彭素曉 常志強 馬 驪 李 健*

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海201306；2.農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用重點開放實驗室，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，青島266071)

海帶渣添加比例及其酶解產(chǎn)物對凡納濱對蝦生長、消化和非特異性免疫力的影響

彭素曉1,2常志強2馬 驪1,2李 健2*

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海201306；2.農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用重點開放實驗室，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，青島266071)

為探究海帶渣添加比例及其酶解產(chǎn)物對凡納濱對蝦生長、消化和非特異性免疫力的影響，本試驗進行了如下2個試驗：海帶渣適宜添加比例試驗和海帶渣酶解產(chǎn)物應(yīng)用效果試驗。海帶渣適宜添加比例試驗(試驗1)：采用單因素試驗設(shè)計，配制海帶渣添加比例分別為0(對照組)、0.5%、1.0%、2.0%、3.0%、5.0%的6種飼料(分別記為D1～D6組)，投喂初始體重為(1.00±0.10) g的凡納濱對蝦49 d后，對對蝦的生長性能指標(biāo)以及胃消化酶、血清非特異性免疫酶的活性進行測定。每組3個重復(fù)，每個重復(fù)35尾對蝦。海帶渣酶解產(chǎn)物應(yīng)用效果試驗(試驗2)：在試驗1得出海帶渣適宜添加比例為3.0%的基礎(chǔ)上，以試驗1中添加3.0%海帶渣飼料作為海帶渣對照組(A組)，再分別用β-葡聚糖酶酶解海帶渣(B組)和蛋白酶酶解海帶渣(C組)等量替代A組飼料中的海帶渣，投喂初始體重為(1.00±0.1) g的凡納濱對蝦56 d，試驗結(jié)束后測定對蝦的生長性能指標(biāo)以及胃消化酶、血清非特異性免疫酶的活性。每組3個重復(fù)，每個重復(fù)35尾對蝦。試驗1結(jié)果顯示：D4、D5組對蝦的特定生長率、增重率顯著高于對照組(P<0.05)，D5組對蝦的飼料系數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)；隨著海帶渣添加比例的增加，胃中胃蛋白酶及血清中酚氧化酶、超氧化物歧化酶的活性呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢，上述3種酶的活性均以D5組最高，且D5組血清中酚氧化酶、超氧化物歧化酶的活性顯著高于對照組(P<0.05)。試驗2結(jié)果顯示：與未經(jīng)酶解的海帶渣相比，海帶渣經(jīng)β-葡聚糖酶酶解后可顯著提高對蝦的增重率和特定生長率(P<0.05)，并能顯著降低飼料系數(shù)(P<0.05)，海帶渣經(jīng)蛋白酶酶解后可顯著提高對蝦的成活率(P<0.05)；B和C組對蝦的胃中纖維素酶活性較A組顯著降低(P<0.05)；B和C組血清中酸性磷酸酶、酚氧化物酶活性以及C組血清中超氧化物歧化酶活性顯著高于A組(P<0.05)。由此得出，凡納濱對蝦飼料中海帶渣的適宜添加比例為3.0%。海帶渣經(jīng)β-葡聚糖酶酶解后可促進凡納濱對蝦生長，提高其非特異性免疫力；而海帶渣經(jīng)蛋白酶酶解后可提高凡納濱的非特異性免疫力，對其生長無促進作用。

海帶渣；酶解產(chǎn)物；南美白對蝦；生長性能；消化酶；非特異性免疫酶

凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)，又稱南美白對蝦，具有生長速度快、抗病能力強、抗逆性強等特點，是目前世界上養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的三大蝦類之一，養(yǎng)殖經(jīng)濟效益顯著。在凡納濱對蝦的養(yǎng)殖生產(chǎn)中，營養(yǎng)全面的飼料是對蝦健康養(yǎng)殖的基礎(chǔ)[1]，合適的原料是保障飼料營養(yǎng)全面的關(guān)鍵，但是目前飼料原料的種類和資源有限，所以開發(fā)適宜的飼料原料具有重要意義。

海帶(LaminariajaponicaAresch)屬于大型褐藻類植物，是我國主要海藻養(yǎng)殖品種之一，其生產(chǎn)環(huán)境優(yōu)越，可以富集多種維生素、微量元素及促進生長的活性因子，營養(yǎng)豐富且動物吸收利用率高[2]。目前，我國海帶加工已逐步形成了以褐藻膠、甘露醇、碘為主要產(chǎn)品的工業(yè)體系，但是海帶的工業(yè)利用率僅為30%左右，剩余的海帶渣仍有大量成分，如蛋白質(zhì)、纖維素和礦物質(zhì)等，尚未得到充分開發(fā)利用，不但造成大量海帶自然生物資源的浪費，而且在生產(chǎn)過程中會有大量富含有機質(zhì)和營養(yǎng)鹽的廢渣排放，成為水體富營養(yǎng)化和赤潮誘發(fā)的潛在化學(xué)因素，給海洋漁業(yè)經(jīng)濟和生態(tài)帶來影響和破壞[3]。近年來有關(guān)海藻類產(chǎn)品的應(yīng)用研究很多，主要集中在家禽[4]、豬[5]、對蝦[6]上，研究表明飼料中添加海藻或其提取物對養(yǎng)殖動物有一定的積極作用[7-10]。從20世紀(jì)50年代用海帶粉作飼料添加劑研究開發(fā)至今，其研究和應(yīng)用一直為人們所看好，目前海帶渣在畜禽和水產(chǎn)飼料中直接添加應(yīng)用的較廣泛，但在對蝦飼料生產(chǎn)中添加海帶渣酶解產(chǎn)物的還很少。因此，本試驗通過配制添加不同比例海帶渣的飼料，研究對蝦飼料中海帶渣的試驗添加比例，并得出適宜添加比例的基礎(chǔ)上對海帶渣采用不同酶進行酶解處理，研究海帶渣酶解產(chǎn)物的應(yīng)用效果，以期為海帶渣的高值化利用提供參考及理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用凡納濱對蝦[體重(1.00±0.10) g]由

濰坊新大地水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司提供；海帶渣為商業(yè)提膠剩余產(chǎn)品，來自山東明月海藻集團有限公司；飼料原料購自青島七好飼料有限公司；飼料級β-葡聚糖酶購自和氏璧生物技術(shù)有限公司，為粉狀制劑，活性為50 000 U/g；飼料級蛋白酶購自和氏璧生物技術(shù)有限公司，為粉狀制劑，活性為20 000 U/g。

1.2 海帶渣酶解方法

針對海帶渣中含量較高的蛋白質(zhì)和纖維素(海帶渣的營養(yǎng)水平見表1)，選擇能對這2種物質(zhì)作用的2類酶進行初步篩選，分別以酶解液中還原糖和氨基酸濃度作為評價指標(biāo)，最終選定酶解效果較好的β-葡聚糖酶和蛋白酶對海帶渣進行酶解處理，酶解處理方式參考王昌義等[11]的研究方法，具體方法如下：

β-葡聚糖酶酶解海帶渣(GT)：按海帶渣質(zhì)量的0.1%添加β-葡聚糖酶，固液比為1∶20，充分?jǐn)嚢韬螅?0 ℃酶解處理24 h，將酶解后固液產(chǎn)物全都作為飼料添加劑；另用3，5-二硝基水楊酸法對酶解液中小分子還原糖的濃度進行測定，測得海帶渣經(jīng)β-葡聚糖酶酶解后生成還原糖的效率為8.98%。β-葡聚糖酶酶解海帶渣的營養(yǎng)水平見表1。

蛋白酶酶解海帶渣(PT)：按海帶渣質(zhì)量的0.2%添加蛋白酶，固液比為1∶20，充分?jǐn)嚢韬螅?5 ℃酶解處理24 h，將酶解后固液產(chǎn)物全都作為飼料添加劑；另用茚三酮顯色法對酶解液中氨基酸的濃度進行測定，測得海帶渣經(jīng)蛋白酶酶解后生成氨基酸的效率為11.3%。蛋白酶酶解海帶渣的營養(yǎng)水平見表1。

表1 海帶渣及其酶解產(chǎn)物的營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Nutrient levels of kelp meal and its enzymatic hydrolysates (DM basis) %

1.3 試驗方法

養(yǎng)殖試驗在中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所水生實驗室進行，分為海帶渣適宜添加比例試驗和海帶渣酶解產(chǎn)物應(yīng)用效果試驗2個試驗。

1.3.1 試驗1：海帶渣適宜添加比例試驗

以魚粉、豆粕、高筋粉、蝦糠、維生素預(yù)混料、礦物質(zhì)預(yù)混料等為原料配制基礎(chǔ)飼料(D1組，作為對照組)，然后再配制分別以0.5%(D2組)、1.0%(D3組)、2.0%(D4組)、3.0%(D5組)和5.0%(D6組)的海帶渣等量替代基礎(chǔ)飼料中高筋粉的試驗飼料。飼料組成及營養(yǎng)水平見表2。將原料粉碎過80目篩、混合，經(jīng)絞肉機(恒聯(lián)TJ12-H)制成直徑為2 mm的顆粒飼料，經(jīng)60 ℃烘干至恒重，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

表2 試驗1中所用飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 2 Composition and nutrient levels of diets used in experiment one (DM basis) %

1)維生素預(yù)混料為每千克飼料提供Vitamin premix provided the following per kg of diets:VA 32 mg，VB120.1 mg，VD 5 mg，VE 120 mg，VK 10 mg,硫胺素 thiamine 25 mg，核黃素 riboflavin 45 mg,鹽酸吡哆醇 pyridoxine hydrochloride 20 mg,肌醇 inositol 800 mg,泛酸 pantothenic acid 60 mg,煙酸 nicotinic acid 200 mg,葉酸 folic acid 20 mg,生物素 biotin 1.20 mg,次粉wheat middling 18.67 mg。表3同 The same as Table 3。

2)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供Mineral premix provided the following per kg of diets:沸石粉 zeolite meal 3 165 mg，MgSO4·H2O 1 500.0 mg，CuSO4·5H2O 10.0 mg，F(xiàn)eSO4·H2O 80.0 mg，ZnSO4·H2O 50.0 mg，KIO380.0 mg，CoCl250.0 mg，Na2SeO320.0 mg，MnSO4·H2O 45.0 mg。表3同 The same as Table 3。

海帶渣適宜添加比例試驗為期49 d。選取630尾平均初始體重為(1.00±0.10) g的健康凡納濱幼蝦，隨機分成6組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)35尾，以重復(fù)為單位養(yǎng)殖在容量為150 L的大白桶中。養(yǎng)殖期間水體溫度為21～28 ℃，鹽度為30‰～33‰，pH為 7.0～7.6，溶解氧濃度在6.5 mg/L左右。試驗蝦適應(yīng)期為1周，1周后按對蝦體重的3%～5%投喂相應(yīng)的配合飼料，每天飽食投喂2次。在投餌前稱量飼喂量，投餌后1 h用虹吸法收集殘餌，烘干稱重，每天記錄攝食量。每周換水2次，24 h連續(xù)充氣，期間發(fā)現(xiàn)死蝦及時撈出，以免影響水質(zhì)。

1.3.2 試驗2：海帶渣酶解產(chǎn)物應(yīng)用效果試驗

根據(jù)試驗1得出的海帶渣添加比例為3.0%時效果最好，選擇添加3.0%海帶渣的試驗飼料作為海帶渣對照組(A組)，然后再分別用β-葡聚糖酶酶解海帶渣(B組)和蛋白酶酶解海帶渣(C組)對A組飼料中的海帶渣進行等量替代，制作含3.0%海帶渣酶解產(chǎn)物的試驗飼料。飼料組成及營養(yǎng)水平見表3。

表3 試驗2所用飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 3 Composition and nutrient levels of diets used in experiment two (DM basis) %

酶解海帶渣應(yīng)用效果試驗為期56 d。選取315尾平均初始體重為(1.00±0.10) g的健康幼蝦，隨機分成3組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)35尾。其他養(yǎng)殖條件同試驗1。

1.4 樣品采集與指標(biāo)測定

1.4.1 樣品采集與處理

試驗開始和結(jié)束時對各組對蝦計數(shù)和稱重。試驗結(jié)束時，停止投喂24 h，每個重復(fù)隨機選擇5尾(每組共15尾蝦)，用潔凈的干布吸凈體表水分，使用吸入抗凝劑的一次性無菌注射器從頭胸甲插入心區(qū)采集血液。采集好的血液經(jīng)過4 ℃、5 000 r/min離心15 min后取上清到新的離心管中，于-80 ℃冷藏，用于非特異性免疫酶活性的測定。另在冰盒上解剖取對蝦的胃，取樣后立即放入離心管中，-80 ℃冷藏，用于消化酶活性的測定。

1.4.2 指標(biāo)測定及計算公式

飼料中粗蛋白質(zhì)含量的測定采用凱氏定氮法(VELP,UDK-142 Autom Atic Distillation Unit，意大利)；粗脂肪含量的測定采用索氏抽提法(SOXTEC2050 FOSS脂肪測定儀，瑞典)；粗灰分含量的測定采用失重法[在微波馬弗爐中(550±20) ℃灼燒9 h]；水分含量的測定采用直接干燥法[在數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱中(105±2) ℃恒溫干燥3 h]。

對蝦的成活率(survival rate,SR)、增重率(weight gain rate,WGR)、特定生長率(specific growth rate,SGR)、飼料系數(shù)(feed conversion ratio,FCR)、日攝食率(daily feeding rate,DFR)的計算公式如下：

成活率(%)=100×終末對蝦尾數(shù)/

初始對蝦尾數(shù)；

增重率(%)=100×(終末平均體重-

初始平均體重)/初始平均體重；

特定生長率(%/d)=100×(ln最終體質(zhì)量-

ln初始體質(zhì)量)/養(yǎng)殖天數(shù)；

飼料系數(shù)(%)=100×投喂總量/

(終末總重-初始總重)；

日攝食率(%)=100×投喂總量/[養(yǎng)殖天數(shù)×

(終末總重+初始總重)/2]。

相關(guān)酶活性測定：胃蛋白酶(pepsin,PP)、胃纖維素酶(cellulase,CL)、酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及樣品蛋白質(zhì)含量均采用南京建成生物工程研究所的相關(guān)試劑盒測定，并以比活力表示；酚氧化酶(polyphenol oxidase,PO)活性采用上海酶聯(lián)生物科技有限公司的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒測定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗所得數(shù)據(jù)用Excel 2007整理，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用SPSS 17.0分析軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Duncan氏法比較組間差異顯著性，以P<0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 海帶渣添加比例及其酶解產(chǎn)物對凡納濱對蝦生長性能的影響

由表4可知，各海帶渣添加組對蝦的增重率和特定生長率均高于對照組，其中D4、D5組與對照組的差異達顯著水平(P<0.05)。飼料系數(shù)和日攝食率均以D5組最低，顯著低于對照組以及D2、D3組(P<0.05)。

表4 海帶渣添加比例對凡納濱對蝦生長性能的影響Table 4 Effects of kelp meal adding proportion on growth performance of Litopenaeus vannamei

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

由表5可知，B組對蝦的增重率和特定生長率均顯著高于A和C組(P<0.05)。B、C組對蝦的飼料系數(shù)和日攝食率均顯著低于A組(P<0.05)。

C組成活率最高，且與A、B組差異顯著(P<0.05)，A、B組成活率無顯著差異(P>0.05)。

表5 海帶渣酶解產(chǎn)物對凡納濱對蝦生長性能的影響Table 5 Effects of kelp meal enzymatic hydrolysates on growth performance of Litopenaeus vannamei

2.2 海帶渣添加比例及其酶解產(chǎn)物對凡納濱對蝦胃中消化酶活性的影響

由表6可知，凡納濱對蝦的胃中纖維素酶活性隨著海帶渣添加比例的增加而升高，且D5、D6組的胃中纖維素酶活性顯著高于其他各組(P<0.05)。對蝦胃中胃蛋白酶活性隨著海帶渣添加比例的增加呈現(xiàn)先上升后下降的變化，以D5組活性最高，D6組活性最低，且這2組間的差異達到顯著水平(P<0.05)。

由表7可知，B和C組對蝦的胃中纖維素酶活性較A組顯著降低(P<0.05)，且B組胃中纖維素酶活性還顯著低于C組(P<0.05)。對蝦胃中胃蛋白酶活性以B組最低，顯著低于A、C組(P<0.05)。

表6 海帶渣添加比例對凡納濱對蝦胃中消化酶活性的影響Table 6 Effects of kelp meal adding proportion on digestive enzyme activities in stomach ofLitopenaeus vannamei U/mg prot

表7 海帶渣酶解產(chǎn)物對凡納濱對蝦胃中消化酶活性的影響Table 7 Effects of kelp meal enzymatic hydrolysates on digestive enzyme activities in stomach of Litopenaeus vannamei U/mg prot

2.3 海帶渣添加比例及其酶解產(chǎn)物對凡納濱對蝦血清中非特異性免疫酶活性的影響

由表8可知，對蝦血清中ACP活性各組間差異不顯著(P>0.05)。對蝦血清中SOD活性隨海帶渣添加比例的增加呈先上升后下降的趨勢，以D5組活性最高，為276.86 U/mL，顯著高于其他各組(P<0.05)。對蝦血清中PO活性以D5組最高，D6組最低，D3、D4、D5組顯著高于其他組(P<0.05)，D6組顯著低于其他各組(P<0.05)。

表8 海帶渣添加比例對凡納濱對蝦血清中非特異性免疫酶活性的影響Table 8 Effects of kelp meal adding proportion on serum non-specific immune enzyme activities of Litopenaeus vannamei

由表9可知，B、C組血清中ACP和PO活性均顯著高于A組(P<0.05)，且B、C組之間無顯著差異(P>0.05)；C組血清中SOD活性顯著高于A、B組(P<0.05)，且A、B組之間無顯著差異(P>0.05)。

表9 海帶渣酶解產(chǎn)物對凡納濱對蝦血清中非特異性免疫酶活性的影響Table 9 Effects of kelp meal enzymatic hydrolysates on serum non-specific immune enzyme activities of Litopenaeus vannamei

3 討 論

3.1 海帶渣添加比例對凡納濱對蝦生長、消化和非特異性免疫力的影響

本試驗結(jié)果表明，飼料中添加海帶渣能夠促進凡納濱對蝦的生長，其中添加2.0%～3.0%的海帶渣能夠顯著促進凡納濱對蝦生長，這與劉立鶴等[12]的研究結(jié)果相一致，原因可能是海帶渣中含有蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)以及各種維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，同時含有大量的多糖以及刺激動物生長的活性成分[13]。周歧存等[14]研究同樣得出，在凡納濱對蝦飼料中添加3%的海藻粉，對蝦增重率和蛋白質(zhì)效率顯著高于對照組，且飼料系數(shù)最低。

水產(chǎn)動物消化酶活性可反映其消化能力的強弱。李猛等[15]研究了飼料中添加不同比例的滸苔對刺參纖維素酶活性的影響，結(jié)果表明，隨著滸苔添加比例的增加，腸道纖維素酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。在本試驗中，隨著海帶渣添加比例的增加，凡納濱對蝦胃中胃蛋白酶活性出現(xiàn)了先上升后下降的趨勢而其胃中纖維素酶的活性則持續(xù)升高，其原因可能是：隨著海帶渣添加比例的增加，飼料中纖維素含量也相應(yīng)的增加，刺激了對蝦胃纖維素酶的分泌；纖維素含量高會加快食物在對蝦腸道中的排空速度[16]，因此當(dāng)海帶渣添加比例過高時，影響了胃蛋白酶的活性。此外，本試驗結(jié)果還表明，添加2%～5%海帶渣組的對蝦日攝食率顯著低于其他組，可能是因為海帶渣添加比例過高影響了飼料的適口性，降低了對蝦的攝食量，從而影響了胃蛋白酶的分泌。

研究表明，海藻類產(chǎn)品能夠提高日本對蝦[17]和刺參[18]血清中的SOD等非特異性免疫酶的活性。SOD是機體清除氧自由基的重要抗氧化關(guān)鍵酶之一[19]，Regoli等[20]研究發(fā)現(xiàn)生物體對脅迫的適應(yīng)能力主要取決于其抗氧化能力。PO能啟動黑色素的合成，有效抑制病原體胞外蛋白酶和幾丁質(zhì)酶的活性，PO活性的強弱是衡量甲殼動物機體免疫能力強弱的重要參考指標(biāo)[21]。本試驗結(jié)果表明，飼料中添加適宜比例的海帶渣能夠提高凡納濱對蝦血清中SOD、PO的活性，這可能是添加的海帶渣經(jīng)消化釋放了巖藻多糖[22]，而巖藻多糖具有增強免疫力[23]、提高抗病毒性和抗氧化能力的功能[24-25]，而添加5%海帶渣組的對蝦血清中SOD、PO的活性顯著下降，可能是因為隨著海帶渣添加比例的升高，被消化產(chǎn)生的多糖類濃度升高，而過高濃度的糖類對動物免疫活性有抑制作用[26]。ACP是溶酶體酶的標(biāo)志酶，在對蝦免疫反應(yīng)中有重要的生物學(xué)意義[27-28]。在本試驗中，飼料中添加海帶渣后對蝦血清中ACP活力雖有升高，但效果不顯著，可能是海帶渣被消化分解產(chǎn)生的物質(zhì)含量低不能明顯改變ACP活性。

3.2 海帶渣酶解產(chǎn)物對凡納濱對蝦生長、消化和非特異性免疫力的影響

酶制劑在酶解飼料原料時可以將大分子營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為分子質(zhì)量小且更易吸收的營養(yǎng)物質(zhì)，本試驗選用的β-葡聚糖酶是一種纖維素酶，可以將海帶渣中的纖維素降解為小分子的糖類。張志勇等[29]研究發(fā)現(xiàn)，在凡納濱對蝦飼料中添加海藻β-葡聚糖可顯著提高其生長性能，本試驗中β-葡聚糖酶酶解海帶渣組對蝦的增重率、特定生長率顯著高于其他2組，且飼料系數(shù)最低，這可能是海帶渣中的纖維素被酶降解為可消化的糖類并且氧化分解提供能量，并通過減少腸道蠕動減少了能量消耗，從而使更多的營養(yǎng)物質(zhì)用于生長[30-31]。

本試驗中，β-葡聚糖酶酶解海帶渣組對蝦胃中胃蛋白酶和纖維素酶活性顯著低于海帶渣對照組和蛋白酶酶解海帶渣組，這是因為該組飼料中纖維素含量降低，對纖維素酶的分泌沒有促進作用；而蛋白酶酶解海帶渣組對蝦的胃蛋白酶活性略高于海帶渣對照組，可能是因為海帶渣被蛋白酶處理后產(chǎn)生了大量氨基酸和小肽等物質(zhì)，增強了相應(yīng)底物的濃度，對胃蛋白酶的分泌起到了一定的促進作用[32]。

李桂芹[33]的研究表明海帶多糖能提高動物機體的免疫功能。劉晉等[34]研究表明海藻糖類能提高對蝦血清中免疫酶的活性。本試驗條件下，β-葡聚糖酶酶解海帶渣和蛋白酶酶解海帶渣組對蝦血清中ACP、PO活性及蛋白酶酶解海帶渣組對蝦血清中SOD活性顯著高于海帶渣對照組，因此海帶渣經(jīng)β-葡聚糖酶和蛋白酶酶解后可提高對蝦血清中非特異性免疫酶的活性。而β-葡聚糖酶酶解海帶渣組對蝦血清中SOD活性低于其他2組，這可能是因為海帶渣經(jīng)β-葡聚糖酶酶解后釋放產(chǎn)生的還原性小分子糖類濃度過高，而高濃度的糖類對動物機體的SOD活性有一定抑制作用[26,35]。在飼料中提供充足的氨基酸是維持動物正常免疫功能和保護宿主抵抗疾病所必需的[36]。大量研究表明，蛋白質(zhì)是以小肽和氨基酸的形式被動物吸收[37]，小肽能增強機體的免疫能力[38]。仇哲等[39]研究表明，海帶中氨基酸含量豐富，酶解后氨基酸及必需氨基酸含量上升，在本研究中海帶渣經(jīng)蛋白酶酶解后生成氨基酸的效率為11.3%，提高了飼料中小肽及氨基酸的含量，從而增強了凡納濱對蝦的非特異性免疫力[40]。

4 結(jié) 論

① 在本試驗條件下，凡納濱對蝦飼料中海帶渣的適宜添加比例為3.0%。

② 海帶渣經(jīng)β-葡聚糖酶酶解后可以促進凡納濱對蝦的生長，提高其非特異性免疫力；而海帶渣經(jīng)蛋白酶酶解后可提高凡納濱對蝦的非特異性免疫力，但對其生長無促進作用。

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*Corresponding author, professor, E-mail: Lijian@ysfri.ac.cn

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Effects of Kelp Meal Adding Proportion and Its Enzymatic Hydrolysates on Growth, Digestion and Non-Specific Immunity ofLitopenaeusvannamei

PENG Suxiao1,2CHANG Zhiqiang2MA Li1,2LI Jian2*

(1.CollegeofFishersandLifeSciences,ShanghaiOceanUniversity,Shanghai201306,China; 2.KeyLaboratoryforSustainableUtilizationofMarineFisheriesResource,YellowSeaFisheriesResearchInstitute,ChineseAcademyofFisherySciences,Qingdao266071,China)

This study focused on evaluating the effects of kelp meal adding proportion and enzymatic hydrolysates on growth, digestion and non-specific immunity ofLitopenaeusvannamei. There were two experiments in this study: the optimal adding proportion experiment of kelp meal and the effect experiment of kelp meal enzymatic hydrolysates. The optimal adding proportion experiment of kelp meal (experiment one): according to a single factor experimental design, six diets were formulated to contain 0, 0.5%, 1.0%, 2.0%, 3.0% and 5.0% kelp meal (named as groups D1 to D6, respectively), respectively, fed the shrimps [initial body weight was (1.00±0.10) g] for 49 days, and then the growth performance indices, activities of digestive enzymes in stomach and non-specific immune enzymes in serum ofLitopenaeusvannameiwere measured. There were 3 replicates per group with 35 shrimps per replicate. The effect experiment of kelp meal enzymatic hydrolysates (experiment two): a diet with 3.0% kelp meal was kelp meal control group (group A) that based on the experiment one had the optimal adding proportion, and then 3.0% kelp meal after β-glucanase (group B) and protease treatment (group C) were used to replace an equal amount of kelp meal, respectively. TheLitopenaeusvannameiwith the initial body weight of (1.00±0.10) g were fed those diets for 56-day, the growth performance indices, activities of digestive enzymes in stomach and non-specific immune enzymes in serum ofLitopenaeusvannameiwere measured. There were 3 replicates per group with 35 shrimps per replicate. The results of experiment one showed as follows: the weight gain rate (WGR) and specific growth rate (SGR) in groups D4 and D5 were significantly higher than those in control group (P<0.05). In addition, the feed conversion ratio (FCR) in D5 group was significantly lower than that in control group (P<0.05). With the kelp meal adding proportion increasing, the activities of pepsin (PP) in stomach, and superoxide dismutase (SOD) and phenoloxidase (PO) in serum were firstly increased and then decreased. The activities of those three kinds of enzymes reached the maximum in D5 group, and the activities of serum PO and SOD in D5 group were significantly higher than those in control group (P<0.05). The results of experiment two showed as follows: compared with kelp meal treated without enzyme, kelp meal treated by β-glucanase had significant influence on improving WGR, SGR and reducing FCR (P<0.05), and kelp meal treated by protease can significantly increase survival rate (SR) (P<0.05). The cellulase activity in stomach of groups B and C was significantly decreased compared with group A (P<0.05). The activities of acid phosphatase (ACP) and PO in serum of groups B and C and the serum SOD activity of group C were significantly higher than those of group A (P<0.05). It is suggested that the optimal adding proportion of kelp meal in the diet ofLitopenaeusvannameiis 3.0%. Kelp meal treated by β-glucanase can improve the growth performance and non-specific immunity ofLitopenaeusvannamei, and treated by protease can improve non-specific immunity, but has no enhancement on growth ofLitopenaeusvannamei.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(7)：2587-2596]

kelp meal; enzymatic hydrolysates;Litopenaeusvannamei; growth performance; digestive enzymes; non-specific immune enzymes

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.07.044

2016-12-26

國家蝦現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-47)；青島海洋科學(xué)與技術(shù)國家實驗室鰲山科技創(chuàng)新計劃子任務(wù)“海水池塘健康養(yǎng)殖技術(shù)研發(fā)”(2015ASKJ02-03)

彭素曉(1991—)，女，山東臨沂人，碩士研究生，研究方向為動物營養(yǎng)與微生物發(fā)酵。E-mail: 836553017@qq.com

*通信作者:李 健，研究員，博士生導(dǎo)師，E-mail: Lijian@ysfri.ac.cn

S963

A

1006-267X(2017)07-2587-10