王清霖 范博文 祁金威 李東 竇文鵬 王智慧

摘要：以木耳菌株“黑29”為試驗材料，制備木耳液體菌種及固化菌種（1.5%瓊脂固化菌種、2%瓊脂固化菌種）。比較液體菌種和固化菌種萌發(fā)生長速度、菌絲形態(tài)、菌種活力、現耳時間、出耳產量等。結果表明：液體菌種和固化菌種均隨菌種保存時間的延長表現出菌絲生長速度減緩，發(fā)滿菌袋時間加長、出耳時間延遲，產量略有下降。液體菌種保存15d，失活不萌發(fā)，但固化菌種仍然保持較高的活性，可以正常生長、出耳。

關鍵詞：木耳；液體菌種；固化菌種

現今，木耳種植大多數還停留在家庭小作坊式生產階段，菌種使用是傳統(tǒng)的固體菌種，其菌絲體量少、生長速度慢、活力弱。而液體菌種的特點是菌絲含量高、活力強，成本相對較低，但液體菌種容易染雜菌、難保存，不方便長途運輸，推廣到個人及家庭式木耳生產有一定的困難。本研究旨在對液體菌種進行固化處理，探討液體菌種和固化菌種的特性及出耳情況，為家庭小作坊種植生產的菇農提供優(yōu)質的新型的木耳菌種。

1材料和方法

1.1試驗材料

菌種：“黑29”黑木耳菌種，由黑龍江省科學院微生物研究所菌種保藏中心提供。

1.2菌種制備方法

木耳液體菌種的制備：配置木耳液體菌種培養(yǎng)基（配方：葡萄糖3%、麥麩汁8%、KH₂P0₄0.1%、MgSO₄0.15%、土豆汁20%、VB₁0.01%），按培養(yǎng)基配方稱取土豆，去皮，將土豆切成小塊放入鍋中，加水，在加熱器上加熱至沸騰，維持20～30min，待土豆酥而不爛時，可用4層紗布趁熱在量杯上過濾，棄去濾渣，得到土豆汁。將稱取好的麥麩加水，煮至沸騰狀態(tài)，持續(xù)20min，用4層紗布趁熱在量杯上過濾數次，棄去濾渣，得到麥麩汁，將土豆汁與麥麩汁混合，加入葡萄糖、KH₂P0₄、MgS0₄、VB₁，補充水分至所需量。分裝至250mL錐形瓶中，每瓶裝至1/3，用封口膜封好，以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內造成污染，并保證有良好的通氣性能。再放入121℃滅菌20min后取出，冷卻后放人無菌操作臺中接菌。液體培養(yǎng)基接種完成后，將錐形瓶放置在pH值5.0～6.0，轉速140r/min，溫度25cc的搖床中進行培養(yǎng)，7d左右木耳液體菌種制備完成。

木耳固化菌種的制備：將不同含量的瓊脂粉加入到無菌水中，滅菌后制得瓊脂濃度為1.5%、2%的熱瓊脂溶液。當瓊脂溶液冷卻到38℃左右，將培養(yǎng)好的木耳液體菌種，通過過濾得到菌絲球，然后分別加入到不同比例的瓊脂溶液中，制得木耳固化菌種。

1.3試驗設計

以常規(guī)液體菌種作為對照，以制得濃度為1.5%瓊脂和2%瓊脂固化劑菌種為處理。菌種分別放置0d、7d、15d。具體處理見表1，共9個處理，每處理3次重復。栽培袋料配方為木屑78%、麥麩20%、石灰1%、石膏1%。在25℃培養(yǎng)室中避光培養(yǎng)，濕度60%左右，按常規(guī)方法進行出耳管理。

1.4測定項目

觀察菌種萌發(fā)時間、菌絲生長速度、菌絲形態(tài)、菌種的活力、現耳時間、出耳產量。

2結果分析

2.1不同處理對木耳菌種發(fā)滿天數、菌絲日增長速度、菌絲形態(tài)的影響

由表1可知，液體菌種和固化菌種均隨著菌種保存時間的延長表現出菌絲生長速度減緩、發(fā)滿時間加長，菌絲形態(tài)減弱。這說明菌種存放時間長對菌絲的萌發(fā)及生長有一定抑制。比較存放0d和7d的菌種發(fā)現，液體菌種T0-1和T7-1較固化菌種T0-2、T0-3和T7-2、T7-3的萌發(fā)及菌絲生長速度慢，且T0-2

2.2不同處理對木耳現耳時間、耳片顏色、形態(tài)的影響

由表2可知，比較保存相同時間（0d、7d）的菌種，發(fā)現液體菌種的出耳時間較快。菌種保存0d，液體菌種6.07d現耳，較2%瓊脂固化劑菌種的出耳速度快1倍；菌種保存7d后，液體菌種7.13d現耳，也較固化劑菌種出耳速度快；菌種保存15d，液體菌種失活，無法出耳，但固化劑菌種仍表現出較好的出耳情況。隨著菌種保存時間的加長，液體菌種和固化菌種的出耳時間都延遲，這可能是由于菌種長時間存放導致活性降低，進而導致出耳較慢。比較2個固化劑菌種發(fā)現，1.5%瓊脂固化菌種的出耳時間早于2%瓊脂固化劑菌種出耳。

2.3不同處理對木耳現耳時間、耳片顏色、形態(tài)的影響

由圖1可知，隨著菌種保存時間的延長，木耳產量略有下降，但不明顯。木耳液體菌種保存0d時，T0-2產量略高；液體菌種保存7d木耳產量T7-1較高。這說明液體菌種和固化菌種對木耳產量無顯著的影響，菌種的形態(tài)對產量影響較弱。

3結論

研究表明，液體菌種和固化菌種均隨菌種保存時間的延長表現出菌絲生長速度減緩，發(fā)滿時間加長，菌絲形態(tài)減弱，出耳時間延遲，產量略有下降；且液體菌種保存15d，已基本失活，菌絲不再萌發(fā)出耳，但固化菌種仍然保持較高的活性，可以正常生長出耳。因此液體菌種的固化不僅可以保證菌絲的正常生長及出耳產量，同時可以延長菌種保存時間，方便長途運輸使用。

研究還發(fā)現，2%瓊脂固化菌種的萌發(fā)速度和菌絲生長情況略好于1.5%瓊脂固化劑菌種。但1.5%瓊脂固化菌種的出耳時間較2%瓊脂固化劑菌種早，且木耳產量高。產生這種現象的原因及機理還有待進一步研究。