張文平 張曉平 鄧 杰 饒高雄，3*

1.云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院， 云南 昆明 650500；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355； 3.云南特安吶制藥股份有限公司，云南 文山 663000

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民族藥地板藤中總黃酮含量的測(cè)定

張文平1張曉平2鄧 杰1饒高雄1，3*

1.云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院， 云南 昆明 650500；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355； 3.云南特安吶制藥股份有限公司，云南 文山 663000

目的：建立地板藤藥材中總黃酮含量的測(cè)定方法。方法：采用分光光度法，以蘆丁為參照品，硝酸鋁作顯色劑，在510nm處測(cè)定樣品中總黃酮的含量。結(jié)果：蘆丁在0.014～0.084mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9964，平均加樣回收率為101.16%，RSD=1.75%。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，重現(xiàn)性好，適用于地板藤中總黃酮含量的測(cè)定。

地板藤；總黃酮；紫外分光光度法

地板藤為?？浦参锏厥?FicustikouaBur.)的藤莖，資源豐富，主要分布于云南、貴州、廣西、西藏、四川、甘肅、陜西南部等地;云南省內(nèi)以滇南、滇東南資源最為豐富，主產(chǎn)于文山、玉溪、紅河等地，該藥材是云南省地方習(xí)用藥材，也是彝、壯、苗、哈尼等民族廣泛使用的民族藥，用藥歷史悠久，是獨(dú)具特色的地方中草藥之一[1]。本品性涼，味苦、微澀，具有清熱利濕、收斂止痢、解毒消腫的功效，主要用于痢疾、泄瀉、黃疸、水腫、風(fēng)濕疼痛和無(wú)名腫毒[1]。2015版藥典并未收載該藥，僅有地方標(biāo)準(zhǔn)可供參考[2]。地板藤藥材中黃酮類成分含量較多，在心血管系統(tǒng)、抗菌抗病毒、抗炎抗氧化和保肝方面具有較好的生物活性[3-6]。但該藥材質(zhì)量穩(wěn)定度不高，因此其黃酮類成分含量的測(cè)定對(duì)地板藤藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定及該藥材的推廣意義重大。筆者采用紫外分光光度法對(duì)地板藤中的總黃酮進(jìn)行測(cè)定，以期為地板藤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高和藥材中黃酮類化合物的開發(fā)及利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-2450可見紫外掃描儀(日本島津科技公司)，UV-2000可見紫外分光光度計(jì)(上海奧析科學(xué)儀器有限公司)，YB-500型多功能粉碎機(jī)FA1004N電子天平(上海津平科學(xué)儀器有限公司)，YP502電子天平(上海津平科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 試劑與樣品 蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：150427A，蘆丁含量≥98%，南京景竹生物科技有限公司)；其它試劑均為分析純。地板藤藥材購(gòu)于昆明螺螄灣藥材市場(chǎng)或采挖于云南宣威、昆明西山、昆明呈貢、楚雄等地且采收時(shí)間不同，經(jīng)曬干粉碎后備用。藥材來(lái)源詳見表1。

表1 地板藤藥材來(lái)源

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密稱取3.5mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用無(wú)水甲醇溶解定容于10mL容量瓶中，搖勻。此蘆丁對(duì)照品溶液濃度為0.35mg·mL-1，備用。

2.2 樣品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取粉碎干燥的地板藤5g，加50mL甲醇，加熱回流2h，抽濾，并用甲醇沖洗濾渣3次，合并濾液，定容至100mL。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液適量，置于10mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液0.2mL，混勻，放置5min；再加10%硝酸鋁溶液0.2mL，放置6min；然后加4%氫氧化鈉溶液2mL，混勻，放置15min，定容，過(guò)濾，在200～800nm波長(zhǎng)處掃描，對(duì)照品與供試品溶液顯色后均在510nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故將510nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。紫外掃描光譜詳見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0 、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4mL于10mL容量瓶中，用60%乙醇補(bǔ)充至5mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.2mL，混勻，放置5min；再加入10%硝酸鋁溶液0.2mL，搖勻，放置6min；然后加入4%氫氧化鈉溶液2.0mL，再加入60%乙醇至刻度，搖勻，放置15min后，分別于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度值(A)對(duì)濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=10.88X-0.1173，r=0.9963。結(jié)果表明，蘆丁檢測(cè)濃度在0.014～0.084mg/mL范圍內(nèi)線形關(guān)系良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。

2.5 方法學(xué)考查

2.5.1 精密度試驗(yàn) 取“2.1”項(xiàng)下溶液于510nm波長(zhǎng)處測(cè)吸收度5次。結(jié)果，吸收度平均值為0.5696，RSD=0.36%。表明該方法精密度良好。

2.5.2 重現(xiàn)性試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取藥材樣品5.0g，共5份，按所定條件進(jìn)行平行試驗(yàn)，依法處理，于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。結(jié)果顯示，總黃酮的平均含量為0.013%，RSD=1.26%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下供試品溶液，于0、2、4、6、24h時(shí)測(cè)定吸收度。結(jié)果顯示，吸收度RSD=1.21%，表明藥材經(jīng)提取后，溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.4 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取地板藤藥材5份，5.0g/份，分別加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.3mL(濃度為90.5μg·mL-1)于10mL容量瓶，按樣品溶液的制備方法處理，依法測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率和RSD值。測(cè)得平均回收率為98.94%，RSD=1.91%。結(jié)果見表2。

2.6 樣品含量測(cè)定 分別用“2.2”項(xiàng)下方法提取樣品溶液，精密移取1mL于10mL容量瓶中，按“2.3”中方法配制各樣品供試液，平行測(cè)定5次，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出藥材總黃酮含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表2 地板藤藥材中總黃酮加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 不同產(chǎn)地地板藤中總黃酮含量

2.7 結(jié)果 不同產(chǎn)地的地板藤藥材總黃酮含量差異較大，其中來(lái)源于楚雄、云南宣威的地板藤藥材中總黃酮含量最低為0.48%，購(gòu)于昆明螺螄灣藥材市場(chǎng)和采挖于昆明呈貢的地板藤藥材中總黃酮含量最高為1.84%。

3 討論與小結(jié)

3.1樣品前處理方法的選擇

為了準(zhǔn)確測(cè)定樣品中總黃酮含量，根據(jù)參考文獻(xiàn)對(duì)提取方法、提取時(shí)間、提取料液比、提取預(yù)處理進(jìn)行了考察。在所考察的加熱回流提取、超聲提取方法中，加熱回流提取方法的提取率更高，但用石油醚50mL加熱回流1h預(yù)處理后，總黃酮量損失較多。在所考察的提取時(shí)間加熱回流提取1.5h和2.0h中，加熱回流2.0h能更多提取出樣品總黃酮。提取料液比1∶10提取率較好。最終選擇準(zhǔn)確稱取粉碎干燥的地板藤5g，加50mL甲醇，加熱回流2h，抽濾，并用甲醇沖洗濾渣3次，合并濾液，定容至100mL。

3.2 對(duì)照品的選擇

經(jīng)查文獻(xiàn)[4-6]，發(fā)現(xiàn)至今沒(méi)有對(duì)地板藤總黃酮含量測(cè)定的相關(guān)研究，而相關(guān)研究表明地板藤中確實(shí)含蘆丁、柚皮素、槲皮素等黃酮類成分，對(duì)蘆丁、槲皮素、地板藤提取液進(jìn)行了紫外200～800nm全波長(zhǎng)掃描[7-10]，蘆丁與地板藤提取液在510nm處有共同吸收，槲皮素與地板藤提取液無(wú)共同吸收峰。故本實(shí)驗(yàn)選用蘆丁作為對(duì)照品。

3.3小結(jié)

黃酮類化合物分布廣泛，具有多種生物活性，地板藤中含有多種黃酮類成分，但有關(guān)地板藤總黃酮含量測(cè)定目前尚未見報(bào)道。故本研究用分光光度法對(duì)地板藤中的總黃酮進(jìn)行測(cè)定，并進(jìn)行了方法學(xué)的考察。結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為地板藤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高與地板藤黃酮類化合物的開發(fā)和利用提供科學(xué)依據(jù)。

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì). 中華本草(第2卷)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2001：3.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典(一部) [S]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社出版，2015．

[3]郭良君，譚興起，鄭巍，等. 地瓜藤化學(xué)成分研究[J]. 中草藥, 2011, 42(9)：1709-1711.

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Study on the Determination Method of Total Flavonoids in Ficus Tikoua Bur.

ZHANG Wenping1ZHANG Xiaoping2DENG Jie1RAO Gaoxiong1,3*

1.College of Pharmaceutical Science,Yunnan University of TCM, Kunming 650500, China; 2.College of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Ji’nan 250355, China; 3.Yunnan Daphne Pharmaceutical Co.LTD, Wenshan 663000，China

Objective To establish methods for the determination of total flavonoids in Ficus tikoua Bur. Methods Total flavonoids were quantified by UV spectrophotometry at 510nm, using rutins as reference substance and aluminum nitrate as chromogenic agent. Results The linear ranges of rutin was 0.014～0.084 mg·mL-1(r=0.9964) and the average recovery rate was 101.16% withRSDof 1.75%. Conclusion The method was simple, rapid and accurate, which can be used for the total flavonoids of Ficus tikoua Bur.

Ficus Tikoua Bur.; Total Flavonoids; UV Spectrophotometry

云南省科技強(qiáng)省計(jì)劃項(xiàng)目-特色天然藥調(diào)經(jīng)養(yǎng)顏膠囊大品種培育及二次開發(fā)(2014AE007)；大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計(jì)劃項(xiàng)目—民族藥地板藤止血作用、hplc指紋圖譜與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)完善研究(31050401000)。

張文平(1981-)，女，漢族，講師，博士研究生在讀，研究方向?yàn)橹兴幩巹┡c質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail：455692426@qq.com

饒高雄(1965-)，男，漢族，教授，碩士研究生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)及中藥質(zhì)量控制。E-mail：917884128@qq.com

R284.1

A

1007-8517(2017)11-0025-03

2017-01-07 編輯：梁志慶)