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液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定瑪咖壓片糖果中西地那非含量

2017-07-06 10:28宗萬里
關(guān)鍵詞:西地那非壓片串聯(lián)

魯 剛, 宗萬里

(威海市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心, 山東 威海 264209)

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液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測定瑪咖壓片糖果中西地那非含量

魯 剛, 宗萬里

(威海市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心, 山東 威海 264209)

建立了瑪咖壓片糖果中西地那非含量的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定方法.樣品經(jīng)過提取后,處理溶液直接注入液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀中進(jìn)行檢測,利用ESI源(正離子模式),C18液相色譜柱,以及SRM方法對樣品中的西地那非進(jìn)行測定.測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于8%(n=6),平均回收率均大于80%,線性范圍為2~20 ng/mL,定量限為3.0 μg/kg.

液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜;瑪咖壓片糖果;西地那非

0 引 言

西地那非為1998年上市的首種口服抗陽萎藥,其通過抑制磷酸二酯酶的水解活性來提高環(huán)磷酸鳥苷水平,而不影響環(huán)磷酸腺苷,從而增加性刺激引起的一氧化氮合成酶/環(huán)磷酸鳥苷瀑布作用,使海綿體平滑肌松弛,達(dá)到治療勃起功能障礙的目的[1].但西地那非的副反應(yīng)包括嚴(yán)重心臟事件,如心肌梗死、突然心臟病死亡、室性心律失常,以及異常勃起、視力降低、眼內(nèi)壓升高和斑點(diǎn)性水腫等狀況.按照《食品安全法》第38條規(guī)定,生產(chǎn)經(jīng)營的食品中不得添加藥品,西地那非為處方藥,在食品或保健食品等特殊食品中添加屬于違法行為[2].目前,檢測保健食品中西地那非含量的方法主要有液相色譜法[3-4]與液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法[5-6].在此基礎(chǔ)上,本研究建立了一種利用液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法對瑪咖壓片糖果中的西地那非含量的檢測方法.該方法在滿足實(shí)驗(yàn)要求的同時(shí),簡化了樣品前處理流程,節(jié)省了檢測時(shí)間,適用于在時(shí)間限制要求較高的情況下,實(shí)驗(yàn)室大批量樣品的檢測.

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)所用儀器包括:高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀,液相部分為賽默飛公司Ultimate 3000型(二元高壓梯度),質(zhì)譜部分為賽默飛公司TSQ QUANTUM ULTRA型三重四極桿質(zhì)譜檢測器(配電噴霧離子源ESI);液相色譜柱(2.1×100 mm,3 μm),Hypersil Gold型,反相C18(賽默飛公司);0.22 μm有機(jī)相針式濾頭(艾杰爾公司);MS3 Digital型漩渦振蕩器、A11型研磨機(jī)(IKA公司);Neofuge 23R型高速冷凍離心機(jī)(上海力申科學(xué)儀器有限公司);JY10002型電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司).

實(shí)驗(yàn)所用試劑包括:甲醇,色譜純,TEDIA公司;乙腈,色譜純,默克公司;甲酸,≥98%,Sigma-Aldrich公司;西地那非標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),0.1 g/瓶,99.9%,中國食品藥品檢定研究院.

1.2 實(shí)驗(yàn)條件

1.2.1 液相色譜條件.

實(shí)驗(yàn)的液相色譜條件為:柱溫箱溫度為35 ℃,流動相梯度洗脫條件如表1所示.

表1 流動相梯度洗脫條件表

1.2.2 質(zhì)譜參考條件.

實(shí)驗(yàn)的質(zhì)譜參考條件為:電離方式為電噴霧電離,正離子掃描模式;噴霧電壓為3.5 kV(正模式),蒸發(fā)器溫度為常溫,鞘氣(N2)壓力為35 Arb;輔助氣(N2)流量為10 Arb;碰撞氣(Ar)壓力為1.5 m Torr;離子傳輸毛細(xì)管溫度為350 ℃;掃描方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測(SRM);質(zhì)譜divert valve狀態(tài):5~12 min處于LoadDetector狀態(tài),其余時(shí)間處于InjectWaste狀態(tài).

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取10 mg的西地那非標(biāo)準(zhǔn)品至小燒杯中,用少量甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中,用甲醇定容,制得濃度為0.2 mg/mL的西地那非標(biāo)準(zhǔn)溶液.再從0.2 mg/mL的西地那非標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取0.25 mL加入到50 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度制得1.0 μg/mL的西地那非標(biāo)準(zhǔn)溶液.

分別從1.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取30 μL、60 μL、120 μL、150 μL、300 μL加入到5個(gè)不同的含有3.00 g經(jīng)過研磨的西地那非空白的瑪咖壓片糖果樣品的刻度離心管中,然后在每個(gè)刻度離心管中分別加入3 mL水浸潤,再加甲醇至15 mL,渦旋混合器提取1 min,經(jīng)高速離心機(jī)以8 000 r/min離心5 min,制得濃度分別為2、4、8、10.0、20.0 ng/mL的含有西地那非的標(biāo)準(zhǔn)溶液.每個(gè)濃度取10 μL注入液相色譜—三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析檢測,并用外標(biāo)法繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線.

1.4 樣品前處理

稱取3.00 g(精確至0.01 g)經(jīng)過研磨機(jī)研碎的樣品于50 mL刻度離心管中,加入3 mL水浸潤,再加甲醇至15 mL, 渦旋混合器提取1 min,經(jīng)高速離心機(jī)以8 000 r/min離心5 min,取清液用0.22 μm的針頭濾膜過濾后注入液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析.

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理

因西地那非能夠溶解在甲醇中,故本研究使用甲醇對樣品中的西地那非進(jìn)行提取,經(jīng)過高速離心機(jī)離心后,可得到澄清的上層溶液,該上層溶液能夠較為容易地通過0.22 μm的有機(jī)濾膜.

2.2 色譜及質(zhì)譜條件

本研究采用反相色譜柱C18(100 mm×2.1 mm,3 μm),在梯度洗脫的條件下對西地那非進(jìn)行洗脫.結(jié)果顯示,西地那非在C18柱上可較好地保留,且保留時(shí)間適中.在質(zhì)譜部分,利用質(zhì)譜檢測器自身的優(yōu)化功能,自動優(yōu)化出西地那非的3個(gè)豐度最強(qiáng)的子離子及其碰撞能量,選擇其中1個(gè)豐度最強(qiáng)的子離子設(shè)為定量離子,其余2個(gè)離子設(shè)為定性參考離子.優(yōu)化出的離子對與碰撞能量如表2所示.

表2 西地那非的離子碎片與碰撞能量

2.3 色譜圖

按照“1.2”項(xiàng)下色譜及質(zhì)譜條件進(jìn)行分析,得到西地那非標(biāo)準(zhǔn)品在SRM方式下的總離子流圖,空白樣品的總離子流圖及加標(biāo)空白樣品的總離子流圖,具體如圖1~圖3所示.

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品在SRM方式下的總離子流圖

圖2 空白樣品在SRM方式下的TIC色譜圖

圖3 加標(biāo)空白樣品在SRM方式下的TIC色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和最低檢出限

在實(shí)驗(yàn)條件下,以標(biāo)準(zhǔn)物峰面積Y為縱坐標(biāo),質(zhì)量濃度X(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得線性方程(見圖4).以基線噪聲10倍峰面積對應(yīng)的質(zhì)量濃度為定量限(S/N=10)[7],其回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限如表3所示.

圖4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 精密度和加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

取不含西地那非的瑪咖壓片糖果空白樣品進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn).分別向5 g不同樣品中添加1 μg/mL西地那非標(biāo)準(zhǔn)溶液75、150、300 μL,即樣品中西地那非含量分別為25、50、100 μg/kg.按上述樣品處理方法對加標(biāo)樣品進(jìn)行處理,每個(gè)水平做6次平行,按上述的色譜及質(zhì)譜條件進(jìn)行測定,其精密度與回收率計(jì)算結(jié)果如表4所示.

表4 樣品添加回收和精密度實(shí)驗(yàn)(n=6)

3 結(jié) 論

本研究通過實(shí)驗(yàn)建立了瑪咖壓片糖果中西地那非含量的液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法:樣品提取后注入液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測,通過樣品空白基質(zhì)加標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法對回收率以及在電噴霧離子源上對可能產(chǎn)生的樣品基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行消除;同時(shí),通過質(zhì)譜儀自帶的分流閥,在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間段分流流動相以降低對離子源及質(zhì)譜內(nèi)部的污染.本方法樣品前處理簡單,測試結(jié)果穩(wěn)定性較好且準(zhǔn)確度較高.

[1]白忠宏.安特爾聯(lián)合萬艾可治療糖尿病性勃起功能障礙的效果觀察[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(35):500-501.

[2]警惕非法添加的“西地那非”[J].食品與生活,2016,38(6):19-20.

[3]沈志武,唐宏兵,李群,等.高效液相色譜法測定保健食品中他達(dá)拉非、西地那非、伐地那非違禁藥物含量[J].理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊),2008,44(6):540-542.

[4]魯琳,高燕紅,李少霞,等.高效液相色譜—二極管陣列檢測法測定保健食品中枸櫞酸西地那非的研究[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2005,15(9):1052-1054.

[5]陳波,朱小蘭,姚守拙,等.高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用測定保健食品中的西地那非和西力士[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2004,16(2):121-124.

[6]王一紅,馮家力,潘振球,等.液相色譜—質(zhì)譜—質(zhì)譜方法同時(shí)測定抗疲勞保健食品中伐地那非、西地那非、他達(dá)那非[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2009,43(8):727-729.

[7]中華人民共和國衛(wèi)生部,中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法:GB/T5009.1-2003[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003.

Determination of Sildenafil Content in Maca Tabletting Candy by LC-MS/MS

LUGang,ZONGWanli

(Weihai Inspection and Testing Center for Food and Drug, Weihai 264209, China)

The method for the determination of Sildenafil content in maca tabletting candy by liquid chromatography-Tandem mass spectrometry(LC-MS/MS) was established.The sample was injected into LC-MS/MS for a test after being extracted.Sildenafil of the sample was determined by ESI source under positive and negative ion mode,C18liquid column and SRM method.The RSD of the method was less than 8%,the average recovery was more than 80%,the liner range was in 2~20 ng/mL and the limit of quantitation of Sildenafil was 3.0 μg/kg.

LC-MS/MS;maca tabletting candy;Sildenafil

1004-5422(2017)02-0138-03

2017-05-02.

魯 剛(1977 — ), 男, 高級工程師, 從事食品安全檢測技術(shù)研究.

R284.1;O657.63

A

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