張捷，高靜，趙琢，楊向瑩，劉志鵬，暢曉暉，柳明，槐碩，吳海燕，陳廣全，張錫全

（1.北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心，北京100026；2.出入境食品安全檢測北京市重點實驗室，北京100026；3.廈門市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院，福建廈門361006；4.天津出入境檢驗檢疫局工業(yè)產(chǎn)品安全技術(shù)中心，天津300308；5.濰坊高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院，山東濰坊261205）

快速檢測沙門氏菌的熒光免疫試紙的研制

張捷1，2，高靜3，趙琢4，*，楊向瑩1，2，劉志鵬4，暢曉暉1，2，柳明4，槐碩1，2，吳海燕5，陳廣全1，2，張錫全1，2

（1.北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心，北京100026；2.出入境食品安全檢測北京市重點實驗室，北京100026；3.廈門市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗院，福建廈門361006；4.天津出入境檢驗檢疫局工業(yè)產(chǎn)品安全技術(shù)中心，天津300308；5.濰坊高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院，山東濰坊261205）

研制一種基于低噪聲激發(fā)式熒光沙門氏菌免疫層析檢測試紙條，用于沙門氏菌快速、高敏、兼顧定性及精準定量的檢測。采用低噪聲激發(fā)式熒光染料作為標記，采用免疫層析技術(shù)，制備靶向于沙門氏菌的免疫層析試紙條。檢測時，采用專用便攜式低噪聲激發(fā)式熒光掃描儀分別掃描質(zhì)控線和檢測線，以檢測線熒光強度檢測值實現(xiàn)樣本的定性及定量檢測，并對免疫層析試紙條各項性能進行評價。低噪聲激發(fā)式熒光沙門氏菌免疫層析檢測試紙條制備成功，免疫層析試紙條性能檢測結(jié)果顯示，該試紙條特異性強、靈敏度高、檢測限可達到0.5×103CFU/mL，是一種新型快速高效穩(wěn)定的檢測方法。該免疫層析試紙條可適用于食品及病理樣本中沙門氏菌初篩和即時檢測。

沙門氏菌；免疫層析檢測試紙條；特異性；靈敏度；檢測限

沙門氏菌作為致病菌檢測的一項重要指標，在公共衛(wèi)生、食品衛(wèi)生、畜牧獸醫(yī)和出入境檢驗檢疫中均有重要的意義，同時也對沙門氏菌的快速及高精度的定量檢測提出了更高的要求[1]。為探求快速、準確、高靈敏度、易操作且能夠定量的檢測方法，世界各國學者進行了大量研究，從以傳統(tǒng)方法為基礎(chǔ)發(fā)展到以免疫學、分子生物學為基礎(chǔ)的快速檢測方法，并在實踐中不斷取得新進展[2-3]。

免疫層析技術(shù)是一項有效結(jié)合了層析法卓越分離能力和免疫反應高度特異性的新型免疫檢測技術(shù)，當前在疾病快速診斷、環(huán)境污染物分析及致病生物因子檢定等領(lǐng)域得到廣泛應用[4]。其原理是將特異抗原或抗體固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，當該干燥的硝酸纖維素膜一端浸入樣品后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當遷移至交聯(lián)標記抗體的特定區(qū)域時，樣品中相應的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合形成抗原-標記抗體復合物，經(jīng)標記物的顯色、發(fā)光或電化學反應而使該區(qū)域顯示一定的信號，從而實現(xiàn)特異性免疫診斷。常用的標記物包括生色型探針（包括膠體金、膠體碳、著色微球等）和熒光分子（如有機熒光染料、量子點、稀土元素配合物、上轉(zhuǎn)磷光顆粒等）[5]。

然而上述的標記物卻存在靈敏度有限且無法實現(xiàn)精確定量檢測等缺陷，進而限制了免疫層析技術(shù)的廣泛應用。如現(xiàn)有技術(shù)中常見的利用酶標記催化生色底物的酶促反應而顯色，可用于抗原或抗體的直接檢測，將該方法應用于食品中沙門氏菌的檢測，通過單克隆抗體大大降低假陽性率，但是該方法的靈敏度較分子生物學方法低，且必須經(jīng)過增菌篩選純培養(yǎng)步驟，因此難以在短時間內(nèi)得到檢測結(jié)果[6]。

對于現(xiàn)有的膠體金免疫層析技術(shù)，通過膠體金等納米顆粒的聚集反應而顯色，從而實現(xiàn)結(jié)果判定。雖然該種方法具有便捷、快速、準確和無污染等特點被廣泛應用于醫(yī)學檢測和臨床診斷，在病原體檢測方面，其敏感性、特異性具有其他免疫學方法無可比擬的優(yōu)勢，且無需特殊儀器設(shè)備，對檢測人員的專業(yè)要求低，有良好的基層應用開發(fā)前景。但這種方法中存在標記物的穩(wěn)定性較差，顏色單一，靈敏度較低，受基質(zhì)的背景干擾大等缺陷，且只能定性檢測，不能做到精確定量檢測，上述標記靈敏度有限且無法實現(xiàn)精確定量，限制了免疫層析技術(shù)的應用。另外，現(xiàn)有免疫層析技術(shù)一直主要用于對蛋白類的檢測，對于微生物的檢測則所見甚少，同時更難以實現(xiàn)微生物的定量檢測，對于快速檢測致病菌而言，其應用受到極大的限制[7-8]。

本文所要解決的技術(shù)問題在于現(xiàn)有技術(shù)中難于快速定量檢測沙門氏菌的問題，進而提供一種基于低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條。本文采用熒光染料作為標記，采用免疫層析技術(shù)，制備靶向于沙門氏菌的免疫層析試紙條，檢測時，采用專用便攜式低噪聲激發(fā)式熒光掃描儀分別掃描質(zhì)控線和檢測線，以檢測線熒光強度檢測值實現(xiàn)樣本的定性及定量檢測，該試紙條適用于食品及病理樣本中沙門氏菌即時檢測，此免疫層析試紙條具有快速、高敏、兼顧定性及精準定量及便攜的特點。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器

XC-CD型超聲細胞粉碎機：寧波先倡電子科技有限公司；smartreader101型便攜式近紅外熒光掃描儀：北京博潤福得科技發(fā)展有限公司。

1.1.2 材料與試劑

沙門氏菌標準菌株ATCC14028、副溶血弧菌標準菌株ATCC17802、單增李斯特菌標準菌株ATCC15313、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、大腸埃希氏菌：北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心食品實驗室分離菌株。牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）：北京索萊寶生物科技有限公司；Tween20：北京克勞寧生物科技有限公司；疊氮化鈉：北京新鼎鵬飛科技發(fā)展有限公司；鼠抗沙門氏菌單克隆抗體：上海慧耘生物；鼠抗沙門氏菌多克隆抗體：上海慧耘生物；低噪聲激發(fā)式熒光染料DyLight800：Thermofisher公司；羊抗鼠IgG多克隆抗體：北京華大蛋白質(zhì)公司。

1.2 方法

1.2.1 低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條結(jié)構(gòu)

低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條制備的示意圖，如圖1所示。

圖1 低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條示意圖Fig.1 The structure of low-noise excitation fluorescence detection of Salmonella immunochromatographic test dipstick

沿底板7的長度方向上依次粘附上的樣品墊1、結(jié)合墊2、抗體承載膜3和吸水墊6。樣品墊1、結(jié)合墊2、抗體承載膜3和吸水墊6之間，依次與且僅與相鄰部位相接觸且部分重疊；抗體承載膜3上粘附于所述底板7的中間部位，其上設(shè)置有相間隔的檢測線4的質(zhì)控線5，檢測線4靠近結(jié)合墊2，質(zhì)控線5靠近吸水墊6。質(zhì)控線4與所述檢測線5平行設(shè)置，檢測線和質(zhì)控線間距0.5 cm。結(jié)合墊2上噴涂有熒光染料標記的鼠抗沙門氏菌單克隆抗體；檢測線4由可與沙門氏菌特異性結(jié)合的多克隆抗體鼠抗沙門氏菌多克隆抗體涂層組成；質(zhì)控線5由與沙門氏菌以及可與沙門氏菌特異性結(jié)合的多克隆抗體均無關(guān)的羊抗鼠IgG多克隆抗體涂層形成。

1.2.2 低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條制備及使用

1.2.2.1 制備

①取以pH值為7.4的（磷酸緩沖鹽溶液，phosphate buffer saline，PBS）緩沖液稀釋10倍的熒光染料，染料與沙門氏菌單克隆抗體以1∶2質(zhì)量比混合均勻，室溫條件下避光反應2 h，隨后將所得的標記產(chǎn)物放入含有PBS緩沖液的透析袋中，4℃透析4 h，向所述標記好的標記產(chǎn)物中添加終濃度為1.5%BSA、0.15%Tween20和0.015%疊氮化鈉，4℃保存，備用；②在玻璃纖維素膜結(jié)合墊上噴涂以層析緩沖液稀釋1 000倍后的上述步驟中的所述標記產(chǎn)物，然后室溫風干，備用；③使用含 5%BSA，0.1%Tween 20 的 PBS（pH 7.4）緩沖液噴涂在所述纖維素膜樣品墊（結(jié)構(gòu)1），室溫風干后，備用；④分別取所述沙門氏菌多克隆抗體和所述與沙門氏菌以及可與沙門氏菌特異性結(jié)合的多克隆抗體均無關(guān)的抗體用劃線機在硝酸纖維素抗體承載膜上劃所述檢測線和所述質(zhì)控線，室溫風干，備用；⑤將上述步驟獲得的所述樣品墊、所述結(jié)合墊、所述抗體承載膜和所述吸水墊沿所述底板的長度方向上依次粘附，然后切割成試紙條。

1.2.2.2 使用

以pH值為7.4的PBS緩沖液稀釋處理待測樣品，取上清液超聲破菌后作為待檢樣，用所述的試紙條進行免疫層析；熒光掃描所述檢測線和所述質(zhì)控線，分別測定所述檢測線和所述質(zhì)控線區(qū)域的熒光強度，若所述質(zhì)控線區(qū)域出現(xiàn)熒光發(fā)射峰，則表明該試紙條有效，反之則無效；若所述檢測線區(qū)域同時出現(xiàn)熒光發(fā)射峰則為陽性結(jié)果，反之則為陰性。

1.2.3 低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條性能評價方法

1.2.3.1 有效性檢測

取雞肉樣品25 g，剪碎，用225 mL的pH值為7.4的含5%BSA，0.1%Tween 20的PBS緩沖液稀釋樣品，取上清液作為檢樣，吸取1 mL上清液至EP管中，超聲破菌，直徑3 mm探頭，工作5 s，暫停15 s，40%能量，共計30次循環(huán)，吸取100 μL經(jīng)超聲處理的檢樣滴加到樣品墊1上，待吸收干后再滴加50 μL上述的PBS緩沖液，用所述的試紙條進行免疫層析；室溫放置15 min后，用便攜式低噪聲激發(fā)式熒光掃描儀分別測定檢測線4和質(zhì)控線5區(qū)域的熒光強度，分析結(jié)果。

1.2.3.2 特異性的檢測

分別取實驗室分離的沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血弧菌調(diào)制成0.6×104CFU/mL的菌液，檢測方法同1.2.3.1。

1.2.3.3 靈敏度和檢測限的檢測

采用添加回收試驗方法，取未檢出沙門氏菌雞肉樣品75 g，分作3份，分別加入已知濃度的沙門氏菌，剪碎，用225 mL的PBS緩沖液稀釋所述雞肉樣品，吸取1 mL樣本至EP管中，直徑3 mm的探頭，工作5 s，暫停15 s，40%能量，共計30次循環(huán)。吸取100 μL經(jīng)超聲處理的樣品液滴加到樣品墊1上，室溫靜置10 min，將所述試紙條放入便攜式低噪聲激發(fā)式熒光掃描儀中讀數(shù)，利用標準曲線推算出沙門氏菌濃度。

在后續(xù)定量檢測1.2.4.2試驗中進行，試驗方法相同。

1.2.4 低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條檢測沙門氏菌實例方法

1.2.4.1 標準曲線的制作

取105CFU/mL的沙門氏菌純菌（實驗室分離株），用含PBS（pH 7.4）稀釋液將所述純菌進行1倍～100倍梯度濃度系列稀釋，制成樣品；然后吸取1 mL上清液至EP管中，超聲破菌，直徑3 mm探頭，工作5 s，暫停15 s，40%能量，共計30次循環(huán)破菌處理；吸取50 μL樣本滴加到樣品墊1上，待樣品吸收后再滴加50 μL上述的PBS緩沖液，室溫靜置10 min，將上述試紙條放入便攜式低噪聲激發(fā)式熒光掃描儀中讀數(shù)。

稀釋的沙門氏菌標準品分別進行有效性檢測，掃描獲得檢測線4和質(zhì)控線5的熒光值，如若反應正常后可繼續(xù)進行。每個稀釋度樣本平行測量兩次，取平均值作為測量值，記錄檢測結(jié)果，以該值對相應的樣品濃度制作標準工作曲線，并擬合方程。

1.2.4.2 定量檢測的步驟

定量檢測方法與1.2.3.3試驗方法相同。

2 結(jié)果與分析

2.1 低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條檢測性能評價

2.1.1 有效性

利用低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條對雞肉樣品中的沙門氏菌進行檢測，用便攜式低噪聲激發(fā)式熒光掃描儀分別測定所述檢測線4和所述質(zhì)控線5區(qū)域的熒光強度，若所述質(zhì)控線5區(qū)域出現(xiàn)熒光發(fā)射峰，則表明該試紙條有效，反之則無效；若所述檢測線4區(qū)域同時出現(xiàn)熒光發(fā)射峰則為陽性結(jié)果，反之則為陰性，結(jié)果如圖2所示。

圖2 免疫層析試紙有效性測試Fig.2 The effectiveness test of immunochromatographic dipstick

如圖2所示，給出上述樣品的定性檢測結(jié)果，在檢測線4區(qū)域和控制線5區(qū)域同時出現(xiàn)熒光發(fā)射峰，反應為陽性結(jié)果，該樣品中含有沙門氏菌，證明該低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條是可用的，具有有效性。

2.1.2 特異性

利用低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條對沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血弧菌進行檢測，結(jié)果如圖3所示。

圖3 免疫層析試紙?zhí)禺愋詼y試Fig.3 The specificity test of immunochromatographic dipstick

由圖3可以看出，除沙門氏菌樣品外，其余檢測的細菌在檢測線位置均未出現(xiàn)發(fā)射峰，各菌的試紙條均在質(zhì)控線處出現(xiàn)發(fā)射峰，表明本方法對沙門氏菌的檢測特異性好，與其他4個菌屬無交叉反應。

2.1.3 靈敏性

低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條，其發(fā)射光譜位于低噪聲激發(fā)式區(qū)域（波長為650 nm～1100 nm）的低噪聲激發(fā)式熒光探針具有較高的信噪比，并由此保障了其高檢測靈敏度，同時由于生物基體極少在低噪聲激發(fā)式光譜區(qū)自發(fā)熒光，使得基于此類探針標記的分析檢測免受背景熒光干擾；因散射光強度與波長的四次方成反比，發(fā)射光位于長波區(qū)的低噪聲激發(fā)式熒光探針受其干擾小[9-10]。與常用的膠體金免疫層析試紙條相比，基于低噪聲激發(fā)式熒光染料標記的免疫層析體系對靶標菌的靈敏度提高約200倍。利用低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條對雞肉樣品中的沙門氏菌進行檢測，并與已知濃度進行比對，在2.3.2試驗中得到論證，結(jié)果如表2所示，證明采用的基于熒光標記法測定的沙門氏菌的濃度較為準確、靈敏性好，可用于日常沙門氏菌的檢測之用。

2.1.4 檢測限

沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條的最低檢出限為1×105CFU/mL[11]，而本研究中基于低噪聲激發(fā)式熒光染料的沙門氏菌免疫層析試紙條的最低檢出限為0.5×103CFU/mL，檢測線明顯低于沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條。

2.2 低噪聲激發(fā)式熒光標記的沙門氏菌免疫層析試紙條定量檢測沙門氏菌的實例

2.2.1 標準曲線的制備

稀釋的沙門氏菌標準品：1×105、0.5×105、1×104、0.5×104、1×103、0.5×103、1×102、10 CFU/mL 的樣品分別進行檢測，掃描獲得檢測線4和質(zhì)控線5的熒光值，同時出現(xiàn)檢測區(qū)域熒光峰和質(zhì)控區(qū)域熒光峰方表明反應正常。每個稀釋度樣本平行測量兩次，取平均值作為測量值，檢測結(jié)果見表1。

表1 不同濃度沙門氏菌標準品對應檢測結(jié)果Table 1 Detection results of suspension of Salmonella with different concentrations

以該測量值對相應的樣品濃度制作標準工作曲線，如圖4所示，并擬合得適用的標準曲線為y=1.492 7x+2.573 8，R2=0.941 6。

圖4 沙門氏菌的標準曲線制作Fig.4 The standard curve of Salmonella

2.2.2 沙門氏菌的定量檢測

采用添加回收試驗方法，取未檢出沙門氏菌雞肉樣品進行添加已知濃度的沙門氏菌操作，最后將所述試紙條放入便攜式低噪聲激發(fā)式熒光掃描儀中讀數(shù)，結(jié)果見表2。

表2 根據(jù)標準曲線計算樣品中的沙門氏菌的濃度Table 2 Calculate the concentration of Salmonella in the sample according to the standard curve

由上述表格數(shù)據(jù)可知，與已知的沙門氏菌的濃度相比，樣品1在已知濃度為0.7×104CFU/mL時，免疫層析試紙檢測濃度為0.66×104CFU/mL；樣品2在已知濃度為0.5×104CFU/mL時，免疫層析試紙檢測濃度為5.5×103CFU/mL；樣品3在已知未添加沙門氏菌時，免疫層析試紙未檢測出。由此本研究研制的基于熒光標記法測定的沙門氏菌的濃度試紙條較為準確，可用于日常沙門氏菌的檢測使用。

3 討論

沙門氏菌作為致病菌檢測的一項重要指標，在世界各國細菌性食物中毒病例中，沙門氏菌引起的食物中毒案例常居榜首或第二位[12-13]。在公共衛(wèi)生、食品衛(wèi)生、畜牧獸醫(yī)和出入境檢驗檢疫中均有重要的意義，同時也對沙門氏菌的快速及高精度的定量檢測提出了更高的要求。傳統(tǒng)的檢測方法耗時、操作繁瑣，而基于免疫學原理的產(chǎn)品存在檢測限高、特異性不強等問題[14-16]。近紅外檢測方法與其他檢測方法相比，信噪比高，靈敏度理想。與常用的膠體金免疫層析試紙條相比，基于近紅外熒光染料標記的免疫層析體系對靶標菌的靈敏度提高約100倍。如沙門氏菌膠體金免疫層析試紙條的最低檢出限為1×105CFU/mL[11]，而本研究中基于近紅外熒光染料的沙門氏菌免疫層析試紙條的最低檢出限為0.5×103CFU/mL。

傳統(tǒng)的免疫層析法依賴膠體金顆粒的聚集效應而生色以判讀結(jié)果，其顏色深淺雖與樣品中靶標菌的濃度存在一定的數(shù)量關(guān)系，但無法進行準確定量[17-18]。近紅外檢測方法的優(yōu)點在于便攜，適用于現(xiàn)場、即時、快速檢測。本方法所涉的免疫層析試紙條及近紅外熒光掃描儀均屬于便攜可移動裝置，且整個檢測過程可在45 min內(nèi)完成，適用于現(xiàn)場、即時、快速檢測。相對于傳統(tǒng)培養(yǎng)法需要5 d～6 d的檢測周期及繁瑣的培養(yǎng)基配制等過程具有顯著的時效性優(yōu)勢；相對于PCR及實時熒光定量PCR法等分子生物學法在儀器的檢測速度、便攜性及現(xiàn)場適用性上呈明顯優(yōu)勢。

綜上，本研究所建立的近紅外熒光染料檢測方法，既降低了檢測限，又縮短了檢測時間，提高了食源性致病菌的檢測效率，為進出口食品的快速檢測提供了一種新的檢測方法。

[1]Manzano M,Cocolin L,Astori G,et al.Development of a PCR microplate-capture hybridization method for simple,fast and sensitive detection of Salmonella serovars in food[J].Molecular and Cellular Probes,1998,12：227-234

[2]Jarquin R,Hanning I,Ahn S,et al.Development of rapid detection and genetic characterization of Salmonella in poultry breeder feeds[J].Sensors(Basel),2009(7)：5308-5323

[3]劉喆,張書蕭,王少輝,等.沙門氏菌的檢測技術(shù)進展[J].中國動物傳染病學報,2012(2)：81-86

[4]Cheng Y L,Wang L C,Wang C H,et al.Immunochromatographic strip assay development for avian influenza antibody detection[J].Jpn J Vet Res,2015,63(4)：183-190

[5]嚴華.膠體免疫金層析技術(shù)的應用與展望[J].微生物學免疫進展,2005,33(3)：86-89

[6]樊淑華,王永立.膠體免疫層析技術(shù)應用研究進展[J].動物醫(yī)學進展,2014,35(10)：99-103

[7]Jin Q,Yang J,Lu Q,et al.Development of an immunochromatographic strip for the detection of antibodies against Porcine circovirus-2[J].J Vet Diagn Invest,2012,24：1151-1157

[8]Yang S,J Yang G,Zhang S,et al.Development of a peptidebased immunochromatographic strip for differentiation of serotype O footand-mouth disease virus-infected pigs from vaccinated pigs[J].J Vet Diagn Invest,2010,22：412-415

[9]Yang B C,H Z Tian,J Xu,et al.Guan.An integrated light emitting diode-induced fluorescence detector for capillary electrophoresis[J].Talanta,2006,69(4)：996-1000

[10]Yang B C,F Tan,Y F Guan,et al．A collinear light-emitting diode-induced fluorescence detector for capillary electrophoresis[J]．Talanta,2005,65(5)：1303-1306

[11]夏詩琪,徐超蓮,劉道峰.膠體金免疫層析法聯(lián)檢食品中5種典型沙門氏菌模型的建立和優(yōu)化[J].食品科學,2014,35(22)：154-158

[12]Matyas B,Cronquist A,Cartter M,et al．Preliminary FoodNet data on the incidence of infection with pathogens transmitted commonly through food[J].Jama-Journal of the American Medical Association．2010,303(21)：2130-2132

[13]焦新安,劉秀梵．沙門氏菌分類學進展[J]．國外醫(yī)學(微生物學分冊),1999,22(1)：28-30

[14]Vaishnavi C,Kaur S,Singh K.Evaluation of an in-house rapid diagnostic method for detection of Salmonella entericaserovar Typhi in fecal specimens[J]．Trop Gastroenterol,2006,27(1)：19-21

[15]楊愛萍,黃金林．單抗酶聯(lián)試劑盒與PCR方法快速檢測沙門氏菌的比較[J].畜牧與獸醫(yī),2003(12)：21-22

[16]Murphy N M,Mclauchlin J,Ohai C,et al．Construction and evaluation of a microbiological positive process internal control for PCR-based examination of food samples for Listeria monocytogenes and Salmonella enterica[J]．International Journal of Food Microbiology,2007,120(1/2)：110-119

[17]陳廣全,張惠媛．電阻抗法檢測食品中沙門氏菌[J]．食品科學,2001,22(9)：66-70

[18]吳剛,姜瞻梅,霍貴成,等．膠體金免疫層析技術(shù)在食品檢測中的應用[J]．食品工業(yè)科技,2007(12)：216-218

Development of An Immunochromatographic Test Dipstick for Detection of Salmonella

ZHANG Jie1，2，GAO Jing3，ZHAO Zhuo4，*，YANG Xiang-ying1，2，LIU Zhi-peng4，CHANG Xiao-hui1，2，
LIU Ming4，HUAI Shuo1，2，WU Hai-yan5，CHEN Guang-quan1，2，ZHANG Xi-quan1，2
（1.Beijing Entry-Exit Inspection Quarantine Bureau Inspection Quarantine Technical Center，Beijing 100026，China；2.Beijing Key Laboartory of Entry-Exit Food Safty Testing，Beijing 100026，China；3.Xiamen Products Quality Supervision&Inspection Institute，Xiamen 361006，F(xiàn)ujian，China；4.Technical Center for Safety of Industrial Products，Tianjin Entry-Exit Inspection Quarantine Bureau，Tianjin 300308，China；5.Weifang People's Hospital of High-tech Industrial Development Zone，Weifang 261205，Shandong，China）

A rapid and accurate detection product was developed for Salmonella with a low-noise excitation fluorescence detection of Salmonella immunochromatographic test dipstick.The immune-chromatography paper strips were prepared by using immunochromatography，a low-noise，high-emission fluorescent dye.In inspection，special portable low noise excitation fluorescent scanner was uesd to detected control line and test line respectively，the fluorescence intensity detected value of the line can achieve qualitative and quantitative detection of samples.The low-noise excitation fluorescence detection of Salmonella immunochromatographic test dipstick prepared successfully.Immunochromatographic dipstick performance test results show that the test dipstick specificity，high sensitivity，limit of detection was 0.5×103CFU/mL.It was a new fast and efficient and stable detection tools.The immunochromatographic dipstick can be applied immediately detect Salmonella in food samples and pathology.

Salmonella；immunochromatographic test dipstick；specificity；sensitivity；detection limit

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.17.027

2016-12-11

質(zhì)檢公益性行業(yè)科研專項項目（201410049）；國家質(zhì)檢總局科技計劃項目（2015IK011）

張捷（1965—），男（漢），高級工程師，博士，研究方向：食品安全評價。

*通信作者：趙琢，高級工程師，博士。