賈卓鵬，金 林，車紅民

(西安醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，西安 710077)

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載脂蛋白E基因多態(tài)性和腦出血的相關性

賈卓鵬，金 林，車紅民

(西安醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，西安 710077)

目的 探討血漿載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)基因多態(tài)性和腦出血的相關性。 方法 檢測189例原發(fā)性高血壓腦出血患者及61例健康對照ApoE基因多態(tài)性，患者依腦出血部位(腦葉、基底節(jié)、腦干、小腦)進行臨床分型，比較ApoE基因型和等位基因頻率與腦出血及其臨床分型之間的關系；比較腦出血患者含有ε4等位基因型組與非ε4等位基因型組入院時GCS(Glasgow coma scale)評分及入院1月后GOS(Glasgow outcome score)評分。 結果 ①腦葉出血組等位基因ε4頻率顯著高于對照組(P<0.05)，其余組與對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。②含有ε4等位基因型腦出血組較非ε4等位基因型組腦出血入院時GCS無顯著差異(P>0.05)，但入院1月后含有ε4等位基因型腦出血組GOS評分預后不良明顯高于非ε4等位基因型組(P<0.05)。 結論 ApoE ε4等位基因增加了腦葉出血的風險，含有ε4等位基因型的腦出血患者預后不佳。

載脂蛋白E； 基因多態(tài)性； 腦出血

載脂蛋白E(ApoE)是血漿中重要載脂蛋白之一，具有多態(tài)性，參與機體脂質(zhì)代謝及調(diào)節(jié)膽固醇平衡。腦組織中脂質(zhì)和膽固醇的轉運主要通過ApoE進行調(diào)節(jié)?，F(xiàn)對于載脂蛋白E基因多態(tài)性和腦出血的相關性存在爭論[1]。為進一步明確相關性，我們采用PCR-RFLP(限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應)技術對原發(fā)性高血壓腦出血和正常人群組ApoE基因多態(tài)性進行測定。

1 對象與方法

1.1 一般資料

選取2014-01～2015-10在我院住院的原發(fā)性高血壓腦出血患者189例(男98例，女91例)，平均年齡(60.1±5.7)歲。原發(fā)性高血壓腦出血嚴格按照1995年中國腦出血診治指南[2]。對照組為同期門診非心腦血管疾病健康體檢者61例(男30例，女31例)，平均年齡(61.4±8.7)歲。所有研究對象均由本人或家屬簽署知情同意書，兩組年齡、性別差異無統(tǒng)計學意義。排除標準：外傷、腫瘤、藥物、血液病所致的腦出血者；自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下隙出血；動靜脈畸形、靜脈竇血栓、顱內(nèi)動脈瘤所致出血；發(fā)病后行外科治療者；合并有肝腎、造血系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾??；合并阿爾茨海默?。蝗朐呵?周內(nèi)使用調(diào)脂和降糖等藥物者。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 對兩組受檢者，均抽取晨起7時空腹靜脈血5 ml，3.8%檸檬酸鈉抗凝。采用鹽析法提取外周血白細胞的基因組DNA，置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 ApoE基因多態(tài)性進行測定 ApoE基因具有多態(tài)性，包含E2/2、E3/3、E4/4、E2/3、E2/4、E3/4六種基因型。ApoE的PCR擴增引物序列如下[3]：上游引物5′-ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACACTGCCA-3′;下游引物5′-TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA-3′。反應體積為25 μl，PCR擴增反應條件：95 ℃預變性5 min，95 ℃變性1 min，58 ℃退火變性1 min，72 ℃延伸1 min，共32個循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min。擴增產(chǎn)物于2%瓊脂凝膠(溴化乙錠染色)上以120 V電壓電泳20 min，于紫外燈下觀察并攝影。

1.2.3 apoE基因型判定 限制性內(nèi)切酶酶切反應體系為20 μl，反應終止后取酶切產(chǎn)物于10%聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳，并在紫外凝膠成像儀下觀察結果并照相。參考標準物根據(jù)長度片段確定待測樣品apoE基因型。等位基因頻率采用平衡法：ε2=apoE E2/2+1/2(apoE E2/3+apoE E2/4)；ε3=apoE E3/3+1/2(apoE E2/3+apoE E3/4)；ε4=apoE E4/4+1/2(apoE E3/4+apoE E2/2)，即通過基因型頻率計算等位基因頻率，一個等位基因的頻率等于它的純合子頻率與1/2雜合子頻率之和。

1.2.4 GCS評分及GOS評分 腦出血患者入院時行GCS評分，發(fā)病1月時行GOS評分，其中4-5分為預后良好，1-3分為預后不良。

2 結果

2.1 ApoE基因型和等位基因頻率在腦出血組與對照組間比較

腦出血組與對照組均以E3/3基因型出現(xiàn)頻率最高,兩組基因型與等位基因頻率對比ε3等位基因頻率減低，ε4等位基因頻率增加，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05，見表1)。但在腦出血各臨床分型中，腦葉出血組等位基因ε4頻率顯著高于對照組，且差異有無統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表1)。

表1 腦出血與對照組間 APOE 基因型和等位基因頻率比較 Table 1 Comparison of ApoE genotype and allele frequency between normal control group and cerebral hemorrhage group

組別nApoE基因型頻率apoE等位基因頻率E2/2E2/3E2/4E3/3E3/4E4/4ε2ε3ε4對照組610.016(1)0.115(7)0.033(2)0.704(43)0.163(8)0 0.0900.8430.098 腦出血組1890.016(3)0.116(22)0.079(15)0.619(117)0.132(25) 0.037(7)0.1130.7430.143 腦葉組620.016(1)0.129(8)0.097(6)0.500(31)0.161(10) 0.097(6)0.1290.6450.226* 基底節(jié)組670.015(1)0.104(7)0.075(5)0.672(45)0.120(8) 0.015(1)0.1040.7840.113 腦干組290 0.103(3)0.069(2)0.690(20)0.138(4)0 0.0860.8100.104 小腦組310.032(1)0.129(4)0.065(2)0.677(21)0.097(3)0 0.1290.7900.081

與對照組對比,*P<0.05

2.2 腦出血患者含有ε4基因型組與非ε4基因型組入院時GCS及入院1月后GOS對比

兩組入院時GCS評分無統(tǒng)計學差異，但在入院1月后GOS評分時，含有ε4基因型組預后不良率增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表2)。

3 討論

編碼ApoE蛋白的基因位于19號染色體的長臂上,含有4個外顯子及3個內(nèi)含子，其構成具有多態(tài)性,其等位基因是ε2、ε3和ε4,它們相應編碼合成ApoE蛋白的3種純合子(E2/2、E3/3、E4/4)及三種雜合子(E2/3、E2/4、E3/4)[4]。其基因型的區(qū)別在于第112位和第158位上半胱氨酸(Cys)和精氨酸(Arg)的互換[5]。ApoE參與機體血脂代謝及調(diào)節(jié)膽固醇平衡，在動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用[6]。載脂蛋白通過調(diào)節(jié)酶和受體活性來調(diào)控脂蛋白的代謝及脂質(zhì)在血漿中的轉運。腦是ApoE的第二大合成器官，主要由星形膠質(zhì)細胞、小膠質(zhì)細胞和少突膠質(zhì)細胞合成[7]。因為腦組織中缺乏載脂蛋白A，所以ApoE是腦脊液中的主要載脂蛋白，承擔著調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)脂代謝的重要功能。由于血脂和脂蛋白代謝異常在腦出血的發(fā)生及預后起著重要作用，故ApoE可能與腦出血的發(fā)生進展相關。

表2 腦出血ε4攜帶者與非ε4攜帶者入院GCS評分及入院1月后GOS評分對比

Table 2 Comparison of GCS and GOS between ε4 cerebral hemorrhage group and non-ε4 cerebral hemorrage group

組別 nGCS評分GOS評分[例(%)]預后良好預后不良ε4攜帶者4711.7±3.128(59.6)19(40.4)*非ε4攜帶者14212.1±2.4113(79.6)29(20.4)

與非ε4攜帶者對比,*P<0.05

目前，國內(nèi)外越來越多的研究顯示ApoE基因多態(tài)性與缺血性腦卒中具有相關性，但對于其與腦出血的關系研究，結果存在較大的分歧。國外一些學者發(fā)現(xiàn)ApoEε2和ε4等位基因與腦出血相關[8]。Kokubo等[9]發(fā)現(xiàn)日本農(nóng)村人群中，ε2和ε4等位基因是腦出血的危險因素。也有一些研究認為Apo E與腦出血發(fā)病不相關[10]。本研究顯示對于廣義腦出血及常見的動脈粥樣硬化相關基底節(jié)區(qū)出血，與ApoE基因多態(tài)性無明顯相關性，但ε4等位基因與腦葉出血具有相關性。分析主要是因為apoE特別是apoE4易與具有神經(jīng)毒性的β樣淀粉蛋白Aβ結合,使之成為穩(wěn)定的能夠抵抗水解的復合物，影響Aβ的清除,淀粉樣蛋白的沉積在腦血管壁能使血管中層變薄內(nèi)膜增厚，導致血管的完整性受損，稱之為腦血管淀粉樣變(CAA)[11]。CAA所致腦出血多為腦葉出血。

ApoE不僅在血脂代謝中具有重要意義，而且還參與神經(jīng)細胞修復與免疫調(diào)節(jié)作用，具有重要的病理生理意義。本研究顯示攜帶ApoEε4腦出血患者入院時GCS評分與非ε4攜帶者對比無差異性，提示其并不影響發(fā)病時病情程度，但攜帶ApoEε4腦出血患者預后不良的比例明顯增高，具有差異性。ApoE在腦內(nèi)參與磷脂的代謝，維持了細胞間脂類的重新分布及膽固醇內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，并參與神經(jīng)的發(fā)育及神經(jīng)細胞損傷后的修復再生時的脂質(zhì)活動以及脂質(zhì)免疫調(diào)節(jié)和細胞調(diào)節(jié)[12]。

本研究表明，ApoE基因多態(tài)性不僅與腦葉出血的發(fā)生有關，而且與腦出血的預后相關。目前，腦出血的預防多是針對一些傳統(tǒng)危險因素的控制和預防，而研究ApoE基因多態(tài)性對腦出血發(fā)病機制的認識，有利于通過對分子遺傳學的危險因素的識別進行腦出血的一二級預防。

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Correlation between apolipoprotein E gene polymorphism and cerebral hemorrhage

JIA Zhuopeng，JIN Lin，CHE Hongmin

(DepartmentofNeurosurgery,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity,Xi’an710077,China)

ObjectiveTo explore the correlation between the plasma apolipoprotein E(ApoE)gene polymorphism and the cerebral hemorrhage.MethodsPlasma apolipoprotein E gene polymorphism was detected in 189 hypertensive patients with cerebral hemorrhage and 61 healthy controls.The relationships of ApoE genotype and allele frequency with the cerebral hemorrhage were analyzed.The Glasgow coma scale(GCS)score at the admission and Glasgow outcome score(GOS)score at 1 month after admission were compared among the cerebral hemorrhage patients with epsilon 4(ε4)alleles and without the epsilon 4 alleles.Results① The frequencies of epsilon4 alleles in cerebral lobes hemorrhage group were significantly higher than that in normal control group(P<0.05).② There was no significant difference in GCS between cerebral hemorrhage patients with epsilon 4(ε4)alleles and without the epsilon 4 alleles at the admission(P>0.05).The rate of defective prognosis in the cerebral hemorrhage with ε4 was significantly higher than that of patients without ε4 at 1 month after the admission(P<0.05).ConclusionThe subjects carrying ApoE epsilon4 alleles is liable for incidence of cerebral lobe hemorrhage,and the cerebral hemorrhage patients with ε4 may have poor prognosis.

apolipoprotein E； gene polymorphism； cerebral hemorrhage

西安醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院科研基金資助項目(XYFY13-10)

賈卓鵬，男，1978-10生，碩士，主治醫(yī)師，E-mail：kenny19781004@163.com

2016-11-17

R743.34

A

1007-6611(2017)04-0365-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.04.014