洪麗君，曾清芳，盧昆林,戴鳳英

·論 著·

高爾基體磷蛋白3在卵巢癌中的表達(dá)及臨床意義

洪麗君，曾清芳，盧昆林,戴鳳英

目的 探討高爾基體磷蛋白3(GOLPH3)在卵巢癌中的表達(dá)及其與卵巢癌的臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。 方法 選取2007年1月至2012年1月在解放軍第180醫(yī)院行手術(shù)治療的132例卵巢癌患者組織標(biāo)本及80例卵巢良性腫瘤組織標(biāo)本，用免疫組織化學(xué)法檢測標(biāo)本中GOLPH3的表達(dá)水平，并分析其表達(dá)量與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，同時采用Kaplan-Meier法分析GOLPH3的表達(dá)水平與患者生存時間的關(guān)系。 結(jié)果 卵巢癌中GOLPH3的陽性表達(dá)率為72.7%，高于卵巢良性腫瘤(38.8%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。GOLPH3在Ⅲ期和Ⅳ期卵巢癌患者中的表達(dá)顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者，在高分化患者中的表達(dá)顯著低于中低分化患者(P<0.05)，而與年齡及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。生存曲線顯示GOLPH3低表達(dá)患者與高表達(dá)患者相比總生存期更長(P<0.05)。 結(jié)論 GOLPH3在卵巢癌中高表達(dá)，其高表達(dá)可能提示腫瘤惡性程度高，患者生存時間短、預(yù)后差。

卵巢癌；高爾基體磷蛋白3；免疫組化；預(yù)后

卵巢癌是死亡率最高的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病隱匿，進(jìn)展迅速，嚴(yán)重威脅世界范圍內(nèi)婦女的健康。盡管近年來隨著腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和化療藥物的不斷發(fā)展，卵巢癌患者的預(yù)后有所改善，但是Ⅲ期和Ⅳ期卵巢癌患者的5年生存率仍處于較低水平%[1]。因此，尋找卵巢癌治療的新靶點(diǎn)成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。高爾基體是蛋白和脂質(zhì)的加工平臺，參與細(xì)胞內(nèi)多種生理過程，在維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境平衡方面起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)高爾基體功能障礙可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，這成為近年來抗癌治療的重要靶點(diǎn)。高爾基體磷蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)是一種癌相關(guān)蛋白，研究表明其高表達(dá)于食管癌、肺癌、胃癌、卵巢癌及乳腺癌等多種實(shí)體腫瘤中，并與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[2]。本研究通過分析卵巢癌中GOLPH3的表達(dá)水平及其與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，探討GOLPH3在卵巢癌中的生物學(xué)功能。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2007年1月至2012年1月于解放軍第180醫(yī)院接受手術(shù)治療且術(shù)后病理證實(shí)為卵巢癌的病理組織標(biāo)本132例，患者年齡為31～72歲，平均(48.6±4.1)歲；手術(shù)病理分期(FIGO 2006)：Ⅰ期19例，Ⅱ期41例，Ⅲ期58例，Ⅳ期14例；組織學(xué)分級(WHO 2003)：高分化36例，中分化54例，低分化42例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移73例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例。所有患者均為初治，既往未接受放化療。選取同期卵巢良性腫瘤標(biāo)本80例。2組患者的年齡、身高、體重等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號：2007倫審第16號)，所有患者均知情同意并簽署同意書。

1.2 檢測方法 采用免疫組織化學(xué)SP法。石蠟組織標(biāo)本做4 μm連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，PBS沖洗3次，將切片浸泡于檸檬酸鈉緩沖液中行抗原修復(fù)，再用蒸餾水和PBS各沖洗3次；切片放入3%過氧化氫溶液中，室溫避光孵育25 min；PBS沖洗后滴加1∶10正常小牛血清，室溫下放置30 min；PBS沖洗后，加兔抗人GOLPH3多克隆抗體(購自英國Abcam公司，稀釋1∶200)，4 ℃冰箱內(nèi)孵育過夜；PBS洗滌，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG聚合物，室溫孵育15 min；PBS沖洗，加入鏈霉素親和素-過氧化物酶溶液，再行沖洗；滴加DAB顯色液，顯微鏡下觀察顯色程度，陽性為棕黃色或棕褐色，自來水沖洗終止反應(yīng)；蘇木精復(fù)染，鹽酸分化，氨水返藍(lán)，乙醇梯度脫水，中性樹膠封固，顯微鏡下觀察并分析結(jié)果。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 所有標(biāo)本均由2位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師分別雙盲閱片。免疫組化結(jié)果判定：每張切片隨機(jī)選取5個高倍鏡視野，根據(jù)染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行半定量分析[3]：①染色強(qiáng)度：未染色計0分，染色強(qiáng)度弱計1分，染色強(qiáng)度中等計2分，染色強(qiáng)度強(qiáng)計3分；②陽性細(xì)胞百分比：≤25%計1分，25%～50%計2分，50%～75%計3分，≥75%計4分。2項(xiàng)指標(biāo)得分相乘，得出結(jié)果作為GOLPH3免疫組化染色的評分結(jié)果，將0～8分定義為GOLPH3低表達(dá)，9～12分定義為GOLPH3高表達(dá)(陽性表達(dá))。

1.4 隨訪 全部病例均獲隨訪，隨訪時間為自患者手術(shù)至死亡或者2017年1月，隨訪期限為6～79個月，中位數(shù)為47個月。

2 結(jié) 果

2.1 GOLPH3在卵巢良惡性腫瘤中的表達(dá)比較 免疫組化結(jié)果顯示卵巢癌組織中GOLPH3的陽性表達(dá)率為72.7%(96/132)，而卵巢良性腫瘤組織中的陽性表達(dá)率為38.8%(31/80)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

a:卵巢癌；b：卵巢良性腫瘤

圖1 GOLPH3在卵巢良惡性腫瘤中的表達(dá)(SP ×400)

2.2 GOLPH3表達(dá)水平與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 GOLPH3表達(dá)水平與卵巢癌的FIGO分期和組織學(xué)分級有關(guān)，晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)患者中GOLPH3陽性表達(dá)率(82.4%)顯著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(60.3%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。高分化患者的表達(dá)水平(61.2%)顯著低于中低分化患者(79.5%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。此外，GOLPH3表達(dá)水平與年齡及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)(P>0.05)。見表1。

2.3 GOLPH3表達(dá)水平與卵巢癌患者生存預(yù)后的關(guān)系 GOLPH3高表達(dá)的患者5年生存率為21.9%(21/96)，顯著低于GOLPH3低表達(dá)的患者的38.9%(14/36)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；高表達(dá)GOLPH3的患者生存時間比低表達(dá)患者明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖2。

表1 GOLPH3表達(dá)與卵巢癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

臨床病理參數(shù)nGOLPH3表達(dá)水平高表達(dá)低表達(dá)χ2值P值年齡2 362>0 05 ≤50歲4529(64 4)16(35 6) >50歲8767(77 0)20(23 0)組織學(xué)分級5 198<0 05 G14930(61 2)19(38 8) G2/G38366(79 5)17(20 5)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1 874>0 05 有8052(65 0)28(35 0) 無5244(84 6)8(15 4)FIGO分期9 884<0 05 Ⅰ～Ⅱ期5835(60 3)23(39 7) Ⅲ～Ⅳ期7461(82 4)13(17 6)

圖2 GOLPH3表達(dá)與卵巢癌患者生存期的關(guān)系

3 討 論

卵巢癌是常見的婦科惡性腫瘤，在女性生殖系統(tǒng)腫瘤中發(fā)病率占第3位，而死亡率則高居首位。據(jù)統(tǒng)計，全球每年有超過22萬新發(fā)卵巢癌病例，每年約有1.4萬女性死于卵巢癌[4]。中國女性卵巢癌的發(fā)病率約為8.28/10萬，每年約1.5萬人死于卵巢癌[5]。由于卵巢位于盆腔深部，且早期卵巢癌患者沒有明顯癥狀及有效的檢查手段，因此70%～75%的患者診斷時已處于Ⅲ～Ⅳ期，嚴(yán)重影響了治療效果和預(yù)后[1]。近年來隨著手術(shù)技術(shù)和化療藥物的進(jìn)步，卵巢癌患者的治療效果有了一定的改善，但是由于復(fù)發(fā)、耐藥及放化療毒副反應(yīng)等因素，中晚期患者的生存時間和預(yù)后仍然處于較低的水平[6]。因此，深入探討卵巢癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，為卵巢癌的診斷和治療提供新的靶點(diǎn)是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。

GOLPH3是一種新發(fā)現(xiàn)的特異癌基因蛋白，屬于高爾基體基質(zhì)蛋白，由5p13基因編碼，參與執(zhí)行高爾基體的蛋白質(zhì)分選功能，從酵母到人類高度保守[7-8]。GOLPH3最初是在對小鼠高爾基體進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析時發(fā)現(xiàn)的，存在α、β兩種異構(gòu)體，與高爾基體反面的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)相連，主要分布于細(xì)胞質(zhì)膜和高爾基體，可影響高爾基體的分泌與轉(zhuǎn)運(yùn)功能。GOLPH3可與磷酸化磷脂酰肌醇4(Phosphorylation phosphatidyl inositol 4，PI4-P)結(jié)合，調(diào)控細(xì)胞內(nèi)囊泡的分泌，而囊泡的分泌已被證實(shí)在腫瘤中發(fā)揮重要作用[9-10]。

研究發(fā)現(xiàn)GOLPH3可參與細(xì)胞內(nèi)的受體循環(huán)、蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)和糖基化等多種反應(yīng)，而這些反應(yīng)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有潛在的聯(lián)系。Scott等[11]在多種實(shí)體腫瘤中對GOLPH3進(jìn)行基因組分析，發(fā)現(xiàn)GOLPH3在乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌及黑色素瘤等多種惡性腫瘤中表達(dá)異常增高，且其生物學(xué)功能與哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信號通路有關(guān)。mTOR信號通路可以通過多種途徑促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，如抑制細(xì)胞凋亡、參與血管形成及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖等[12-13]。Zeng等[14]研究發(fā)現(xiàn)GOLPH3在乳腺癌中的表達(dá)顯著高于正常乳腺組織，且表達(dá)越高的乳腺癌患者預(yù)后越差，生存時間越短。呂希利等[15]對比非小細(xì)胞肺癌組織與癌旁肺組織中GOLPH3的表達(dá)差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GOLPH3在癌組織中的表達(dá)水平顯著高于正常組織，且高表達(dá)的患者生存期較短，較早出現(xiàn)復(fù)發(fā)或死亡，認(rèn)為GOLPH3高表達(dá)可以作為判斷非小細(xì)胞肺癌患者不良預(yù)后的獨(dú)立因素。黃素真等[16]研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌組織中GOLPH3高表達(dá)，且其表達(dá)水平與臨床分期及預(yù)后呈正相關(guān)，認(rèn)為GOLPH3的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的惡性程度有關(guān)，可作為判斷該腫瘤生物學(xué)特性的指標(biāo)。此外，他們還發(fā)現(xiàn)GOLPH3的表達(dá)與Ki67增殖指數(shù)呈正相關(guān)，說明GOLPH3可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。本研究對比卵巢良惡性腫瘤組織中GOLPH3的表達(dá)，結(jié)果顯示GOLPH3在卵巢癌組織中存在過表達(dá)，且在晚期患者中的表達(dá)顯著高于早期患者，在高分化患者中的表達(dá)顯著低于中低分化患者，生存曲線顯示GOLPH3高表達(dá)的患者生存時間較短，預(yù)后較差，與上述學(xué)者的研究結(jié)果相符。

綜上所述，GOLPH3在卵巢癌組織中高表達(dá)，其表達(dá)水平與卵巢癌的惡性程度呈正相關(guān)，GOLPH3高表達(dá)可能預(yù)示著該腫瘤分化程度低、惡性程度高，患者生存時間較短，預(yù)后較差。GOLPH3有望成為卵巢癌治療的新靶點(diǎn)，但其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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(本文編輯：葉華珍； 英文編輯：王建東)

Expression and clinical significance of Golgi phosphoprotein 3 in ovarian cancer

HONG Li-jun, ZENG Qing-fang,LU Kun-lin, DAI Feng-ying

(DepartmentofObstetricsandGynecology,the180thHospitalofPLA,Quanzhou362000,Fujian,China)

Objective To investigate the expression level and clinical significance of Golgi phosphoprotein 3 (GOLPH3) in ovarian cancer. Methods Make a retrospective study of 132 patients with ovarian cancer and 80 patients with benign ovarian tumor, who were surgically treated in our hospital between January 2007 and January 2012. Expressions of GOLPH3 were detected in their tissue specimens by immunohistochemistry. The association of GOLPH3 expression with clinicopathologic parameters and overall survival of ovarian cancer was analyzed. Results The positive expression rate of ovarian cancer (72.7%) was higher than that of benign ovarian tumor (38.8%), the difference was statistically significant (P<0.05). In ovarian cancer, the expression of GOLPH3 was related with FIGO stage and pathologic grade with statistical significance (P<0.05). The expression of GOLPH3 in stage Ⅲ and Ⅳ was significantly higher than that in stage Ⅰ and Ⅱ patients, and the expression of patients with high differentiation was significantly lower than that of patients with low differentiation (P<0.05). However, it was not related with age and lymph node metastasis (P>0.05). Survival curve showed that low GOLPH3 expression levels were associated with significantly longer overall survival than high expression levels (P<0.05). Conclusion The expression of GOLPH3 was up-regulated in ovarian cancer, which was correlated with less differentiation, shorter survival time and poor prognosis.

Ovarian cancer; Golgi phosphoprotein 3; Immunohistochemistry; Prognosis

362000泉州，解放軍第180醫(yī)院婦產(chǎn)科

戴鳳英，E-mail：daifengying180@126.com

洪麗君，曾清芳，盧昆林,等.高爾基體磷蛋白3在卵巢癌中的表達(dá)及臨床意義[J].東南國防醫(yī)藥，2017,19(4):357-360.

R737.31

A

1672-271X(2017)04-0357-04

10.3969/j.issn.1672-271X.2017.04.006

2017-03-21;

2017-05-20)