梁健梅+周志君+盧宇青

[摘要] 目的 探討CD133在子宮內(nèi)膜癌患者中的表達(dá)及患者侵襲轉(zhuǎn)移高危因素。 方法 取2014年12月～2016年12月醫(yī)院收治子宮內(nèi)膜癌患者組織30例作為研究對(duì)象，設(shè)為觀察組，取同期因異常子宮出血入院行宮腔鏡檢查的30例子宮內(nèi)膜組織，設(shè)為對(duì)照組。采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定兩組組織CD133表達(dá)情況，分析CD133與子宮內(nèi)膜癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 結(jié)果 免疫組化結(jié)果顯示：在正常子宮內(nèi)膜組織中CD133多數(shù)呈陰性表達(dá)，僅少數(shù)在包膜、胞質(zhì)中存在輕微的陽性反應(yīng)；子宮內(nèi)膜癌組織中24例CD133呈陽性表達(dá)，陽性率為80.0%，細(xì)胞多呈強(qiáng)棕黃色包膜染色；子宮內(nèi)膜癌組織CD133表達(dá)水平與年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；子宮內(nèi)膜癌組織CD133表達(dá)水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及腫瘤類型關(guān)系密切（P<0.05）。 結(jié)論 CD133在子宮內(nèi)膜癌患者中呈高表達(dá)，且與患者侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，有助于預(yù)測(cè)腫瘤的生物行為，值得推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] CD133；子宮內(nèi)膜癌；侵襲轉(zhuǎn)移；高危因素；生物行為

[中圖分類號(hào)] R737.77 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2017）13-178-04

[Abstract] Objective To investigate the expression of CD133 in patients with endometrial carcinoma and the risk factors of invasion and metastasis. Methods 30 cases of patients with endometrial carcinoma tissue cured in our hospital from December 2014 to December 2016 were selected as the observation group.During the same period，30 cases of endometrial carcinoma because of abnormal uterine bleeding were selected as control group.Immunohistochemistry was used to detect the expression of CD133 in 2 groups，and the relationship between CD133 and invasion and metastasis of endometrial carcinoma were analyzed. Results The results of immunohistochemistry showed that the expression of CD133 in normal endometrium in the most negative，only a few in the capsule，cytoplasm positive reaction was mild.24 cases of CD133 expression in endometrial carcinoma showed positive，the positive rate was 80%，the cells showed strong brown envelope staining.Endometrial carcinoma the CD133 levels and age had no significant difference（P>0.05）.The CD133 expression in endometrial carcinoma was close to the level of tumor size， lymph node metastasis，clinical staging and tumor type （P<0.05）. Conclusion CD133 is highly expressed in patients with endometrial cancer.It is closely related to the invasion and metastasis of patients，which is helpful to predict the biological behavior of tumor.It is worthy of popularization and application.

[Key words] CD133；Endometrial carcinoma；Invasion and metastasis；Risk factors；Biological behavior

子宮內(nèi)膜癌（EC）是臨床上常見的疾病，屬于女性生殖器官惡性腫瘤，且隨著人們生活方式的改變，導(dǎo)致EC發(fā)生率呈現(xiàn)上升及年輕化趨勢(shì)，嚴(yán)重影響我國女性健康[1]。目前，臨床上對(duì)于EC發(fā)病機(jī)制尚不完全知曉，而成體干細(xì)胞的子宮內(nèi)膜干細(xì)胞可能涉及腫瘤啟動(dòng)、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等[2]。研究表明[3]腫瘤干細(xì)胞在白血病和一系列實(shí)體腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，并且能表達(dá)一種或多種細(xì)胞表面標(biāo)記物。CD133作為常見的表面標(biāo)志物，最早于國外學(xué)者在造血干細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，并且在腦腫瘤、前列腺癌、結(jié)直腸癌、卵巢等等實(shí)體瘤中均可表達(dá)[4-5]。目前，臨床上對(duì)于CD133在子宮內(nèi)膜癌患者中的研究及與患者侵襲轉(zhuǎn)移高危因素研究相對(duì)較少。為了探討CD133在子宮內(nèi)膜癌患者中的表達(dá)及患者侵襲轉(zhuǎn)移高危因素。本研究選取2014年12月～2016年12月本院收治子宮內(nèi)膜癌患者組織30例作為研究對(duì)象，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選取2014年12月～2016年12月本院收治子宮內(nèi)膜癌患者組織30例作為研究對(duì)象，設(shè)為觀察組，年齡41～72歲，平均（57.5±5.4）歲。腫瘤類型：子宮內(nèi)膜樣腺癌8例，子宮內(nèi)膜漿液性乳頭狀腺癌9例，子宮內(nèi)膜黏液腺癌6例，子宮內(nèi)膜透明細(xì)胞癌4例，其他3例。臨床分期：13例I期，10例II期，5例III期，2例IV期。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《婦產(chǎn)科學(xué)》[6-7]中關(guān)于子宮內(nèi)膜癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）均經(jīng)過生化指標(biāo)、手術(shù)病理檢查得到確診；（3）本課題均經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意，自愿簽署知情同意書。取同期因異常子宮出血入院行宮腔鏡檢查的30例子宮內(nèi)膜組織，設(shè)為對(duì)照組，年齡40～73歲，平均（57.0±5.3）歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）不符合納入標(biāo)準(zhǔn)及子宮內(nèi)膜癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)者；（2）合并嚴(yán)重心、肝、腎功能異常者；（3）資料不全或伴有其他惡性腫瘤者。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 主要儀器和試劑

為了保證試驗(yàn)的順利完成，采用的主要儀器和試劑主要由石蠟切片機(jī)、掃描電鏡、光學(xué)顯微鏡、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、恒溫水浴箱、Trizol試劑等，相關(guān)試劑和儀器廠家如下，見表1。

1.3 方法

采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定兩組組織CD133表達(dá)情況，取制備的乳腺癌組織和癌旁組織，采用10.0%甲醛液固定，石蠟包埋，制備4um厚連續(xù)切片。將切片放置在烘烤箱（60℃）下進(jìn)行1h烘烤，脫蠟至水，采用PH為7.2～7.4PBS緩沖液3次清洗，每次3min，采用濃度為3%H2O2溶液放在室溫下進(jìn)行20min孵育，將組織中內(nèi)源性過氧化物酶消除，采用PBS進(jìn)行3次沖洗，每次3min，加入1：10普通山羊血清進(jìn)行15min下孵育，減少非特異性抗原抗體結(jié)合。去除組織切片上的血清，滴加一抗（CD133單克隆抗體），4℃下過夜，室溫下放置1h，采用PBS進(jìn)行3次清洗，每次3min，加入生物素標(biāo)記的二抗，孵育30min，溫度為37℃。加入辣根過氧化物酶，孵育30min，溫度為37℃，采用PBS進(jìn)行3次清洗，每次3min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染8-10s，中性樹膠封片。根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量測(cè)定，在200倍光鏡下每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，每個(gè)視野測(cè)定3次后取平均值[8-9]。

1.4 評(píng)定方法

隨機(jī)選擇10個(gè)視野，在高倍鏡下每個(gè)視野取100個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)共分為5級(jí)。0分：染色細(xì)胞占總細(xì)胞<5%；1分：染色細(xì)胞占總細(xì)胞5%～25.0%；2分：染色細(xì)胞占總細(xì)胞25.0～50.0%；3分：染色細(xì)胞占總細(xì)胞50.0%～75.0%；4分：染色細(xì)胞占總細(xì)胞75%以上[10-11]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS18.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD133在子宮內(nèi)膜癌組織和宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

免疫組化結(jié)果顯示：正常子宮內(nèi)膜組織中CD133多數(shù)呈陰性表達(dá)，僅少數(shù)在包膜、胞質(zhì)中存在輕微的陽性反應(yīng)（見圖1-A）；子宮內(nèi)膜癌組織中24例CD133呈陽性表達(dá)，陽性率為80.0%，細(xì)胞多呈強(qiáng)棕黃色包膜染色（見圖1-B）。

2.2 子宮內(nèi)膜癌組織CD133與臨床資料相關(guān)性

相關(guān)性研究結(jié)果顯示：子宮內(nèi)膜癌組織CD133表達(dá)水平與年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；子宮內(nèi)膜癌組織CD133表達(dá)水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、腫瘤類型存在正相關(guān)性（P<0.05），見表2。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是臨床上常見的，發(fā)病早期臨床癥狀缺乏特異性，多數(shù)患者一旦確診已經(jīng)是中、晚期，從而錯(cuò)過了最佳治療時(shí)機(jī)，影響女性健康。目前，臨床上對(duì)于子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機(jī)制尚不完全知曉，多于干細(xì)胞有關(guān)[12]。國內(nèi)學(xué)者報(bào)道[13-14]：從腦腫瘤中分離CD133陽性細(xì)胞亞群呈干細(xì)胞特性，并且將100個(gè)CD133陽性細(xì)胞種植于裸鼠體內(nèi)能發(fā)生于人類原發(fā)瘤類型相同的腫瘤。從大的角度來說，CD133是一種相對(duì)分子量為120KDa，具有5個(gè)跨膜區(qū)的單肽鏈糖蛋白，主要由胞內(nèi)C端、兩個(gè)含有250個(gè)氨基酸殘基的糖計(jì)劃位點(diǎn)的胞外大環(huán)及胞外的N端結(jié)構(gòu)域組成，局限性的分布在細(xì)胞漿膜中，在多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用[15]。本研究中，免疫組化結(jié)果顯示：在正常子宮內(nèi)膜組織中CD133多數(shù)呈陰性表達(dá)，僅少數(shù)在包膜、胞質(zhì)中存在輕微的陽性反應(yīng)；子宮內(nèi)膜癌組織中24例CD133呈陽性表達(dá)，陽性率為80.0%，細(xì)胞多呈強(qiáng)棕黃色包膜染色。提示CD133在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高表達(dá)，能直接參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。為了進(jìn)一步驗(yàn)證CD133在子宮內(nèi)膜癌患者侵襲轉(zhuǎn)移中的表達(dá)，本課題對(duì)入組患者CD133水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及腫瘤類型進(jìn)行研究，結(jié)果顯示：子宮內(nèi)膜癌組織CD133表達(dá)水平與年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；子宮內(nèi)膜癌組織CD133表達(dá)水平與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及腫瘤類型關(guān)系密切（P<0.05）。提示CD133與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分析存在緊密的聯(lián)系，能參與子宮內(nèi)膜癌的侵襲、轉(zhuǎn)移，多于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力有關(guān)，但是對(duì)于CD133在子宮內(nèi)膜癌中的具體機(jī)制尚需要進(jìn)一步研究和探討[16]。

綜上所述，CD133在子宮內(nèi)膜癌患者中呈高表達(dá)，且與患者侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，有助于預(yù)測(cè)腫瘤的生物行為，值得推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2017-03-27）