王笑月+謝璽+李大成+劉衛(wèi)東+于佐安+李石磊

摘 要：在水溫23～26 ℃，鹽度32‰條件下，研究了幾種餌料單獨(dú)投喂及混合投喂對(duì)分叉小猛水蚤（Tisbe furcata）生殖量的影響，以探索培育該蚤適合的餌料品種及投喂方式。結(jié)果表明，餌料品種中，兩種金藻（球等鞭金藻3011和Sarcinochrysis marina Geitler）不適合作為分叉小猛水蚤的餌料；兩種硅藻（小新月菱形藻和多枝舟形藻）及代用餌料可以作為分叉小猛水蚤的餌料，但需要與亞心形扁藻混合投喂才能取得理想效果；亞心形扁藻最適合作為分叉小猛水蚤的餌料，與硅藻、金藻或代用餌料混合投喂效果均非常理想。投喂方式總的來說是混合投喂優(yōu)于單獨(dú)投喂，各種餌料單獨(dú)投喂時(shí)均不能取得非常理想的效果，混合投喂時(shí)混有亞心形扁藻的任何組合都取得了非常理想的效果。

關(guān)鍵詞：?jiǎn)伟?；餌料；分叉小猛水蚤（Tisbe furcata）；橈足類

海洋橈足類是一種小型低等的海洋甲殼動(dòng)物，隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門，甲殼綱，橈足亞綱。橈足類種類多、數(shù)量大、分布廣，是海洋食物鏈中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，在海洋生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)中起著重要作用。同時(shí)，橈足類富含高度不飽和脂肪酸，是很多魚類、蝦蟹、海馬、海蜇等水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物人工育苗的優(yōu)質(zhì)活餌料，一直受到廣泛關(guān)注。分叉小猛水蚤（Tisbe furcata） 廣泛分布于世界近岸海域 ，該蚤為底棲種類，是海參育苗池中常見的一種敵害橈足類，同時(shí)該蚤個(gè)體較小，適應(yīng)力強(qiáng)，繁殖力強(qiáng)，短時(shí)間即可獲得大量無節(jié)幼體和成體，因此又是一種很有發(fā)展前途的餌料培育對(duì)象[1]，并且是科學(xué)研究毒性試驗(yàn)中一種非常理想的受試生物。研究分叉小猛水蚤的生長(zhǎng)繁殖、生殖量變化因素對(duì)海參的橈足類敵害生物防治、海洋經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的優(yōu)質(zhì)活餌料開發(fā)利用及毒性試驗(yàn)等海洋科學(xué)研究都具有重要意義。

國外學(xué)者對(duì)分叉小猛水蚤的形態(tài)、生活史、滲透調(diào)節(jié)、室內(nèi)培育等有過研究[2-4]，國內(nèi)學(xué)者對(duì)該蚤的外部形態(tài)和發(fā)育特征、溫度鹽度對(duì)該蚤的個(gè)體生長(zhǎng)和種群增長(zhǎng)有較詳細(xì)研究[1，5]，餌料生物對(duì)該蚤的產(chǎn)卵量、生殖等也有研究[6]，但只研究了金藻、鹽藻等少數(shù)幾種單胞藻餌料單獨(dú)投喂的影響，而對(duì)另外的單胞藻種類沒有涉及，對(duì)單胞藻混合投喂及代用餌料效果也沒有涉及。本試驗(yàn)選用易培養(yǎng)的幾種單胞藻及不受溫度光照?qǐng)龅氐葪l件限制的代用餌料對(duì)分叉小猛水蚤進(jìn)行了單獨(dú)與混合投喂試驗(yàn)，研究不同餌料品種及投喂方式對(duì)分叉小猛水蚤生殖量的影響，探索在人工培育中適合該蚤繁殖的餌料種類及投喂方式， 旨在為橈足類的生長(zhǎng)繁殖研究、生物防治和大規(guī)模人工培育提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 單胞藻培養(yǎng)及代用餌料來源

選用的五種單胞藻餌料：球等鞭金藻3011 （Isochrysis galbana Parks）（金1），金藻（Sarcinochrysis marina Geitler）（金2），亞心形扁藻（Platymonas subcordiformis）（扁），小新月菱形藻（Nitzschia closterium f.minutissima）（新月）和多枝舟形藻（Navicula ramosissima）（舟），均來自遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院藻種室，于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)室溫、自然光照，氮磷鐵簡(jiǎn)易營養(yǎng)鹽配方，燒開并冷卻的砂濾海水培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期備用。

代用餌料（代餌）為三種餌料（大連蛟龍水產(chǎn)餌料開發(fā)中心產(chǎn)品）的固定組合：海參開口餌料、螺旋藻粉、海洋紅酵母。在本試驗(yàn)中此三種固定組合的代用餌料被視為與單胞藻并列的單獨(dú)投喂。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物獲取

分叉小猛水蚤于2016年7月4日取自遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院海參培育槽，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)水溫23～25 ℃，用金藻、扁藻和硅藻混合餌料培育多代后，隨機(jī)挑選健康的掛卵成熟雌體用于試驗(yàn)。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于8月9日開始，8月28日結(jié)束。試驗(yàn)共設(shè)11個(gè)投喂組：?jiǎn)为?dú)投喂6組（分別為金1、金2、扁、新月、舟和代餌），混合投喂5組（金1+扁；金1+新月，新月+扁，金1+代餌，扁+代餌）。單胞藻單獨(dú)投喂組日投喂量（保證蚤的餌料充足適量）：金1組與金2組均為：20×104cell/mL，扁組為：5×104 cell/mL，新月組及舟組均為：50×104 cell/mL，代餌組為：稚參餌料50 mg/L+螺旋藻粉10 mg/L+海洋紅酵母2 mg/L三種固定組合?；旌贤段垢鹘M投餌量為單獨(dú)投喂時(shí)的一半。每組設(shè)3個(gè)平行，每日各組加水后投餌一次，視殘餌情況酌情補(bǔ)充。初始培育容器為100 mL燒杯，每杯放入挑選好的掛卵分叉小猛水蚤3只，培育水體20 mL，此后每日加水量為原水量的一半至一倍，至100 mL時(shí)轉(zhuǎn)至500 mL燒杯中繼續(xù)培育，加水至300 mL時(shí)停止加水，改為隔日換水原水量的一半，直至試驗(yàn)結(jié)束，試驗(yàn)用水為燒開并放涼后的消毒海水，鹽度約32‰左右，培育溫度為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)自然水溫：23～26 ℃。每隔2～3 d取樣測(cè)各組生殖量（各杯總蚤數(shù)），得到投喂不同餌料時(shí)分叉小猛水蚤生殖量變化情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析方法

利用Excel和SPSS16.0軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)最終獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分（One-Way ANOVA）檢測(cè)，并結(jié)合Tukey test進(jìn)行多重比較處理組差異，顯著水平設(shè)置為P<0.05。分析不同餌料對(duì)分叉小猛水蚤生殖量的影響。

2 結(jié)果

2.1 20 d內(nèi)投喂不同餌料時(shí)分叉小猛水蚤生殖量變化

結(jié)果見表1及圖1，培育至7 d前，各組生殖量均比較少，沒有很大差別。此后，各組生殖量出現(xiàn)明顯不同。單獨(dú)投喂各組中，扁組隨試驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)生殖量一直增大直至試驗(yàn)結(jié)束，最終生殖量為4 703，其余各組均在11 d時(shí)或15 d時(shí)生殖量達(dá)到最大（其中新月組在11 d時(shí)達(dá)到最大，為6 906；其次代餌組在15 d時(shí)達(dá)到最大，為6 516；再次是舟組，11 d時(shí)生殖量最大，為4 013；金2和金1兩組最大時(shí)只有606和313），然后逐漸降低至試驗(yàn)結(jié)束，最終生殖量均低于扁組?；旌贤段垢鹘M中，（金1+代餌）組和（金1+新月）組在15 d生殖量達(dá)到最大（分別為3 466、2 333）而后逐漸降低，最終生殖量分別為：2 566和1 630，其余各組生殖量隨試驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)基本逐漸增大，直至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，（扁+代餌）、（扁+金1）和（扁+新月）組生殖量分別達(dá)到9 720、9 484、9 446。至20 d試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組生殖量由大至小依次為：（扁+代餌）>（扁+金1）>（扁+新月）>扁>代餌>新月>（金1+代餌）>（金1+新月）>舟>金2>金1。其中（扁+代餌）、（扁+金1）和（扁+新月）組生殖量最大；而金2組和金1組最?。ǚ謩e只有210和160），生殖量最大的是最小的45倍以上。

2.2 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（至20 d時(shí)）不同餌料對(duì)分叉小猛水蚤生殖量的影響

結(jié)果見圖2，各組對(duì)分叉小猛水蚤的生殖量影響差異顯著，金1和金2組生殖量顯著小于其它組，而金1和金2組間差異不顯著；（扁+代餌）、（扁+金1）和（扁+新月）組生殖量顯著大于其它組，而它們?nèi)M之間差異不顯著。單獨(dú)投喂組中扁組生殖量最大，代餌組、新月組次之；混合投喂時(shí)扁藻與其它任何一種餌料混合后都表現(xiàn)出顯著高于它們單獨(dú)投喂時(shí)生殖量。而金1與代餌或新月混合時(shí)生殖量都顯著比代餌及新月單獨(dú)投喂時(shí)低。綜合來看，混合投喂優(yōu)于單獨(dú)投喂；亞心形扁藻是最適合分叉小猛水蚤的餌料品種，與其它任何餌料混合投喂均取得了理想效果，代餌與兩種硅藻可以作為分叉小猛水蚤的餌料，但需要與扁藻混合投喂才能取得理想效果；兩種金藻均不適合作為分叉小猛水蚤的餌料。

3 討論

3.1 分叉小猛水蚤的發(fā)育繁殖特點(diǎn)

分叉小猛水蚤雌體具有卵囊，卵在卵囊內(nèi)受精后立即開始胚胎發(fā)育，直至孵出無節(jié)幼體，水溫22～25 ℃時(shí)胚胎發(fā)育需要24～26 h，產(chǎn)幼前發(fā)育期為8～10 d[6]。本試驗(yàn)是23～26 ℃條件下，試驗(yàn)中觀察到被挑選出的分叉小猛水蚤掛卵雌體次日開始產(chǎn)幼，并在短時(shí)間內(nèi)可以將卵囊內(nèi)的幼體全部產(chǎn)出，每個(gè)雌體產(chǎn)幼量為幾十至上百只，產(chǎn)出的無節(jié)幼體經(jīng)過5～7 d發(fā)育成熟并掛卵；產(chǎn)幼后的雌體經(jīng)過6 d左右又可以重新掛卵。本試驗(yàn)在7 d前各組的生殖量只有幾百只以內(nèi)，這是因?yàn)樵囼?yàn)初始時(shí)被挑選出的掛卵雌體產(chǎn)出的幼體還沒有發(fā)育成熟并產(chǎn)幼。而在7 d后幼體發(fā)育成熟并開始產(chǎn)幼，生殖量明顯開始增大。

3.2 硅藻的抑制作用及分叉小猛水蚤開口餌料的粒徑

許多研究顯示，作為橈足類最主要食物來源的硅藻，特別是高濃度硅藻會(huì)對(duì)橈足類的生長(zhǎng)和繁殖產(chǎn)生一定的抑制作用[7-10]，試驗(yàn)中兩種硅藻均在11 d時(shí)生殖量達(dá)到較大值，而后迅速減少，可能與硅藻對(duì)分叉小猛水蚤繁殖有一定的抑制作用有關(guān)。在11 d前生殖量一直增大可能因?yàn)槌醴跤左w還存有母體給予的營養(yǎng)物質(zhì)一直沒有被消耗掉，而在11 d后硅藻才慢慢開始開始影響分叉小猛水蚤的繁殖；試驗(yàn)中扁藻組從試驗(yàn)開始時(shí)至15 d內(nèi)并沒有表現(xiàn)出生殖量的優(yōu)勢(shì)，但隨培育天數(shù)增加生殖量一直增大，到試驗(yàn)結(jié)束時(shí)超過所有單獨(dú)投喂的其它各組達(dá)到最大。試驗(yàn)結(jié)果與李捷[11]類似，解釋為雖然粒徑大的食物（扁藻）能夠保證無節(jié)幼體最終獲得較高的存活率和發(fā)育率，但在開口攝食期卻是粒徑較小的食物（兩種硅藻）效果更佳。另外本試驗(yàn)中盡管兩種硅藻在較高濃度下（50×104 cell/mL）對(duì)分叉小猛水蚤的繁殖（生殖量）有一定的抑制作用，但生殖量顯著大于粒徑也比較小的兩種金藻組，可能因?yàn)榻鹪宓臓I養(yǎng)成分更不能滿足分叉小猛水蚤的繁殖需要。

3.3 分叉小猛水蚤適宜的餌料品種及投喂方式

橈足類不能自我合成生長(zhǎng)必需的氨基酸、多不飽和脂肪酸、蛋白質(zhì)和膽固醇等化合物，必須從其攝食的餌料中獲得這些營養(yǎng)物質(zhì)來維持其生長(zhǎng)繁殖和發(fā)育[12]，不同的餌料營養(yǎng)成分不同[13-16]，因此在其它條件相同的情況下，用不同的餌料培育分叉小猛水蚤，其生殖量不同。混合投喂有助于平衡互補(bǔ)分叉小猛水蚤繁殖所需營養(yǎng)。從結(jié)果看，兩種金藻（球等鞭金藻3011和Sarcinochrysis marina Geitler）單獨(dú)投喂時(shí)生殖量很低，金1與代用餌料或硅藻小新月菱形藻混合后雖然生殖量有所增大，但并不能達(dá)到較理想的數(shù)值，可能因?yàn)樵囼?yàn)中的兩種金藻含有不利于分叉小猛水蚤繁殖的成分，不適合作為分叉小猛水蚤的餌料；扁藻單獨(dú)投喂時(shí)，生殖量逐漸增加，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)達(dá)到最大，特別是在與其它餌料混合時(shí)生殖量均達(dá)到很大的數(shù)值，可能因?yàn)楸庠搴欣诜植嫘∶退榉敝车臓I養(yǎng)成分，并且在與其它餌料混合后營養(yǎng)得到更好的補(bǔ)充，是最適合作為分叉小猛水蚤的餌料品種，這與張展[17]培育雙刺紡錘水蚤雌體的結(jié)果相類似，與趙文[6]培育分叉小猛水蚤時(shí)金藻是最適合的餌料的結(jié)果有所不同。扁藻與其它硅藻、金藻或代用餌料混合投喂效果最好，種群密度（單位水體總蚤數(shù)）達(dá)到30只/mL以上，是培育分叉小猛水蚤最好的投喂方式。兩種硅藻（小新月菱形藻和多枝舟形藻）和代用餌料單獨(dú)投喂時(shí)雖然在試驗(yàn)中期生殖量達(dá)到較大值，但不能持續(xù)，到試驗(yàn)結(jié)束時(shí)生殖量有明顯下降，新月或代餌在與扁藻混合投喂時(shí)生殖量達(dá)到很高值，說明試驗(yàn)中硅藻和代用餌料可以作為分叉小猛水蚤的餌料，但最理想是與扁藻混合投喂。

3.4 代用餌料的開發(fā)利用

考慮到單胞藻的培養(yǎng)受海水、溫度、光線、場(chǎng)地及人工等限制，代用餌料有不受這些條件限制、成本低易獲得等優(yōu)勢(shì)，可以作為分叉小猛水蚤的較為理想的餌料品種，更值得開發(fā)利用。本次試驗(yàn)只采用了有限的幾種代用餌料品種固定配比，其它更理想的代用餌料品種及配比有待于進(jìn)一步研究開發(fā)。另外，本試驗(yàn)只研究了各種餌料對(duì)分叉小猛水蚤生殖量多少的影響，而對(duì)投喂不同餌料后該蚤的營養(yǎng)成分及投喂海洋經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的實(shí)際效果有待于進(jìn)一步研究。

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