元振杰，王 燕，馬弘財(cái)，次仁多吉，拉巴次旦，曾江勇，四朗玉珍，馬興斌

（西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏拉薩 850009）

西藏拉薩市部分雞場(chǎng)雞沙門氏菌病流行病學(xué)調(diào)查

元振杰，王 燕，馬弘財(cái)，次仁多吉，拉巴次旦，曾江勇，四朗玉珍，馬興斌

（西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，西藏拉薩 850009）

為了解拉薩市雞沙門氏菌病的流行情況，探討主要發(fā)病原因，2015年4月至2016年9月，對(duì)拉薩市5個(gè)縣（區(qū)）12個(gè)集約化養(yǎng)雞場(chǎng)進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查。結(jié)果顯示：所采集的1 203份樣品中，共檢測(cè)出沙門氏菌589株，陽性率達(dá)48.96%，說明拉薩市雞沙門氏菌感染較為普遍；在所檢測(cè)的樣品中，種雞、種蛋檢出率分別為41.00%和37.00%，說明種雞沙門氏菌帶菌現(xiàn)象較為嚴(yán)重；病雞樣品檢出率為70.54%，其中成年雞為57.63%、雞舍環(huán)境樣本陽性率為16.67%，飼料陽性率為11.60%，說明這些都是造成沙門氏菌水平傳播的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。

沙門氏菌；流行病學(xué)；雞；拉薩

隨著西藏自治區(qū)規(guī)?；⒓s化養(yǎng)雞業(yè)的快速發(fā)展，雞病愈發(fā)復(fù)雜化。其中的雞沙門氏菌病是由沙門氏菌引起雞的一種較為常見傳染病[1]，其傳播速度快，既可經(jīng)種蛋傳播，也可通過消化道、呼吸道、腸道感染[2]，可導(dǎo)致成年雞生產(chǎn)性能和品質(zhì)下降，種蛋孵化率降低，雛雞發(fā)病率和病死率高[3]，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)影響較大[4]。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)沙門氏菌的各種傳播媒介進(jìn)行檢測(cè)，了解雞沙門氏菌傳播擴(kuò)散的主要風(fēng)險(xiǎn)環(huán)節(jié)，為有效防控沙門氏菌病提供參考。

1 試驗(yàn)材料與儀器

1.1主要儀器

恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、全自動(dòng)高壓蒸氣滅菌鍋、電熱恒溫干燥箱、光學(xué)顯微鏡等。

1.2主要試劑

沙門氏菌快速鑒別培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基、伊紅美蘭培養(yǎng)基、BS瓊脂培養(yǎng)基，均購自青島海博生物公司；沙門氏菌生化編碼微量鑒定管，購自杭州天和微生物試劑有限公司；沙門氏菌屬多價(jià)染色平板凝集抗原診斷血清，購自北京中海動(dòng)物保健科技公司。

1.3樣品

2015年4月至2016年9月，在拉薩市城關(guān)區(qū)、曲水縣、達(dá)孜縣、墨竹工卡縣、堆龍德慶縣12個(gè)集約化養(yǎng)雞場(chǎng)，無菌采集種雞、商品雞、發(fā)病雞泄殖腔拭子；采集雞舍、飼槽、用具、飼料、飲水等表面棉拭樣本；無菌采集種蛋卵黃1 mL；采集病死雞肝臟、脾臟、心臟等病變組織樣本。

1.4實(shí)驗(yàn)雞

為7日齡健康雛雞，來自西藏農(nóng)科院曲尼帕實(shí)驗(yàn)基地。

2 試驗(yàn)方法

2.1細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌取待檢樣品，分別接種于沙門氏菌快速鑒別平板，37 ℃培養(yǎng)18～24 h后觀察結(jié)果。根據(jù)說明書要求，挑取紫色菌落，分別接種于麥康凱平板[5]、伊紅美蘭平板、BS瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)16～18 h，根據(jù)菌落生長特性進(jìn)行初步判斷[6]。

2.2細(xì)菌染色鏡檢

分別挑取單個(gè)菌落，固定并革蘭氏染色鏡檢。染色方法如下：在已固定好的玻片上，滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液，染色2 min，水洗；加革蘭氏碘溶液，媒染1.5 min，水洗；加95%酒精，脫色30 s，水洗；加石炭酸復(fù)紅，復(fù)染30 s，水洗；自然干燥鏡檢[5-6]。

2.3生化鑒定

挑取培養(yǎng)好的新鮮菌落，按照沙門氏菌生化編碼微量鑒定管說明書要求，分別接種于賴氨酸脫羧酶、靛基質(zhì)、尿素酶、氰化鉀、硫化氫、山梨醇、甘露醇、水楊苷、丙二酸鹽、衛(wèi)矛醇、ONPG及葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、阿拉伯糖生化鑒定管，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并記錄結(jié)果[7-8]。

2.4血清學(xué)鑒定

在干凈的載玻片上，加0.5 mL雞白痢、雞傷寒抗原診斷血清，挑取分離到的沙門氏菌菌落，加入少量滅菌生理鹽水制成菌液，取0.5 mL滴到血清中，5 min 內(nèi)觀察結(jié)果。同時(shí)設(shè)生理鹽水和標(biāo)準(zhǔn)菌株為對(duì)照組[9]。

2.5動(dòng)物致病性試驗(yàn)

將252只7日齡健康雛雞，隨機(jī)分為42組，每組6只。其中，40組分別皮下接種分離培養(yǎng)好的沙門氏菌菌液，0.2 mL/只（3×109CUF/mL），1組接種沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)株菌液（3×109CUF/mL），1組接種生理鹽水對(duì)照。接種后，每隔1 h，觀察記錄雞的臨床表現(xiàn)[10]。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1細(xì)菌分離鑒定

從所采集的1 203份病理樣品中，共分離出894株細(xì)菌，通過鑒別培養(yǎng)基鑒定，符合沙門氏菌生長特征的有602株。挑取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，結(jié)果均符合沙門氏菌特征。

對(duì)所分離出的602株可疑菌株，根據(jù)要求[8，10]進(jìn)行賴氨酸脫羧酶、靛基質(zhì)、尿素酶、氰化鉀、硫化氫、山梨醇、甘露醇、水楊苷、丙二酸鹽、衛(wèi)矛醇、ONPG及葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、阿拉伯糖試驗(yàn)，結(jié)果有589株符合沙門氏菌要求，陽性率為48.96%（表1）。

表1雞沙門氏菌分離鑒定結(jié)果

3.2血清學(xué)鑒定

將所分離的589株沙門氏菌與雞白痢、雞傷寒診斷血清，進(jìn)行平板凝集實(shí)驗(yàn)，結(jié)果全部呈陽性凝集，與生化鑒定結(jié)果一致。

3.3動(dòng)物感染試驗(yàn)

將所分離的細(xì)菌接種于雛雞6 h后，雛雞陸續(xù)發(fā)病，表現(xiàn)精神沉郁，不食或少食；8 h后表現(xiàn)腹瀉，拉白色糞便，接種后感染率達(dá)100%。生理鹽水對(duì)照組正常，無臨床癥狀，感染率為0。

4 討論與分析

雞沙門氏菌病是雞的常見傳染病之一，分為雞白痢、雞傷寒和雞副傷寒等，嚴(yán)重影響種雞受精率、種蛋孵化率、雛雞成活率、飼料利用率以及商品蛋品質(zhì)，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害極大[2]。本研究在拉薩市養(yǎng)雞密集的城關(guān)區(qū)、曲水縣、達(dá)孜縣、墨竹工卡縣、堆龍德慶縣5個(gè)地區(qū)，選擇有代表性的12個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)進(jìn)行調(diào)查。首先根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)中的簡單隨機(jī)抽樣方法，確定不同商品雞群最小采樣數(shù)量，對(duì)商品雞進(jìn)行抽樣檢測(cè)，評(píng)價(jià)當(dāng)前雞沙門氏菌流行狀況；其次對(duì)種雞、種蛋進(jìn)行沙門氏菌檢測(cè)，評(píng)估其帶菌率；最后對(duì)發(fā)病雞以及環(huán)境、飼料、飲水、飼喂工具等傳播媒介進(jìn)行檢測(cè)[11]，評(píng)估其在水平傳播中的作用，為有效控制該病提供科學(xué)依據(jù)。

在隨機(jī)采集的699份商品蛋雞樣品中，共檢測(cè)出沙門氏菌陽性403份，感染率高達(dá)57.63%，可見目前拉薩市的雞沙門氏菌感染較嚴(yán)重，應(yīng)及時(shí)采取措施進(jìn)行控制。在種雞場(chǎng)和拉薩白雞種雞場(chǎng)抽檢發(fā)現(xiàn)，和種蛋檢出率分別為41%和37%，種雞雖沒有商品蛋雞感染率高，但該病可通過卵垂直傳播并迅速擴(kuò)散[12]，因此同樣應(yīng)予以重視。當(dāng)前多數(shù)雞場(chǎng)10日齡內(nèi)雛雞死亡率較高，這與帶菌種雞的垂直傳播有關(guān)。因此，種雞場(chǎng)要嚴(yán)格執(zhí)行雞沙門氏菌病凈化措施，控制和消滅傳染源。在對(duì)環(huán)境和傳播媒介檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，雞舍環(huán)境中的沙門氏菌陽性率為16.67%，飼料、飲水、飼喂工具中的陽性率分別為11.6%、2.78%、6.25%，這可能與不良的飼養(yǎng)管理方式及環(huán)境衛(wèi)生有關(guān)。

調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)，部分養(yǎng)雞場(chǎng)飼養(yǎng)管理技術(shù)落后，生物安全意識(shí)缺乏，沒有嚴(yán)格執(zhí)行定期消毒措施；雞舍環(huán)境衛(wèi)生狀況較差，通風(fēng)不良，致使大量微生物在雞舍環(huán)境中滋生。近年來西藏自治區(qū)的畜禽養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，集約化養(yǎng)殖程度明顯提高，但是生產(chǎn)管理方式依然落后，從而帶來了相應(yīng)的疫病問題。因此，政府在大力發(fā)展規(guī)模化養(yǎng)殖業(yè)的同時(shí)，要加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)殖生產(chǎn)者的科技指引，加大農(nóng)牧技術(shù)培訓(xùn)和養(yǎng)殖配套的養(yǎng)殖設(shè)備、飼料、獸藥、消毒劑等供銷市場(chǎng)的建設(shè)。只有這樣，才能保障西藏自治區(qū)的畜牧業(yè)又快又好地發(fā)展。

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（責(zé)任編輯：朱迪國）

Epidemiological Investigation on Chicken Salmonellosis in Some Chicken Farms in Lhasa City of Tibet

Yuan Zhenjie，Wang Yan，Ma Hongcai，Ciren Duoji，Laba Cidan，Zeng Jiangyong，SilangYuzhen，Ma Xingbin
（Institute of Animal Husbandry and Veterinary，Academy of Agriculture and Animal Husbandry Sciences of Tibet Autonomous Region，Lhasa，Tibet 850009）

In order to investigate the prevalence of Salmonella in Lhasa city and the main causes of Salmonellosis，epidemiological investigation was carried out in 12 chicken farms in 5 counties（districts）of Lhasa city，from April 2015 to September 2016. The results showed as the follows：Among the 1 203 collected samples，589 strains of Salmonella were isolated（positive rate of 48.96%），which indicated the prevalence of Salmonella was high in Lhasa city. Among the tested samples，the positive rates of breeding chicken and hatching egg were 41.00% and 37.00%，respectively，which showed that the vertical transmission of Salmonella was seriously. Among the tested samples，the positive rate of sick chicken was 70.54%，of which the positive rate of adult chicken was 57.63%，the positive rates of environmental and feed samples were 16.67% and 11.60%，respectively. All mentioned above were the major factors for spreading of chicken Salmonella.

Salmonella；epidemiology；chicken；Lhasa

S851.3

B

1005-944X（2017）08-0023-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.08.006

西藏自治區(qū)2015年自然科技基金“拉薩地區(qū)雞沙門氏菌血清型和耐藥性研究”