20瓶,14 d后統(tǒng)計生根情況。
1.3.4 生根苗移栽
待瓶苗生有2~3條以上根時即可進行移栽,移栽基質分別設定草炭、草炭∶河沙1∶1、草炭∶蛭石1∶1、河沙四種組合,14 d后觀察成活率。
2.1 外植體滅菌時間選擇
如表1所示,枸杞芽的最佳滅菌時間是5 min,時間過短芽表面的菌不能完全殺死,時間過長由于芽的組織比較嫩,氯化汞會把芽的生長點破壞掉,使芽不能萌發(fā),也不能產(chǎn)生愈傷組織。
表1 外植體滅菌時間的選擇
2.2 誘導培養(yǎng)基的選擇
將滅完菌的芽接種到6-BA與IAA的9個組合中(見表2),每個組合中均有愈傷組織長出,但數(shù)量和質地有很大差別,高濃度的6-BA的組合中長出的愈傷組織大都產(chǎn)生了玻璃化的現(xiàn)象,只有少量的芽長出,6-BA 0.5與IAA 0.1的組合長出的愈傷組織呈綠色,質地緊密有多量的芽長出,由此可見,這配比組合有利于枸杞的愈傷組織的誘導。
2.3 芽增殖培養(yǎng)基的選擇
將帶有芽的愈傷組織切成帶芽小塊,每瓶接種1塊愈傷組織,每個組合接種40瓶,芽數(shù)隨機,15 d后統(tǒng)計增殖芽數(shù)。高濃度的6-BA與低濃度的IAA組合有利于芽的增殖,高濃度的IAA與低濃度的6-BA組合有利于芽的生長,在生產(chǎn)中應選擇既有利于芽分化又有利于生長的激素,以6-BA 0.5+IAA 2.0的組合效果最佳。
2.4 生根培養(yǎng)基的選擇
將超過2 cm的芽切下接種到生根培養(yǎng)基中,以1/2 MS為基本培養(yǎng)基,不添加任何激素均能生根,但生根率較低,添加NAA 0.1~0.5效果最好,生根率可達98%。
2.5 栽培基質的選擇
選擇生有2~3條根,生長健壯的苗進行移栽,移栽前2 d把瓶蓋打開煉苗,移栽時將苗根部的瓊脂清洗干凈,防止滋生霉菌導致根系腐爛。由圖1可以看出,草炭∶河沙=1∶1的基質適合枸杞組培苗的生長,移栽后苗注意遮蔭,待14 d左右苗完全成活后,撤掉遮蔭。
表2 不同6-BA、NAA對芽誘導的影響
表3 不同6-BA、NAA對芽增殖的影響
表4 不同6-BA、NAA對芽增殖的影響
圖1 不同移栽基質對生根苗成活率的影響
適合中華枸杞芽的滅菌時間是5 min,芽誘導最佳培養(yǎng)基以Ms基本培養(yǎng)基添加6-BA 0.5與IAA 0.1,芽增殖以Ms基本培養(yǎng)基6-BA 0.5+IAA 2.0的組合效果最好,1/2 Ms添加NAA 0.1-0.5適合生根,栽培基質以草炭∶河沙=1∶1為宜。
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S567.103.8
B
1002-1728(2017)04-0086-03
10.3969/j.issn.1002-1728.2017.04.022
2017-06-29
李丹(1984-)女,助理研究員,從事園藝作物組織培養(yǎng)工作。