黃碧華

（福建省林業(yè)科技試驗(yàn)中心，福建南靖363600）

浙江楠組培繁育叢芽技術(shù)＊

黃碧華

（福建省林業(yè)科技試驗(yàn)中心，福建南靖363600）

通過不同培養(yǎng)基和不同激素及不同濃度對(duì)浙江楠組培各階段的影響研究，篩選出浙江楠組培誘導(dǎo)和增殖階段的最佳組培配方。試驗(yàn)研究結(jié)果表明：浙江楠初代誘導(dǎo)培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為B5+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.2mg·L-1，繼代增殖叢芽最佳培養(yǎng)基B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1.0mg·L-1+NAA0.6mg·L-1。

浙江楠；組織培養(yǎng)；增殖培養(yǎng)

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2013年底在開展浙江楠優(yōu)樹篩選的基礎(chǔ)上，采集優(yōu)樹的種子，2014年在福建省林業(yè)科技試驗(yàn)中心無板橋基地苗圃進(jìn)行優(yōu)樹家系育苗測試，在苗圃篩選出一株優(yōu)樹子代超級(jí)苗，采集其嫩梢和側(cè)芽作為組培誘導(dǎo)的材料。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體采集和消毒處理

從優(yōu)選出的浙江楠1a生超級(jí)苗上剪取嫩梢及其苗木中上部腋芽飽滿、節(jié)間較短的枝條作為外植體，去除葉片，保留葉柄，長度約10cm，用毛刷輕刷洗凈附于莖枝上的細(xì)絨毛和其它粘著物，放在自來水流動(dòng)沖洗1～2h，然后放至接種室超凈工作臺(tái)上，用70～75%酒精消毒20s，用無菌水清洗1遍，再轉(zhuǎn)入0.15%升汞溶液中消毒時(shí)間設(shè)置為4個(gè)梯度：3min、5min、8min和10min，消毒完后用無菌水沖洗外植體4～5遍，并置于經(jīng)過高溫消毒的濾紙上瀝干，然后將枝條切割成1.0～1.5cm不等的莖段，每莖段帶1個(gè)腋芽，14d后統(tǒng)計(jì)外植體的污染率和存活率[7]。

1.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基篩選

采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)浙江楠的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行配制，各基礎(chǔ)培養(yǎng)基、激素以及激素濃度的設(shè)置如表1所示（為控制隨機(jī)誤差，將其中一因素設(shè)計(jì)為空白）。然后依據(jù)正交設(shè)計(jì)表對(duì)所設(shè)計(jì)的9個(gè)處理對(duì)浙江楠進(jìn)行初代培養(yǎng)試驗(yàn)，每處理50瓶，每瓶1個(gè)，3個(gè)重復(fù)。一段時(shí)間后調(diào)查統(tǒng)計(jì)萌芽率不定芽數(shù)，并通過方差分析和顯著性檢驗(yàn)，篩選出最優(yōu)誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方。

表1 浙江楠誘導(dǎo)培養(yǎng)正交試驗(yàn)因素及水平表

表2 浙江楠初代培養(yǎng)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

1.2.3 繼代增殖培養(yǎng)基篩選

以B5、1/2MS、MS為基本培養(yǎng)基，分別添加不同激素（6-BA、KT、NAA），形成4因素3水平、9個(gè)處理的正交設(shè)計(jì)（見表3、4）。每個(gè)處理50瓶，每瓶1個(gè)莖段，每個(gè)徑段帶1個(gè)腋芽，試驗(yàn)重復(fù)3次。一段時(shí)間后調(diào)查統(tǒng)計(jì)其平均增殖倍數(shù)，并進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn)。

表3 繼代增殖培養(yǎng)正交試驗(yàn)因素及水平表

表4 浙江楠繼代增殖正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

1.3 培養(yǎng)條件

在浙江楠誘導(dǎo)階段、繼代增殖培養(yǎng)試驗(yàn)時(shí)，外植體接種后，因?yàn)槭悄颈局参?，切口容易產(chǎn)生褐化，為防止此種現(xiàn)象的發(fā)生，在接種后需進(jìn)行7～10d的暗光培養(yǎng)處理。光照培養(yǎng)階段，光照時(shí)間設(shè)為12h·d-1、溫度為（25±2）℃、光照強(qiáng)度1500～3000Lux。誘導(dǎo)（初代）培養(yǎng)蔗糖用量為15g·L-1，、繼代培養(yǎng)蔗糖用量增為30g·L-1，抗壞血酸5mg，半胱氨酸5mg·L-1，瓊脂粉7g·L-1，酸堿度PH為5.8。誘導(dǎo)培養(yǎng)和繼代增殖培養(yǎng)試驗(yàn)，觀察統(tǒng)計(jì)時(shí)間為培養(yǎng)30d一周期[8-9]。

2 結(jié)果與分析

2.2.1 浙江楠無菌體系的建立

從表5可以看出，采用HgCl2進(jìn)行消毒，隨著時(shí)間的增長，外植體的污染率不斷降低，存活率先上升而后下降。當(dāng)消毒時(shí)間為5 min時(shí)，污染率為26%，存活率最高，可達(dá)42%。

表5 HgCl2消毒時(shí)間對(duì)外植體污染率和存活率的影響

2.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)浙江楠初代培養(yǎng)的影響

從正交試驗(yàn)結(jié)果（表6）分析可以得出，3個(gè)因素對(duì)浙江楠誘導(dǎo)萌芽的影響力的大小順序?yàn)椋夯九囵B(yǎng)基＞6-BA＞NAA，即基本培養(yǎng)基對(duì)其不定芽數(shù)的萌芽的影響力（A）＞6-BA對(duì)其不定芽數(shù)的萌芽的影響力（B）＞NAA對(duì)其不定芽數(shù)的萌芽的影響力（C）。由表6的分析結(jié)果還可發(fā)現(xiàn)，不同因素組合的培養(yǎng)基，其誘導(dǎo)出的不定芽數(shù)不同，高濃度6-BA和NAA的培養(yǎng)基上的不定芽數(shù)差異顯著。不定芽數(shù)量最大的處理為1，平均倍數(shù)為3.6個(gè)；其次是處理2，增殖倍數(shù)為3.1個(gè)。處理8和處理9誘導(dǎo)的不定芽數(shù)均較少，這是因?yàn)樘幚?和處理9的基本培養(yǎng)基為White，該培養(yǎng)基對(duì)木本植物的生長有抑制作用，并在較高6-BA濃度均為1.0mg·L-1和2.0mg·L-1的環(huán)境下萌芽效果不好。綜合以上分析，誘導(dǎo)不定芽誘導(dǎo)數(shù)以處理1為最佳。因此，浙江楠誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為B5+6-BA（0.5mg·L-1）+NAA（0.2mg·L-1），能獲得分化能力較強(qiáng)且健康的不定芽。

表6 浙江楠初代培養(yǎng)誘導(dǎo)萌芽正交試驗(yàn)結(jié)果

2.2.3 繼代培養(yǎng)基對(duì)浙江楠增殖的影響

繼代增殖培養(yǎng)，是植物組織培養(yǎng)能否順利并投入擴(kuò)繁生產(chǎn)推廣的關(guān)鍵，也是植物離體快繁的主要階段。本試驗(yàn)研究中，將長度約1.5cm左右的單芽切下轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。由表7結(jié)果分析可看出，4個(gè)因素對(duì)其增殖倍數(shù)影響的主次關(guān)系為：B＞C＞D＞A，即6-BA對(duì)浙江楠繼代增殖倍數(shù)影響力（A）＞KT對(duì)其繼代增殖倍數(shù)的影響力（B）＞NAA對(duì)其繼代增殖倍數(shù)的影響力（D）＞基本培養(yǎng)基其繼代對(duì)增殖倍數(shù)的影響力（C）。不同水平的6-BA、KT、NAA對(duì)增殖倍數(shù)的影響顯著差異。理論上浙江楠最佳的增殖培養(yǎng)基應(yīng)為B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1. 0mg·L-1，但由于這一方案并未出現(xiàn)在已做的試驗(yàn)中，而且在本試驗(yàn)中，增殖倍數(shù)最高的處理為2，平均倍數(shù)為4.80；其次是處理5，增殖倍數(shù)為4.60，但處理2和處理5兩組增殖倍數(shù)差異不顯著。浙江楠最佳的增殖培養(yǎng)基為B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1.0mg·L-1+NAA0.6mg·L-1或者1/2MS+6-BA0.8mg·L-1+NAA0.6。

表7 浙江楠繼代培養(yǎng)正交試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

采用莖段為外植體培養(yǎng)浙江楠組培苗，初代培養(yǎng)中誘導(dǎo)不定芽分化的最佳培養(yǎng)基是B5+6-BA0.5mg· L-1+NAA0.2mg·L-1，誘導(dǎo)存活率可達(dá)42%，采用此配方能獲得分化能力較強(qiáng)的不定芽。浙江楠繼代增殖培養(yǎng)基以B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1.0mg·L-1+NAA0.6mg·L-1、1/2MS+6-BA0.8mg·L-1+NAA0.6為最佳的增殖培養(yǎng)基配方，增殖倍數(shù)可達(dá)4倍以上。

由于組織培養(yǎng)中所選擇的激素種類比較多，并且激素的種類、濃度不同，浙江楠組培效果各異。篩選最為經(jīng)濟(jì)、穩(wěn)定、高效的培養(yǎng)基配方，降低經(jīng)濟(jì)成本，提高工廠化育苗效益還有需要進(jìn)一步探索。

[1]許智宏．植物生物技術(shù)[M]．上?？茖W(xué)出版社，1998：245．

[2]朱建華，彭士勇編．植物組織培養(yǎng)實(shí)用技術(shù)[M]．中國計(jì)量出版社，2002：67-72．

[3]陳正華．木本植物組織培養(yǎng)及其應(yīng)用[M]．北京：高等教育出版社，1994．

[4]譚文澄．觀賞植物試管組培的研究[J]．甘肅林業(yè)科學(xué)，1991，（4）：11-14．

[5]吳中倫編．中國主要外來樹種引種[M]．北京：中國林業(yè)出版社，1994

[6]曹孜儀．劉國民實(shí)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程[M]．蘭州：甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，1966：98-102．

[7]陳春，陳孝丑．黃枝潤楠組培快繁技術(shù)研究[J]，林業(yè)科技開發(fā)，2015，29（6）：82-84．

[8]祈述雄．中國按樹：第二版[M]．北京：中國林業(yè)出版社，2002．

[9]中國植物志編輯委員會(huì)．中國植物志（第十九卷）[M]．北京：科學(xué)出版社，1999．

責(zé)任編輯/羅美娟

The Technique of Bud Propagation in Tissue Culture of

Huang Bihua
(Fujian Forestry Science and Technology Test Center,Nanjing Fujian 363600,China.)

S792.24

A

1003-4382（2017）02-0045-04

2017-01-05

2017-02-09

黃碧華（1973-），女，本科，工程師，主要從事植物組織培養(yǎng)工作。