丁鈺，劉霞*，李金金，劉海寧

(1.青島大學(xué)附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，青島 266021；2.青島市傳染病醫(yī)院，青島 266033)

乙型肝炎病毒對輔助生殖患者胚胎發(fā)育的影響

丁鈺1，劉霞1*，李金金2，劉海寧1

(1.青島大學(xué)附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，青島 266021；2.青島市傳染病醫(yī)院，青島 266033)

目的 探討乙型肝炎病毒(HBV)感染對胚胎發(fā)育的影響，為HBV陽性患者改善周期結(jié)局，提供更多理論依據(jù)。 方法 收集從2012年1月至2016年9月來我院就診的4 301個ART周期病理資料，按是否HBV感染分為三組，A組：男方和女方均HBV陰性(n=3 940)；B組：女方HBV陽性而男方陰性(n=195)；C組：女方HBV陰性而男方陽性(n=166)，比較三組的胚胎受精率、卵裂率、可移植胚胎率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及妊娠率。 結(jié)果 (1)ART患者B組妊娠率明顯低于A組(39.8% vs 52.6%)，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；(2)IVF周期中B和C組的受精率、卵裂率、可移植胚胎率及優(yōu)質(zhì)胚胎率與A組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；(3)ICSI周期中C組受精率明顯低于A組(75.1% vs 83.5%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 HBV可能通過影響胚胎著床或者子宮內(nèi)膜而影響周期結(jié)局。

乙型肝炎病毒； 輔助生殖； 胚胎發(fā)育

(JReprodMed2017，26(7)：666-669)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV) 是一種嗜肝性病毒，HBV感染是嚴重危害人類健康和生命安全的公共衛(wèi)生問題。近年的研究表明HBV DNA 可與生殖細胞染色體整合[1-2]，，通過垂直傳播感染胚胎，影響胎兒發(fā)育[3-5]，然而具體機制尚不明確。隨著乙肝患者發(fā)病率的上升，明確實施輔助生殖技術(shù)(ART)患者 HBV對胚胎發(fā)育的具體作用機制越來越具有必要性[6-7]。

本研究選取2012年1月份到2016年9月份來我院生殖中心就診的患者，共4 301個周期，統(tǒng)計分析HBV感染對胚胎受精率、卵裂率、可移植胚胎率及優(yōu)質(zhì)胚胎率的影響，推測妊娠結(jié)局，為HBV陽性ART患者進行早期干預(yù)提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

資料和方法

一、研究對象

收集2012年1月份至2016年9月份在我院生殖醫(yī)學(xué)科接受人工助孕的4 301個治療周期，根據(jù)是否HBV感染進行分組，其中男方和女方均HBV陰性的治療周期為3 940(IVF治療周期2 981，ICSI 治療周期728)，為對照組(A組)；女方HBV陽性男方陰性的治療周期為195(IVF治療周期154，ICSI治療周期30)，為女方陽性組(B組)；女方HBV陰性而男方陽性的治療周期166(IVF治療周期115，ICSI治療周期40)，為男方陽性組(C組)。其中IVF和ICSI的分組中排除了補救ICSI周期。入組標準：(1)夫妻雙方僅一方HBsAg檢測為陽性；(2)女方輸卵管因素、子宮內(nèi)膜異位癥及卵巢功能導(dǎo)致的不孕；(3)夫妻雙方HBsAg檢測均為陰性。排除標準：(1)夫妻雙方檢測HBsAg均為陽性；(2)男方為供精；(3)不明原因的不育。

二、方法

1.HBV陽性感染患者判定標準：HBV血5項標志物檢測：(1)乙肝表面抗原HBsAg，(2)乙肝表面抗原抗體HBsAb，(3)乙肝e抗原HBeAg，(4)乙肝e抗體HBeAb，(5)乙肝核心抗原抗體HBc-IgG Ab。其中HBsAg陽性為HBV感染，而HBsAg陰性則為未感染HBV[8]。

2.胚胎評分：按Peter卵裂期胚胎評分系統(tǒng)評估D3 胚胎質(zhì)量。Ⅰ級：卵裂球大小均勻，形狀規(guī)則，透亮，碎片<10%；Ⅱ級：卵裂球稍不均勻或形狀稍不規(guī)則，胞漿有顆?，F(xiàn)象，碎片在10%～20%之間；Ⅲ級：卵裂球明顯不均勻或形狀明顯不規(guī)則，胞漿有顆?，F(xiàn)象，碎片在20%～50%之間；Ⅳ級：卵裂球嚴重不均勻或形狀嚴重不規(guī)則，胞漿有顆粒現(xiàn)象，碎片>50%。將第3天發(fā)育到6～10個卵裂球的Ⅰ、Ⅱ級胚胎定義為優(yōu)質(zhì)胚胎，其余為低評分胚胎。將第3天發(fā)育到4個卵裂球以上的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ級胚胎定義為可移植胚胎。

三、統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 21.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，用χ2檢驗比較各組間率，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

一、各組患者的基本資料

統(tǒng)計學(xué)分析三組ART患者基本資料，不育類型、年齡、不育年限及不育原因方差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(表1)。

表1 各組患者的基本臨床資料比較[(x-±s)，n(%)]

二、三組ART患者的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率的比較

統(tǒng)計學(xué)分析三組ART患者受精率、卵裂率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率，結(jié)果表明：三組患者受精率、卵裂率和可移植胚胎率差別無統(tǒng)計學(xué)意義，而B組妊娠率明顯低于對照組(A組)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；C組優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯高于A組和B組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

三、三組ART患者IVF周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率比較

統(tǒng)計學(xué)分析三組ART患者IVF周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率，結(jié)果表明，三組患者受精率、卵裂率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(表3)。

四、三組ART患者ICSI周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率比較

比較ART患者ICSI周期中的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率，結(jié)果表明，三組患者受精率和可移植胚胎率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而C組(男方陽性組)受精率明顯低于A組和B組，優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯高于A、B兩組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表4)。

表2 三組ART患者受精率、卵裂率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率的比較[n(%)]

注：與A組比較，*P<0.05；#P<0.01

表3 三組ART患者IVF周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率比較[n(%)]

表4 三組ART患者ICSI周期的受精率、卵裂率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率比較[n(%)]

注：與C組比較，*P<0.05

討 論

HBV引起的乙型肝炎，是一種嚴重危害人類健康的世界性傳染病，也是世界衛(wèi)生組織重點監(jiān)控的衛(wèi)生問題。乙型肝炎病毒感染所致的慢性肝炎、肝硬化以及肝癌嚴重危害人類健康、削弱勞動力、增加家庭社會負擔(dān)。中國是乙型肝炎高發(fā)區(qū)，在1～60歲人群中HBsAg陽性率為7.2%，其中處在婚育年齡人群乙肝病毒攜帶率近10%[1]。每10對育齡夫婦中就有一對需要借助ART才能有后代，HBV對輔助生殖患者胚胎發(fā)育具體影響機制的研究尤為重要。本研究結(jié)果顯示ART患者女方陽性組(B組)生化妊娠率明顯低于其它各組，且差別具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示在ART患者中HBV可能通過母系途徑影響胚胎發(fā)育，進而影響周期結(jié)局。Ye等[9]發(fā)現(xiàn)在卵巢組織的間質(zhì)細胞、顆粒細胞及卵細胞中有HBsAg表達，在不同階段的卵母細胞、顆粒細胞、卵巢間質(zhì)細胞核內(nèi)檢測出HBV DNA，表明在無外界干擾的條件下，HBV可以感染生殖器官及卵母細胞，提示卵母細胞可能是親代將HBV傳給子代的載體。Zhao等[10]的動物實驗也發(fā)現(xiàn)，HBV DNA序列能夠通過卵母細胞的透明帶和細胞膜進入卵母細胞內(nèi)并整合到基因組染色體上。這樣感染有HBV的卵母細胞在受精過程將病毒帶入胚胎中[11]。由此，綜合以上各實驗結(jié)果與本實驗結(jié)果推測HBV可能通過女性生殖細胞感染胚胎，從而影響胚胎分裂。

精子DNA 碎片化指數(shù) (DNA fragmentation index，DFI) 是評價精子DNA 完整性的常用指標，與輔助生殖周期結(jié)局密切相關(guān)。DFI≤30% 認為具有更低的自然妊娠率，導(dǎo)致優(yōu)胚率下降和流產(chǎn)率上升，并降低IVF 和ICSI的妊娠率[12]。最近的研究發(fā)現(xiàn)HBV患者DFI 是正常男性的2倍水平，結(jié)果具有顯著性差異[13]。HBV感染可能是影響HBV陽性ART患者周期結(jié)局的重要因素。Zhou等[14]的研究發(fā)現(xiàn)男性HBV 患者(實驗組) 較男性HBV 陰性(對照組) 表現(xiàn)更差的ICSI-ET 結(jié)局(包括受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、著床率和臨床妊娠率)。而其它研究表明男方陽性患者精液中可檢測出HBV DNA，HBV 男方陽性并不影響 IVF/ICSI-ET 治療的結(jié)局[15-18]。本研究結(jié)果表明男方陽性組(C組)ART患者ICSI周期的優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯高于其它兩組，在IVF周期中優(yōu)質(zhì)胚胎率與其它兩組相比，無明顯差別，但是ICSI周期的優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯高于其它兩組，由此推測精子的選擇與胚胎質(zhì)量有關(guān)。與陰性對照組(A組)相比，雖然男方陽性組(C組)優(yōu)質(zhì)胚胎率明顯升高，但是妊娠率卻無明顯差別，這與先前的研究并不矛盾，在移植胚胎選擇上，原則上選擇優(yōu)質(zhì)胚胎，雖然男方陽性影響優(yōu)質(zhì)胚胎率，但是移植時盡量選擇優(yōu)質(zhì)胚胎，所以最終并不會影響妊娠結(jié)局。男方陽性組(C組)ICSI周期卵裂率明顯低于其它三組，表明HBV可以通過精子影響胚胎發(fā)育，具體機制還需繼續(xù)研究。

本研究通過比較分析HBV陰性和陽性ART患者卵裂率、受精率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率，發(fā)現(xiàn)ART患者女方陽性組妊娠率明顯低于對照組，而卵裂率、受精率、可移植胚胎率和優(yōu)質(zhì)胚胎率無明顯差別，表明HBV可能通過影響胚胎著床或者子宮內(nèi)膜而影響周期結(jié)局。而ICSI患者HBV主要通過精子影響胚胎發(fā)育，為明確HBV在胚胎發(fā)育中的后續(xù)研究提供了實驗基礎(chǔ)。

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[編輯：辛玲]

Effect of hepatitis B virus infection on embryo development of patients with assisted reproductive technique

DINGYu1，LIUXia1*，LIJin-jin2，LIUHai-ning1

1.DepartmentofReproductivemedicine，theAffiliatedHospitalofQingdaoUniversity，Qingdao2660212.QingdaoInfectiousDiseasesHospital，Qingdao266033

Objective：To investigate the effect of Hepatitis B virus (HBV) infection on embryo development，and provide more theoretical basis for improving the outcome in assisted reproductive technique (ART) in HBV positive patients.

Methods：The ART 4 301 cycles in ART patients with pathological data in our hospital from January 2012 to September 2016 were collected.The ART cycles were divided into three groups according to whether HBV infection：Both of husband and wife were negative for HBV in group A(n=3 940)；The wife was HBV positive while husband was negative in group B(n=195)；The woman HBV negative while husband was positive in group C(n=166).The fertilization rate，cleavage rate，transplantable embryo rate，high quality embryo rate and pregnancy rate were compared among the three groups.

Results：The pregnancy rate of group B was significantly lower than that of group A((39.8% vs 52.6%)(P<0.05).The fertilization rate，cleavage rate，transferred embryo rate and high quality embryos rate in group B or group C were not different with group A.The fertilization rate of ICSI cycle in group C with was significantly lower than that in the group A(P<0.01).

Conclusions：HBV infection has a negative effect on the clinical outcome of assisted reproductive technology.

Hepatitis B virus； Assisted reproduction technique； Embryonic development

10.3969/j.issn.1004-3845.2017.07.009

2016-12-27；

2017-02-10

丁鈺，女，山東青島人，碩士，主管技師，生殖醫(yī)學(xué)專業(yè).(*

，Email：qdliuxia@yeah.net)