翁業(yè)斌，李建軍，吳建勇，葛建軍，金映紅，王登峰*

（1.新疆呼圖壁種牛場(chǎng)，新疆呼圖壁831200；2新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所（新疆畜牧科學(xué)院動(dòng)物臨床醫(yī)學(xué)研究中心），新疆 烏魯木齊 830000）

新疆犢牛肺炎病原分析和臨床防控

翁業(yè)斌1，李建軍2，吳建勇2，葛建軍1，金映紅2，王登峰2*

（1.新疆呼圖壁種牛場(chǎng)，新疆呼圖壁831200；2新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所（新疆畜牧科學(xué)院動(dòng)物臨床醫(yī)學(xué)研究中心），新疆 烏魯木齊 830000）

10.16863/j.cnki.1003-6377.2017.04.012

為探索我區(qū)犢牛肺炎的流行原因、建立有效防控方法，本研究采用細(xì)菌學(xué)分離鑒定、藥物敏感性試驗(yàn)、治療案例和肺炎發(fā)展進(jìn)程綜合分析的方法對(duì)2010～2016年間14個(gè)奶牛場(chǎng)送檢的57份肺炎病料進(jìn)行研究，結(jié)果表明：化膿隱秘桿菌或莢膜A型巴氏桿菌單一病原的感染是導(dǎo)致新疆犢牛化膿性肺炎的主要原因，分離菌株對(duì)青霉素類(lèi)、頭孢類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)和氯霉素類(lèi)抗菌藥物（均敏感，據(jù)此，提出“及早發(fā)現(xiàn)，預(yù)防性治療”的臨床應(yīng)對(duì)方案，使用阿莫西林、氟苯尼考和諾氟沙星等藥物以肌內(nèi)注射或口服的給藥方式進(jìn)行預(yù)防性治療，經(jīng)為期1年的臨床應(yīng)用，使?fàn)倥７窝椎陌l(fā)病率顯著下降，6個(gè)月齡內(nèi)犢牛因肺炎造成的死亡、淘汰率被控制在5%以?xún)?nèi)，說(shuō)明化膿隱秘桿菌、莢膜A型巴氏桿菌是引起新疆犢牛肺炎的主要病原，采取“及早發(fā)現(xiàn)，預(yù)防性治療”的方案可顯著降低犢牛肺炎造成的損失。

犢牛肺炎；化膿隱秘桿菌；莢膜A型巴氏桿菌；預(yù)防性治療

犢牛肺炎是影響?zhàn)B牛業(yè)經(jīng)濟(jì)效益和健康發(fā)展的主要疾病。在新疆北疆多爆發(fā)于11月份至次年4月份出生的犢牛[1]。在設(shè)施優(yōu)良的規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)中，該病仍可導(dǎo)致5%～15%的犢牛死亡，5%～10%的犢牛淘汰；部分牛場(chǎng)中用于該病治療的費(fèi)用約占牛場(chǎng)獸藥總支出的40%以上[2]。引起犢牛肺炎的病原復(fù)雜多樣，報(bào)道較多的有牛傳染性鼻氣管炎病毒，呼吸道合胞體病毒，副流感病毒III型，牛病毒性腹瀉病毒以及牛支原體、殊異支原體，尿支原體等，但研究證實(shí)，細(xì)菌是犢牛肺炎致死的主要原因，這些細(xì)菌包括多殺巴氏桿菌、隱秘化膿桿菌、肺炎鏈球菌、銅綠假單胞菌、嗜血桿菌等[3,4]。此外，這些病原感染的發(fā)生與飼養(yǎng)管理和氣候劇烈變化等應(yīng)激因素密切相關(guān)，這些因素主要包括：（1）單個(gè)犢牛群個(gè)體數(shù)量過(guò)多、圈舍擁擠；（2）飼養(yǎng)環(huán)境低溫高濕或高溫低濕；（3）初乳飼喂量不足和斷奶日齡過(guò)早等，即使在硬件設(shè)施優(yōu)良、管理規(guī)范的規(guī)?；?chǎng)也存在較高的發(fā)生率，是危及3月齡以?xún)?nèi)犢牛的主要疾病[4,5,6]。

為了解新疆主要牛場(chǎng)犢牛肺炎病例中細(xì)菌性病原種類(lèi)并建立防治方法，本文對(duì)2010-2016年間新疆不同地區(qū)14個(gè)奶牛場(chǎng)送檢的57份犢牛肺炎病料進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，確定化膿隱秘桿菌和莢膜A型巴氏桿菌是其主要病原，并對(duì)這些病原進(jìn)行了體外抗生素（改成抗菌藥物，以下同）敏感性測(cè)試。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果和我區(qū)犢牛肺炎的發(fā)病情況提出了防治對(duì)策，供我區(qū)牛場(chǎng)臨床獸醫(yī)參考。

1 發(fā)病情況

新疆犢牛肺炎主要發(fā)生在規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場(chǎng)，其中11月份至次年4月份是主要的發(fā)病期；千頭以上規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場(chǎng)從業(yè)人員普遍反映：10%～30%的3月齡以?xún)?nèi)犢牛經(jīng)過(guò)一次或多次的治療，且經(jīng)過(guò)兩次以上治療（期間間隔大于10 d）的犢牛在其后3個(gè)月內(nèi)的死亡和淘汰率（淘汰原因主要為生長(zhǎng)不達(dá)標(biāo)）大于80%。

出現(xiàn)典型臨床癥狀的犢牛主要集中在15～50日齡，前驅(qū)期（5～20日齡）多表現(xiàn)出鼻鏡干燥、臟、流卡他性或膿性鼻液等。

2 臨床癥狀

發(fā)病期犢牛表現(xiàn)為體溫升高（40℃～41℃），咳嗽并伴有疼痛表現(xiàn)，鼻腔流黏液及膿性分泌物，呼吸急促，精神沉郁；反復(fù)發(fā)病牛除表現(xiàn)肺炎的典型癥狀外，還出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢、雙側(cè)眼球高度突出；在劇烈活動(dòng)、天氣炎熱或天氣突變時(shí)迅速發(fā)病，個(gè)別牛反復(fù)出現(xiàn)瘤胃臌氣。

3 病理剖檢

對(duì)死亡或淘汰犢牛進(jìn)行剖檢，可見(jiàn)肺臟呈現(xiàn)出典型化膿性肺炎，肺臟組織遍布大小不等的化膿灶（米粒至鴿子蛋大?。?，珍珠大小的化膿灶居多，切開(kāi)后流出大量灰白色膿汁，肺臟實(shí)變、暗紅色、質(zhì)地硬；部分病例肺與胸膜粘連，胸腔內(nèi)有大量滲出液。

4 病原分析

4.1 病原分離鑒定

對(duì)14個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)送檢的的57份患病犢牛肺病變組織（化膿灶）樣本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)、分離，初步發(fā)現(xiàn)3種疑似致病菌，經(jīng)16S rDNA分子鑒定[7]確定37株化膿隱秘桿菌（Trueperella pyogenes）、23株巴氏桿菌（Pasteurella multocida）和4株銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）；巴氏桿菌經(jīng)PCR分型確定均為莢膜A型[8]。本文所述的14個(gè)牛場(chǎng)病料均分離出化膿隱秘桿菌和莢膜A型巴氏桿菌，4個(gè)牛場(chǎng)中分離出銅綠假單胞菌?；撾[秘桿菌、莢膜A型巴氏桿菌和銅綠假單胞菌的分離率分別為64.9%（37/54）、40.4%（23/54）和7.0%（4/54）。細(xì)菌分離檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，多數(shù)病料屬單一種類(lèi)的細(xì)菌感染，少量樣本（共4份）中出現(xiàn)化膿隱秘桿菌或莢膜A型巴氏桿菌與銅綠假單胞菌的混合感染，僅兩例病料中同時(shí)分離出化膿隱秘桿菌和莢膜A型巴氏桿菌（見(jiàn)表1），表明化膿隱秘桿菌和莢膜A型巴氏桿菌為主要致病菌。

此外，根據(jù)送檢病料犢牛日齡劃分，所有病料分別來(lái)自15～30 d（注意阿拉伯?dāng)?shù)字后的天是否用d，小時(shí)用h表示，諸如此類(lèi)的寫(xiě)法問(wèn)題）、30～60 d和大于60 d三個(gè)犢牛日齡區(qū)間段，化膿隱秘桿菌在三個(gè)日齡區(qū)間的檢出率均大于63.3%，15～30 d日齡檢出率為80%；A型巴氏桿菌在三個(gè)日齡區(qū)間內(nèi)發(fā)病牛的檢出率為40%（見(jiàn)表1），進(jìn)一步表明化膿隱秘桿菌或莢膜A型巴氏桿菌單一病原導(dǎo)致肺炎的發(fā)生。

表1 化膿性肺炎病料中細(xì)菌的分離情況

4.2 體外藥物敏感性測(cè)試

參考CLSI發(fā)布的“抗菌藥物敏感性測(cè)試的操作標(biāo)準(zhǔn)（M100-S25）”[9]中肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）的藥敏試驗(yàn)方法和解釋標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)鑒定的37株化膿隱秘桿菌和23株莢膜A型巴氏桿菌進(jìn)行抗菌藥物敏感性測(cè)試和分析?；撾[秘桿菌對(duì)阿莫西林（青霉素類(lèi)）、頭孢曲松鈉（頭孢類(lèi)）、氧氟沙星（氟喹諾酮類(lèi)）和氯霉素（氯霉素類(lèi)）等抗菌藥物敏感，對(duì)紅霉素（大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)）和克林霉素（林可胺類(lèi)）部分敏感，對(duì)復(fù)方新諾明（磺胺類(lèi)）和四環(huán)素（四環(huán)素類(lèi)）耐藥；A型巴氏桿菌對(duì)所測(cè)試的藥物均敏感（表2）。

表2 新疆部分奶牛場(chǎng)分離的化膿隱秘桿菌和A型巴氏桿菌體外抗菌素敏感性

5 防治對(duì)策

在臨床防治中，要求犢牛飼養(yǎng)人員配合獸醫(yī)技術(shù)人員做到“及早發(fā)現(xiàn)，預(yù)防治療”。對(duì)轉(zhuǎn)入犢牛舍的新生牛，堅(jiān)持早、晚飼喂前觀(guān)察，對(duì)出現(xiàn)（1）萎頓、喜臥、飼喂時(shí)不興奮；（2）鼻鏡干；（3）有稀薄或黏白鼻液這三種癥狀中任何一種的犢牛均視為不健康，并對(duì)這類(lèi)犢牛連續(xù)2～3 d肌內(nèi)注射氟苯尼考或阿莫西林等抗生素；如果群體發(fā)病率超過(guò)30%（多于40頭）建議使用阿莫西林、諾氟沙星等可溶性粉飲水3～5 d加以控制。通過(guò)在4個(gè)千頭規(guī)模奶牛場(chǎng)為期1年的臨床應(yīng)用顯示，20日齡后犢牛中，出現(xiàn)典型肺炎征狀的犢牛發(fā)病率顯著下降，6個(gè)月齡內(nèi)犢牛因肺炎造成的死亡、淘汰率有效控制在5%以?xún)?nèi)。

6 討論

2006 年開(kāi)始，我國(guó)牛群出現(xiàn)了由莢膜A型巴氏桿菌引起的嚴(yán)重侵害奶牛以及肉牛呼吸系統(tǒng)的疾病[10]。牛群多在混群后或長(zhǎng)途運(yùn)輸時(shí)發(fā)??；初期出現(xiàn)零星死亡，運(yùn)輸后半個(gè)月內(nèi)病情進(jìn)展較快，多為急性或亞急性病癥并伴有大量死亡病例。病牛引入健康群后，以2～6月齡犢牛最易感，發(fā)病率高達(dá)30%；病亡解剖多以纖維素性或化膿性肺炎為主要病變。發(fā)生肺炎的牛生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，多數(shù)預(yù)后不良；臨床表現(xiàn)以精神萎靡、食欲減退、咳嗽、流涕、體溫升高（41℃以上）和消瘦為特征，主要病理解剖變化為肺組織廣泛淤血和散在大小不一的膿腫結(jié)節(jié)，心包膜與胸膜粘連，纖維素性或化膿性纖維素性胸膜炎，肺小葉間隔水腫與化膿。據(jù)報(bào)道，從2008年至2010年，我國(guó)陸續(xù)有10個(gè)省市發(fā)生牛莢膜A型巴氏桿菌病疫情，并在其中7個(gè)省份成功分離到病原[5]。2015年，侯引緒等[11]報(bào)道2013年9月在北京某奶牛場(chǎng)的犢牛群中發(fā)生化膿隱秘桿菌引起的犢牛化膿性肺炎，癥狀與莢膜A型巴氏桿菌導(dǎo)致的臨床癥狀基本一致，確定這兩種細(xì)菌均為犢?；撔苑窝椎闹虏【?，且臨床上難以區(qū)分。

同時(shí)，莢膜A型巴氏桿菌和化膿隱秘桿菌均為牛上呼吸道正常定植菌群的成員，某些應(yīng)激因素導(dǎo)致菌群紊亂，從而促使其大量繁殖而致病，引起化膿性肺炎以及胸膜炎等。當(dāng)前，我國(guó)規(guī)?；?chǎng)硬件設(shè)施和犢牛飼養(yǎng)管理水平顯著提高，初乳飼喂量和斷奶日齡充分優(yōu)化，但是單個(gè)犢牛群個(gè)體數(shù)量過(guò)多、圈舍擁擠等仍不可避免；再遇上冬春季氣溫反復(fù)無(wú)常的變化，導(dǎo)致?tīng)倥５挚沽档?，進(jìn)而引起化膿隱秘桿菌、莢膜A型巴氏桿菌性犢牛肺炎的發(fā)生。

本文對(duì)2010-2016年間北疆地區(qū)14個(gè)規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場(chǎng)送檢的57份犢牛肺炎病料進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，發(fā)現(xiàn)所有的牛場(chǎng)均分離出化膿隱秘桿菌和莢膜A型巴氏桿菌，病料分離率分別為64.9%和40.4%，且多為單一病原感染，說(shuō)明單一化膿隱秘桿菌和莢膜A型巴氏桿菌是我區(qū)犢牛肺炎的主要細(xì)菌性病原。

根據(jù)新疆牛場(chǎng)分離株的體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果：莢膜A型巴氏桿菌對(duì)所測(cè)試的藥物均敏感；化膿隱秘桿菌對(duì)阿莫西林（青霉素類(lèi)）、頭孢曲松鈉（頭孢類(lèi)）、氧氟沙星（氟喹諾酮類(lèi)）和氯霉素（氟苯尼考類(lèi)）抗生素敏感，對(duì)紅霉素（大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)）和克林霉素（林可胺類(lèi)）部分敏感，建議使用阿莫西林、氟苯尼考和諾氟沙星等藥物以肌內(nèi)注射的方式進(jìn)行預(yù)防性治療，針對(duì)規(guī)?；?chǎng)的犢牛數(shù)量較多，如果群體發(fā)病率超過(guò)30%（多于40頭）建議使用飲水中添加藥物的方式加以控制，減少獸醫(yī)人員的治療壓力，將較多精力集中在早、晚飼喂前的觀(guān)察上，并提高抗菌用藥醫(yī)囑的依從性。

本研究表明：應(yīng)激條件下，化膿隱秘桿菌或莢膜A型巴氏桿菌單一病原感染下呼吸道是導(dǎo)致新疆地區(qū)犢?；撔苑窝椎闹饕?，堅(jiān)持“及早發(fā)現(xiàn)，預(yù)防性治療”的方法，使用阿莫西林、氟苯尼考和諾氟沙星等敏感藥物以肌內(nèi)注射或口服的方式進(jìn)行預(yù)防性治療可顯著降低犢牛的死亡和淘汰率。

[1]馬曉菁.致?tīng)倥７窝锥鄽⑿园褪蠗U菌的分離鑒定及部分生物學(xué)特性研究[D].石河子大學(xué),2010.

[2]石劍華,謝新成,孫素珍.犢牛肺炎高發(fā)且難以控制的因素分析及預(yù)防措施[J].當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè),2012，(04)：35～36.

[3]謝倩茹,童勝濤,邵詠旋,等.牛呼吸道感染細(xì)菌病原的致病機(jī)理與防控研究進(jìn)展[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2016，(12)：2183-2188.

[4]Andrews A H,Blowey R W,Boyd H,et al.Bovine medicine.韓博,蘇敬良,吳培福,等,譯.第2版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2006,223-231.

[5]羅潔.新生犢牛肺炎病發(fā)生的原因及治療措施[J].中國(guó)畜禽種業(yè),2014，（03）：54.

[6]劉瑞生,滕占權(quán),趙宵萌,等.犢牛肺炎高發(fā)且難以控制的因素分析及預(yù)防措施[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘, 2017，(01)：118.

[7]朱詩(shī)應(yīng),戚中田.16S rDNA擴(kuò)增及測(cè)序在細(xì)菌鑒定與分類(lèi)中的應(yīng)用[J].微生物與感染,2013，(02)：104～109.

[8]馬文戈,于力.牛源莢膜血清A型多殺性巴氏桿菌的分離鑒定[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2008，(10)：747-750.

[9]The Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI).Performance standards for antimicrobial susceptibility testing,25th informational supplement[M].CLSI document M100-S25.PA USA：Wayne,2015：88-92.

[10]姜志剛,常繼濤,王芳,等.我國(guó)牛群中莢膜A型巴氏桿菌肺炎的發(fā)生和研究進(jìn)展[C].中國(guó)江蘇徐州：動(dòng)物生態(tài)養(yǎng)殖、疫病防控、食品安全與人類(lèi)健康——中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì),2013：4.

[11]侯引緒,李永清,姜小平,等.犢牛化膿性隱秘桿菌病臨床防控研究[J].中國(guó)奶牛,2015，(08)：30-32.

Pathogenic Analysis and Clinical Prevention and Control of Calf Pneumonia in Xinjiang

WENG Ye-bin,LI Jian jun2,WU Jian-yong2，GE Jian-jun1,JIN Yin hong2,WANG Deng-feng2*
（1.Xinjiang Hutubi Breeding Cattle Farm，Hutubi Xinjiang 831200，China；2.Institute of veterinary medicine（Animal Clinical Research Center），Xinjiang Academy of Animal Science，Urumqi 830000，China)

In order to identify the cause of the epidemic of calf pneumonia,so to establish effective prevention and control methods,the bacterial isolation and identification of 57 pneumonia cases from 14 dairy cattle farms in 2010-2016 was carried out,and drug susceptibility testing of the isolates were carried out, furthermore,treatment case analysis and pneumonia development process analysis were considered.The results showed that the outbreak of single pathogen of Trueperella pyogenes or Pasteurella multocida types A was the main cause of purulent pneumonia of calves in Xinjiang,all isolates were sensitive to the penicillin, cephalosporins,fluoroquinolones and florfenicol,the"early detection and preventive treatment"of the clinical response was proposed and applied,and preventive drugs,such as amoxicillin,florfenicol and norfloxacin, were administered by intramuscular injection or oral administration（,after a period of 1 years of clinical application,the incidence of calf pneumonia was significantly decreased,and the mortality and elimination rate of calves caused by pneumonia within 6 months were effectively controlled within 5%.This study suggests Trueperella pyogenes or Pasteurella multocida types A was the main cause of purulent pneumonia of calves in Xinjiang and"early detection and preventive treatment"can significantly reduce the economic losses caused by calf pneumonia.

Calf pneumonia；Trueperella pyogenes；Pasteurella multocida types A；Preventive treatment

S856.3

A

1003-6377（2017）04-0060-05

自治區(qū)青年科技創(chuàng)新人才培養(yǎng)工程（qn2015yx037）

并列第一作者：翁業(yè)斌（1977-），男，大專(zhuān)，獸醫(yī)師，從事奶牛疾病診治工作。E-mail：1159844616@qq.com李建軍（1962-），女，大專(zhuān)，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，從事獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室分析工作。E-mail：1048347357@qq.com

王登峰（1982-），男，臨床獸醫(yī)學(xué)博士，副研究員，從事草食家畜常見(jiàn)病研究工作。E-mail：395045819@qq.com

2017-04-03，

2017-04-16