張倩 王安華+范三鵬 馬驍馳 王超 +賈景明

[摘要]該文綜合運用各種色譜技術(shù)對月腺大戟根進(jìn)行化學(xué)成分研究，利用1D NMR， 2D NMR， HRESIMS等波譜技術(shù)鑒定了所分離化合物的結(jié)構(gòu)。從月腺大戟根中分離得到4個酚酸類成分，分別鑒定為1，3，4，5四羥基2OβD[6′O沒食子?；拎咸烟腔鵠異戊苷（1），6′O沒食子?；咸烟钱惐眨?），鞣花酸（3）和3，4′二甲氧基鞣花酸（4）。其中，化合物1為新化合物， 2， 4為首次從大戟屬中分離得到。

[關(guān)鍵詞]月腺大戟； 酚酸類； 化學(xué)成分； 結(jié)構(gòu)鑒定

Phenolic acid derivatives of Euphorbia ebracteolata

ZHANG Qian1， WANG Anhua1， FAN Sanpeng1， MA Xiaochi1，2， WANG Chao1，2， JIA Jingming1*

（1 School of Traditional Chinese Materia Medica， Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang 110016， China；

2 College of Pharmacy， Dalian Medical University， Dalian 116044， China）

[Abstract]A variety of chromatographic methods were applied to research the chemical composition of the roots of Euphorbia ebracteolata Meanwhile， the structures of these compounds were identified by spectroscopic data， such as 1D， 2D NMR and HRESIMS In the present research， a new phenolic acid compound， 1，3，4，5tetrahydroxy2OβD[（6′Gallic acyl）glucopyranyl] isopentane（1）， was isolated from the roots of E ebracteolata， as well as three known compounds， isopropyl2OβD（6′gallic acyl）glucopyranoside（2）， ellagic acid（3） and 3，4′diOmethylellagic acid（4） respectively Additionally， compounds 2 and 4 were isolated from the Euphorbia genus for the first time

[Key words]Euphorbia ebracteolata； phenolic acid； chemical composition； identification

月腺大戟Euphorbia ebracteolata Hayata為大戟科Euphorbiaceae多年生草本植物，廣泛分布于中國中西部地區(qū)[1]，是中藥“狼毒”的原植物來源之一[2]。在中國的傳統(tǒng)用藥中，主要用于治療水腫腹脹，痰食蟲積[3]。大量研究表明，月腺大戟在抗腫瘤[4]、抗炎[5]、以及抗淋巴結(jié)核[6]方面有顯著療效，也是中成藥結(jié)核靈[7]的主要藥材之一。據(jù)報道，其化學(xué)成分主要為萜類[4，8]，苯乙酮類[9]，酚酸類[10]等。本研究從月腺大戟根中分離鑒定了4個酚酸類化合物，其中化合物1為新化合物見圖1，化合物2與化合物4首次從大戟屬中分離得到。

1材料

JASCO V 650紫外可見分光光度儀（JASCO，日本）；Bruker 601型核磁共振儀（Bruker，瑞士）；AAPI 3200質(zhì)譜儀（AB SCIEX，F(xiàn)ramingham，MA，美國）；UltiMate 3000分析型 HPLC（Thermo，美國）；制備型 HPLC（Agela，美國）；制備型C18色譜柱（YMCPack ODSA）；Waters 2545全自動制備型高效液相

色譜儀（Waters，美國）；Waters RP C18色譜柱（Waters，美國）； MCP 200高精密智能旋光儀（Anton paar，奧地利）。

硅膠 GF254薄層預(yù)制板為煙臺化學(xué)工業(yè)研究所產(chǎn)品；色譜硅膠（200～300目）為青島海洋化工廠產(chǎn)品；D101型大孔吸附樹脂為鄭州勤實科技有限公司產(chǎn)品；ODS填料為日本 YMC公司產(chǎn)品；所用色譜級甲醇和乙腈均購自美國SigmaAldrich公司。

實驗用月腺大戟均購買于安徽省亳州市，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)楊青山老師鑒定為大戟科Euphorbiaceae月腺大戟E ebracteolata的根。

2提取分離

干燥月腺大戟根 20 kg，粉碎，用80%乙醇加熱回流提取2 h /3次，提取液經(jīng)石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取后，正丁醇部位通過大孔樹脂柱，以乙醇水為洗脫劑分離，得到30%乙醇部位，60%乙醇部位，90%乙醇部位3部分。取30%乙醇洗脫部位（50 g）經(jīng)硅膠柱色譜，CH2Cl2MeOH（20∶1～1∶1）梯度洗脫，相同部分合并，得到53個流分（Fr1～Fr53）。取Fr 9（65 g）通過ODS中壓色譜，甲醇水[003%三氟乙酸（TFA），20%～70%]，流速150 mL·min-1，洗脫，得到24個流分。取Fr 7（400 mg）通過Waters 2545全自動制備型高效液相色譜儀，乙腈水（003% TFA，10%～20%），流速100 mL·min-1，再通過制備型HPLC純化，乙腈水（003% TFA，10%），流速80 mL·min-1，得到化合物 1（83 mg，tR =2609 min）。取Fr 23（260 mg）通過Sephadex LH20凝膠柱色譜，甲醇水（9∶1），所得流分通過制備型HPLC純化，乙腈水（003% TFA，10%），流速80 mL·min-1，得到化合物2（58 mg，tR =4590 min）；甲醇水（003% TFA，45%），流速80 mL·min-1，得到化合物3（165 mg，tR =3222 min）。取90%乙醇洗脫部位（42 g）經(jīng)ODS中壓色譜，甲醇水（003% TFA，40%～100%），流速150 mL·min-1，得到19個流分。取其中流分Fr 11（55 mg）通過制備型HPLC純化，乙腈水（003% TFA，30%），流速80 mL·min-1，得到化合物4（82 mg， tR =3745 min）。

3糖定性分析

取化合物150 mg，加入2 mL甲醇溶解，加入025 mL 4 mol·L-1三氟乙酸，在110 ℃的條件下水解4 h，然后加入05 mL甲醇4次，蒸發(fā)三氟乙酸，干燥，加入05 mL水溶解干燥物，加入03 mL 015 mol·L-1 NaOH和05 mL 01 mol·L-1 PMP（1苯基3甲基5吡唑啉酮）在70 ℃條件下反應(yīng)30 min，再加入03 mL 015 mol·L-1 HCl終止反應(yīng)。 將得到的樣品通過HPLC分析，液相條件0～21 min，16%乙腈+10 mm乙酸銨；21～60 min，24%乙腈；流速045 mL·min-1（46 mm×150 mm，25 μm），進(jìn)樣體積10 μL。

4結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1黃色油狀物；[α]20D -170（CH3OH，c 01）； UV（CH3CN） λmax 2157，2746 nm；HRESIMS m/z 489122 1 [M+Na] +（計算 C18H26O14Na，489132 3）。13CNMR（DMSOd6，150 MHz） 數(shù)據(jù)顯示δC 1088，1194，1385，1455和1659以及1HNMR（DMSOd6，600 MHz） 數(shù)據(jù)中δH 699（2H，s） 說明該結(jié)構(gòu)中存在1個沒食子?；钠?；13CNMR中δC 1046，763，741，740，698，636是葡萄糖上的1組碳信號，糖端基氫信號δH 443（1H，d，J=72 Hz）表明了苷鍵構(gòu)型為β，見表1。同時衍生化所得糖通過HPLC檢測，與D葡萄糖出峰時間一致（tR=4161 min），從而判定該結(jié)構(gòu)中所連接糖為βD葡萄糖。此外，該化合物中還存在多羥基碳鏈片段，其中包含3個氧化亞甲基信號，分別為δC 623，610，628；1個氧化次甲基信號δC 842和1個氧化季碳信號δC 750；結(jié)合HMBC譜中的遠(yuǎn)程碳?xì)湎嚓P(guān)信號，可以確定該片段為高度氧化的異戊烷。通過HMBC譜，可以看出該化合物平面結(jié)構(gòu)中，糖端基氫δH 443與異戊烷氧化次甲基碳δC 842存在遠(yuǎn)程相關(guān)，沒食子?；恤驶鸡腃 1659與葡萄糖6′位質(zhì)子δH 443（1H，m） 和δH 417（1H，dd，J=120，54 Hz） 存在遠(yuǎn)程相關(guān)，這說明沒食子酰基片段通過葡萄糖6′位與糖相連見圖1。同時，在1H1H COSY存在1組葡萄糖上的氫氫相關(guān)信號（δH 348/417，348/324，324/310），用于葡萄糖的氫質(zhì)子進(jìn)行歸屬見圖1。綜上所述，確定該化合物1為1，3，4，5四羥基2OβD[6′O沒食子?；拎咸烟腔鵠異戊苷。

化合物2白色無定型粉末；ESIMS m/z 3973 [M+Na]+ ； UV（MeOH） λmax：2161，2748 nm；1HNMR（DMSOd6，600 MHz） δ：695（2H，s，H2″，6″），110（6H，t，J=54 Hz，1CH3，3CH3），383（1H，m，2H），423（1H，d，J=78 Hz，1′H），296（1H，m，2′H），318（1H，m，3′H），319（1H，m，4′H），341（1H，m，5′H），440（1H，dd，J=120，18 Hz，6′H），421（1H，m，6′H）；13CNMR（DMSOd6，150 MHz） δ：1663（C7″），1460（C3″，5″），1389（C4″），1199（C1″），1090（C2″，6″），1020（C1′），771（C3′），740（C5′），739（C2′），705（C4′），642（C6′），7121（CH），240（CH3），225（CH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道[12]對比，故鑒定化合物2為6′O沒食子?；咸烟钱惐铡?/p>

化合物3白色無定型粉末；ESIMS m/z 3251 [M+Na] + ； UV（MeOH） λmax：2544 nm；1HNMR（DMSOd6，500 MHz） δ：1072（4H，br s，OH），746（2H，S，H1，6）；13CNMR（DMSOd6，150 MHz） δ：1074（C10b，10c），1101（C3a，8a），1124（C5a，10a），1364（C1，6），1399（C2，7），1482（C3，8），1592（C5，10）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道[13]對比，故鑒定化合物3為鞣花酸。

化合物4白色無定型粉末；ESIMS m/z 3251 [M+Na] + ； UV（MeOH） λmax：2544 nm；1HNMR（DMSOd6，600 MHz） δ：1108（1H，br s，OH），1079（1H，br s，OH），757（1H，s，H5），754（1H，s，H5′），405（3H，s，OMe3），399（3H，s，OMe4′）；13CNMR（DMSOd6，125MHz） δ：1115（C1），1417（C2），1404（C3），1525（C4），1114（C5），1129（C6），1587（C7），1071（C1′），1401（C2′），1357（C3′），1499（C4′），1068（C5′），1137（C6′），1588（C7′），610（OMe3），567（OMe4′）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道[14]對比，故鑒定化合物4為3，4′二甲氧基鞣花酸。

[參考文獻(xiàn)]

[1]趙奎君 狼毒類生藥原植物調(diào)查及分類鑒定研究[J] 中國中藥雜志， 1995， 20（1）： 56

[2]中國藥典一部 [S] 2015： 269

[3]嚴(yán)小紅， 王燦堅， 江英橋 狼毒的化學(xué)成分、藥理作用及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究概況[J] 現(xiàn)代中藥， 2009， 29（6）： 67

[4]Yuan W J， Yang G P， Zhang J H， et al Three new diterpenes with cytotoxic activity from the roots of Euphorbia ebracteolata Hayata[J] Phytochem Lett， 2016， 18： 176

[5]Liu Zh G， Li Zh L， Bai J， et al Antiinflammatory diterpenoids from the roots of Euphorbia ebracteolata[J] J Nat Prod， 2014， 77（4）： 792

[6]許蘇丹 中藥狼毒的抗結(jié)核作用[J] 浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2012， 22（1）： 67

[7]張爽 結(jié)核靈片聯(lián)合化療對初治菌陽肺結(jié)核病有效性及安全性評價[J] 中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育， 2016， 14（21）： 75

[8]鄧彬， 穆淑珍， 黃烈軍， 等 月腺大戟中二萜類化學(xué)成分的研究[J] 中國中藥雜志， 2009， 34（6）： 789

[9]Zhang N， Cai H， Cai B， et al Two new cytotoxic acetophenone derivatives from Euphorbia ebracteolata Hayata [J] Fitoter， 2009， 81（5）： 385

[10]王文祥，丁杏苞 月腺大戟根中的乙酰間苯三酚類衍生物[J] 藥學(xué)學(xué)報， 1999， 34（7）：35

[11]Da J， Wu W Y， Hou J J， et al Comparison of two officinal Chinese pharmacopoeia species of Ganoderma based on chemical research with multiple technologies and chemometrics analysis [J] J Chromatogr A， 2012 （1222）：59

[12]趙巧麗， 吳增寶， 鄭智慧 顯脈羊蹄甲中酚酸類成分研究[J] 藥學(xué)學(xué)報， 2011， 46（8）：946

[13]Zhang Y J， DeWitt D L， Murugesan S， et al Novel lipidperoxidation and cyclooxygenaseinhibitory tannins from Picrorhiza kurroa seeds[J] Chem Biodiver， 2004， 1（3）：426

[14]Zhang F， Fu T J， Peng Sh L， et al Two new triterpenoids from the roots of Sanguisorba officinalis L [J] J Integr Plant Biol， 2005， 47（2）：251

[責(zé)任編輯丁廣治]