孫 莉，林寶旭，方硝杰，趙圓圓，徐 梅，侯 莉

（大連大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116622）

加味保元湯對慢性應(yīng)激大鼠海馬SOD、GSH-Px活性的影響

孫 莉，林寶旭，方硝杰，趙圓圓，徐 梅，侯 莉

（大連大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116622）

為了研究加味保元湯對慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元氧化應(yīng)激的影響，應(yīng)用慢性復(fù)合應(yīng)激建立抑郁癥大鼠模型，將24只SD大鼠隨機等分為正常對照組、模型組、加味保元湯組。采用分光光度法檢測大鼠海馬組織超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性。結(jié)果表明，模型組大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性明顯降低，與正常對照組比較有顯著性差異（P＜0.01）；經(jīng)加味保元湯干預(yù)治療后，大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性明顯提高，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.01）。實驗結(jié)果提示加味保元湯對慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷具有保護作用。

慢性應(yīng)激；大鼠；海馬；加味保元湯；氧化應(yīng)激

0 引言

長期慢性應(yīng)激可引起海馬神經(jīng)元損傷[1,2]，進而產(chǎn)生抑郁行為[3]，其機制可能與心理應(yīng)激誘發(fā)氧化應(yīng)激有關(guān)[4,5]。因此，清除活性氧自由基和修復(fù)氧化損傷，從而抑制海馬神經(jīng)元凋亡是抗應(yīng)激損傷，防治抑郁癥的有效方法之一。

本研究采用慢性復(fù)合應(yīng)激大鼠抑郁癥模型，檢測其海馬組織SOD及GSH-Px活性變化，并給予加味保元湯干預(yù)，研究加味保元湯對慢性應(yīng)激大鼠海馬組織SOD及GSH-Px活性變化的調(diào)節(jié)作用，探討其抗氧化應(yīng)激作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物及分組

SD大鼠24只，健康、雄性，體重180～220 g，清潔級。隨機等分為3組：正常對照組、模型組、加味保元湯組。

1.1.2 儀器與試劑

分光光度計：Thermo Fisher-1510（美國）。SOD、GSH-Px活性檢測試劑盒，BCA蛋白含量檢測試劑盒：江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司。加味保元湯由五味子、人參、黃芪、肉桂、甘草，分別以5：5：6：5：3比例構(gòu)成，由本校中藥研究室制備水提取物，動物給藥劑量為260 mg/kg體重。

1.2 方法

1.2.1 大鼠抑郁癥模型制作

模型組和加味保元湯組應(yīng)激方法為：①束縛，每日開始及束縛時間不同，第1天4 h，隨后每2天增加0.5 h；②夾尾1 min；③25±1℃自來水游泳5 min。游泳裝置為直徑23 cm、高60 cm的測試桶。每天給予2種應(yīng)激，其中束縛每天進行，另一種應(yīng)激在夾尾、25±1℃水游泳中每天交替給予一種，且此2種應(yīng)激方法累計進行的平均次數(shù)相等，持續(xù)21 d，其中加味保元湯組應(yīng)激前給予加味保元湯水提取物灌胃，模型組應(yīng)激前給予等量生理鹽水灌胃。對照組不給予任何刺激，但給予等量生理鹽水灌胃。應(yīng)激期間各組均禁食、水。

1.2.2 SOD及GSH-Px活性測定

實驗結(jié)束后，大鼠斷頭取腦，冰上分離提取大鼠海馬組織，并按其重量：體積為1:9加入冰生理鹽水，用玻璃勻漿器制備10%組織勻漿，3000 r/min低溫離心15 min，留取上清液待進行測定。采用改良黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，以分光光度計波長為550 nm檢測吸光度。采用谷胱甘肽過氧化物酶法以分光光度計波長為412 nm檢測吸光度，再采用BCA蛋白含量檢測試劑盒測定蛋白濃度，計算GSH-Px的活性。SOD及GSH-Px活性測定按說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0 軟件進行統(tǒng)計分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

與對照組比較，模型組大鼠海馬組織 SOD、GSH-Px活性明顯降低， 有顯著性差異（P＜0.01）；加味保元湯組與模型組比較，大鼠海馬組織 SOD、GSH-Px活性明顯提高，有顯著性差異（P＜0.01），與對照組比較，無顯著性差異（P＞0.05）。說明慢性應(yīng)激可致大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性明顯降低，加味保元湯干預(yù)治療后，大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性明顯提高，結(jié)果表1。

表1 各組大鼠海馬SOD和GSH-Px含量比較（X±S）

3 討論

抑郁癥是一種常見的情感性疾病，其中長期慢性日常壓力是引發(fā)抑郁的主要原因。抑郁癥的發(fā)生發(fā)展與大腦功能密切相關(guān)，其中海馬是關(guān)鍵的情緒整合區(qū)，極易受到應(yīng)激的損傷[6,7]，其機制可能與心理應(yīng)激誘發(fā)氧化應(yīng)激有關(guān)[4,5]。

氧化應(yīng)激是指體內(nèi)的自由基及其產(chǎn)物超過機體抗氧化防御機制的一種病理狀態(tài)?；钚匝酰≧OS）是細(xì)胞內(nèi)有氧呼吸產(chǎn)生的一系列副代謝產(chǎn)物[8]，其升高或氧化還原平衡改變時，就會出現(xiàn)氧化應(yīng)激，通過對生物膜的損傷，對蛋白質(zhì)的氧化損傷，對DNA的氧化損傷，對凋亡通路的影響等一系列直接和間接效應(yīng)介導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡的發(fā)生。

SOD是一種氧自由基清除劑，能對超氧陰離子自由基進行歧化反應(yīng)，生成過氧化氫，然后由GSH-Px和/或過氧化氫酶催化生成水，使機體免受自由基的攻擊，SOD活力高低能間接反映機體清除氧自由基的能力[9]。腦內(nèi)過氧化氫酶含量極低，清除過氧化氫主要依靠GSH-Px完成[10]。所以，測定SOD和GSH-Px的活性，能在一定程度上反映機體的自由基清除能力，即反映抗氧化應(yīng)激的能力。

保元湯具有補氣溫陽之功效，由人參、黃芪、甘草、肉桂等四味藥組成。五味子有寧心安神功效[11]，在保元湯中加入五味子，形成加味保元湯。前期實驗表明，加味保元湯對慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元損傷具有一定的保護作用[2]，本次實驗進一步研究慢性應(yīng)激致大鼠海馬神經(jīng)元損傷的氧化應(yīng)激機制，并探討加味保元湯對氧化應(yīng)激損傷大鼠海馬神經(jīng)元的保護作用。研究結(jié)果顯示，慢性應(yīng)激使大鼠海馬組織 SOD、GSH-Px活性明顯降低，加味保元湯干預(yù)后，大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性較模型組明顯提高，說明慢性應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠海馬組織中存在氧化應(yīng)激損傷，加味保元湯對慢性應(yīng)激大鼠海馬組織 SOD和GSH-Px的活性具有增強作用，因而能提高機體清除自由基的能力，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，這也可能是加味保元湯對慢性應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元損傷的保護作用機制之一，加味保元湯對應(yīng)激致大鼠海馬神經(jīng)元損傷的保護作用機制還需進一步研究。

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Effects of Modified Baoyuantang on the Activities of Hippocampal SOD and GSH-Px in Chronically Stressed Rats

SUN Li, LIN Bao-xu, FANG Xiao-jie, ZHAO Yuan-yuan, XU Mei, HOU Li
(College of Medicine, Dalian University, Dalian 116622, China)

The objective of this research was to study the effect of Modified Baoyuantang on the activities of hippocampal SOD and GSH-Px in chronically stressed rats. Depression in rats was established by chronic multiple stress. Twenty-four SD rats were randomly and equally divided into the following groups: 1. control group; 2.stressed group; 3. stressed group fed with Modified Baoyuantang. Hippocampal superoxide dismutase(SOD) and glutathione peroxidase(GSH-Px) activities were examined by spectrometer. The results showed that the activities of SOD and GSH-Px were significantly decreased in the stressed group (p ＜ 0.01, compared to those in the control group). Rats fed with Modified Baoyuantang had significantly elevated SOD and GSH-Px activities (p ＜ 0.01,compared to those in the stressed group). The results indicated that Modified Baoyuantang had a protective effect on the oxidative damage of hippocampal neurons in the chronically stressed rats.

chronic stress; rats; hippocampus; modified Baoyuantang oxidative stress

R285.5

A

1008-2395(2017)03-0051-03

2017-02-12

遼寧省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（201611258003）。

孫莉（1964-），女，副教授，研究方向：生理學(xué)、心理應(yīng)激與行為醫(yī)學(xué)。