李 慧，郭倩穎，柳 鵬，張巖春，戴智勇，高 瑩，王軍波

(1北京大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)系，北京100191； 2食品安全毒理學(xué)研究與評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100191； 3北京大學(xué)人民醫(yī)院，北京 100044；4澳優(yōu)乳業(yè)(中國(guó))有限公司，長(zhǎng)沙 410200； 5中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院營(yíng)養(yǎng)科學(xué)研究所，上海 200031)

不同時(shí)期母乳中脂肪酸水平的變化

李 慧1，2，郭倩穎3，柳 鵬3，張巖春4，戴智勇4，高 瑩5，王軍波1，2

(1北京大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)系，北京100191；2食品安全毒理學(xué)研究與評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100191；3北京大學(xué)人民醫(yī)院，北京 100044；4澳優(yōu)乳業(yè)(中國(guó))有限公司，長(zhǎng)沙 410200；5中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院營(yíng)養(yǎng)科學(xué)研究所，上海 200031)

目的：了解不同哺乳期母乳中各種脂肪酸水平的差異及其變化趨勢(shì)，為母乳喂養(yǎng)及嬰幼兒配方奶粉的配制提供科學(xué)依據(jù)。方法：收集2015年7月—2016年3月，在北京大學(xué)人民醫(yī)院足月順產(chǎn)的25～40歲產(chǎn)婦產(chǎn)后1～5d的初乳、6～10d的過渡乳和30d的成熟乳123份，采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)檢測(cè)母乳中的脂肪酸成分，分析母乳中各脂肪酸水平的差異及隨時(shí)間的變化趨勢(shì)。結(jié)果：隨著泌乳時(shí)間的延長(zhǎng)，C18∶0、C14∶1ω5、C18∶3ω6水平和ω-6/ω-3比例呈增高趨勢(shì)；C24∶0、C16∶1ω9、C20∶1ω9、C20∶2ω6、C20∶3ω6、C20∶4ω6(AA)、C22∶2ω6、C22∶4ω6、C22∶5ω6、C22∶5ω3和C22∶6ω3(DHA)水平呈下降趨勢(shì)，總體SFA含量逐漸增加，但無顯著性意義；而PUFA 尤其是ω-3 PUFA水平顯著減少(P<0.05)。 結(jié)論：母乳中的各種脂肪酸隨著泌乳時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷變化，新生兒喂養(yǎng)及配方奶粉的配制時(shí)應(yīng)考慮母乳中各種脂肪酸含量的微觀變化。

母乳；脂肪酸；飽和脂肪酸；單不飽和脂肪酸；多不飽和脂肪酸

自20世紀(jì)80年代起，母乳成分的含量及其質(zhì)量就一直受到研究者們的關(guān)注[1-4]。研究發(fā)現(xiàn)，隨著個(gè)體種族差異、母親身體狀況以及泌乳時(shí)間等因素的影響，母乳中宏量營(yíng)養(yǎng)素的水平也會(huì)隨之發(fā)生變化[5-6]。國(guó)內(nèi)外關(guān)于母乳中各種脂肪酸水平的動(dòng)態(tài)變化的研究較少。脂肪酸作為母乳中的一種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，能提供嬰兒所需能量的45%～55%[7]和必需脂肪酸，對(duì)嬰兒大腦、視網(wǎng)膜、認(rèn)知能力的發(fā)育具有重要的促進(jìn)作用[8]，了解不同泌乳期母乳中脂肪酸組成與含量的差異及隨著時(shí)間的變化趨勢(shì)，對(duì)科學(xué)模擬母乳進(jìn)行嬰幼兒奶粉配制可為母乳喂養(yǎng)及嬰幼兒配方奶粉的配制提供科學(xué)依據(jù)。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2015年7月—2016年3月在北京大學(xué)人民醫(yī)院足月順產(chǎn)的，年齡25～40歲，本科及以上學(xué)歷，無嚴(yán)重的心、肝、肺、腎、內(nèi)分泌疾病、遺傳性疾病、精神心理疾患以及傳染性疾病，分娩后仍在本地居住，且采用母乳喂養(yǎng)，母親本人及家屬愿意配合者進(jìn)行研究。排除早產(chǎn)、低出生體重兒(<2 500g)的母親，在哺乳期間再次妊娠，4w內(nèi)參加過其他臨床試驗(yàn)或相關(guān)資料收集不全者。

1.2 乳樣采集

連續(xù)收集每位產(chǎn)婦產(chǎn)后1～5d的初乳、6～10d的過渡乳和30d的成熟乳。由于產(chǎn)后早期，手?jǐn)D法可以獲得更多的初乳[9]，因此本研究以手法擠乳為主，消毒器具擠奶為輔，采樣前洗手并清潔產(chǎn)婦乳房，采樣后恒溫水箱62.5℃消毒，-80℃冰箱保存待測(cè)。

1.3 母乳脂肪酸檢測(cè)

1.3.1 試劑 Nu-chek 569B脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品、甲醇/氯仿(1∶1)、內(nèi)標(biāo)(0.5mg/mL C19∶0甲醇溶液)、二氯甲烷、甲基化試劑(MeOH∶H2SO4=25∶1)、正己烷、去離子水、異辛烷等。

1.3.2 儀器 氣相色譜儀GC-6890-MS、7673 自動(dòng)進(jìn)樣儀(Palo Alto，California)。

1.3.3 標(biāo)本處理及檢測(cè)方法 采用甲酯化法對(duì)母乳樣本中的脂肪酸進(jìn)行抽提和酯化；以氦氣為載氣(流速為0.7mL /min)，熔融石英毛細(xì)管柱SP-2560(100m × 0.25mm × 0.20 μm)作為色譜柱，取1μL脂肪酸甲酯10：1分流進(jìn)樣，進(jìn)樣器溫度240℃；程序升溫：初始溫度90℃，以10℃/min升溫到170℃，保持5min；5℃/min升溫至175℃，保持1min；1℃/min升溫至210℃，保持5min；5℃/min升溫至240℃，保持20min。

MS參數(shù)：電子轟擊離子源EI；溶劑延長(zhǎng)時(shí)間：12min；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；質(zhì)譜接口溫度：250℃；四極桿質(zhì)量掃描范圍：40～400amu。

根據(jù)脂肪酸的質(zhì)譜特征離子和保留時(shí)間定性，利用內(nèi)標(biāo)及已知質(zhì)量的脂肪酸甲酯混合物(GLC569B；NuCheck Prep，Elysium，Minnesota)作為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定量。用ChemStation E.02.01軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SAS 9.3對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。母乳脂肪酸水平以百分含量用中位數(shù)和四分位間距表示。對(duì)不同時(shí)期的脂肪酸水平進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)、方差齊性及球形性檢驗(yàn)，采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析比較各時(shí)期母乳中的脂肪酸水平差異，并用一元線性回歸分析脂肪酸水平隨時(shí)間的變化趨勢(shì)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 一般情況

本研究共收集初乳、過渡乳和成熟乳樣本123份，納入統(tǒng)計(jì)分析者為同時(shí)具有各時(shí)期樣本的乳母24人(72份樣本)。所有研究對(duì)象均為本科及以上學(xué)歷，平均年齡為31.7± 3.6歲。檢測(cè)母乳中飽和脂肪酸(SFA)10種，約占脂肪酸總量的37.34%；單不飽和脂肪酸(MUFA)6種，占總脂肪酸的35.38%；ω-6系列多不飽和脂肪酸(ω-6 PUFA)9種、ω-3系列多不飽和脂肪酸(ω-3 PUFA)4種，分別占總脂肪酸的24.46%和1.96%。

2.2 不同時(shí)期母乳中各脂肪酸水平的差異及趨勢(shì)性

附表結(jié)果顯示，C10∶0、C12∶0、C14∶0、C18∶0、C24∶0、C16∶1ω9、C20∶1ω9、C18∶3ω6、C20∶2ω6、C20∶3ω6、C20∶4ω6(AA)、C22∶2ω6、C22∶4ω6、C22∶5ω6、C22∶5ω3和C22∶6ω3(DHA)水平在初乳、過渡乳和成熟乳中存在顯著差異(P<0.05)；綜合分析，ω-3 PUFA、ω-6/ω-3以及C20：4ω6/ C22：6ω3 (AA/DHA)比值隨著泌乳期的延長(zhǎng)而發(fā)生顯著改變(P<0.05)。而對(duì)于其他SFA、ω-6 PUFA水平以及C20∶5ω3/ C22∶6ω3 (EPA/DHA)、C20∶5ω3/ C18∶3ω3 (EPA/ALA)、AA/EPA、AA/DHA等比值則未見顯著性變化。趨勢(shì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著泌乳時(shí)間的延長(zhǎng)，C18∶0、C14∶1ω5、C18∶3ω6水平和ω-6/ω-3比例呈顯著增高趨勢(shì)；而C24∶0、C16∶1ω9、C20∶1ω9、C20∶2ω6、C20∶3ω6、AA、C22∶2ω6、C22∶4ω6、C22∶5ω6、C22∶5ω3和DHA水平呈下降趨勢(shì)(P<0.05)，總體SFA逐漸增加，但無顯著性意義；而PUFA 尤其是ω-3 PUFA水平顯著減少(P<0.05)(附表)。

3 討論

本研究脂肪酸測(cè)定，采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)靈敏度較高、且穩(wěn)定性好[10]，可測(cè)定30余種脂肪酸，更全面地反映母乳中脂肪酸的分布及差異。本研究還收集了初乳、過渡乳、成熟乳3個(gè)不同階段的母乳樣本，控制了研究對(duì)象的年齡、文化程度、地區(qū)等因素，使得不同時(shí)期的組間可比性更強(qiáng)。

附表 不同時(shí)期母乳中各種脂肪酸水平的差異及其隨時(shí)間的變化趨勢(shì)

注：Fa和P值由重復(fù)測(cè)量資料的方差分析檢驗(yàn)所得；Fb和Ptrend由一元線性回歸分析所得；*P<0.05

母乳脂肪酸具有其特定的組成，本研究中SFA、PUFA、MUFA分別占總脂肪酸的37.34%、26.76%和35.38%，與國(guó)內(nèi)外其他報(bào)道中各脂肪酸所占的比例范圍類似[11-13]。所測(cè)母乳脂肪酸中以油酸(C18∶1ω9)含量最多，約占總脂肪酸的30%，其次為棕櫚酸(C16∶0)(23%)和亞油酸(C18∶2ω6，LA)(21%)；3種脂肪酸在初乳、過渡乳、成熟乳各階段的水平較穩(wěn)定，沒有發(fā)生顯著性變化，與吳立芳[14]、杜芳芳[15]等的研究結(jié)果一致。母乳中SFA的含量隨著泌乳時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加，其中天然存在于母乳中的月桂酸(C12∶0)、肉豆蔻酸(C14∶0)在不同時(shí)期中水平含量存在顯著差異，但該變化無顯著的趨勢(shì)性，而肉豆蔻油酸(C14∶1ω5)雖然在各階段母乳中水平無顯著性差異，卻有隨著時(shí)間延長(zhǎng)而上升的趨勢(shì)。有研究顯示，當(dāng)乳母膳食中脂肪攝入較少[16]或者延長(zhǎng)哺乳期[17]時(shí)，母乳中的月桂酸和肉豆蔻酸的含量會(huì)增加。硬脂酸(C18∶0)含量也隨著哺乳期的延長(zhǎng)顯著增加，而C24∶0水平則顯著下降。Mihályi等[13]對(duì)匈牙利母親哺乳第1天、第6周和第6個(gè)月時(shí)的母乳成分進(jìn)行比較也發(fā)現(xiàn)硬脂酸含量在初乳中含量最低，隨后逐漸升高。而陳愛菊等[13]對(duì)上海地區(qū)的人乳脂肪酸研究顯示在初乳、過渡乳和成熟乳中C10∶0、C12∶0、C14∶0水平存在顯著差異，C24∶0在初乳中含量最高，在過渡乳和成熟乳中逐漸下降，但硬脂酸水平卻逐漸減小，在對(duì)長(zhǎng)春、重慶、上海等地的母乳成分進(jìn)行比較則發(fā)現(xiàn)，母乳中的硬脂酸在第1～7d逐漸降低，而到第42天逐漸增加，各地區(qū)間存在顯著差異[19]。

Moltó-Puigmartí[20]等對(duì)巴塞羅那市區(qū)產(chǎn)婦的初乳、過渡乳和成熟乳中脂肪酸分析結(jié)果顯示，十八碳以上的MUFA如C20∶1ω9、C22∶1ω9含量從初乳到成熟乳顯著降低。由于母乳中二十碳以上的MUFA含量很少，檢測(cè)數(shù)據(jù)離散程度較大，本研究中未予討論。所檢測(cè)的MUFA結(jié)果顯示，總體MUFA水平穩(wěn)定，C16∶1ω9和C20∶1ω9在初乳中含量最高，隨后逐漸降低，其他MUFA水平無顯著性改變?？赡苁怯捎谀溉橹械闹舅岢丝赏ㄟ^內(nèi)源性貯藏的脂肪動(dòng)員、乳腺和肝臟組織的自身合成而獲得外，還可以來自食物中的脂肪。因此，母親的飲食會(huì)影響母乳中的脂肪酸成分[21]。不同國(guó)家和地區(qū)，由于飲食習(xí)慣的不同，人乳中的脂肪酸成分也會(huì)有所差別。

對(duì)于與人體健康密切相關(guān)的多不飽和脂肪酸，一直受到研究者們的關(guān)注。ω-6 PUFA系列的LA和ω-3 PUFA系列的ALA作為人體的必需脂肪酸，可促進(jìn)嬰兒大腦和視網(wǎng)膜的發(fā)育，但自身不能合成，只能通過食物獲取。母乳是嬰幼兒獲得這些脂肪酸的重要來源，尤其是純母乳喂養(yǎng)的嬰兒。本研究發(fā)現(xiàn)，母乳中LA含量豐富，且在初乳、過渡乳、成熟乳中穩(wěn)定存在。ALA和LA在體內(nèi)可通過碳鏈延長(zhǎng)和脫飽和作用分別形成與嬰幼兒生長(zhǎng)發(fā)育直接相關(guān)的DHA、EPA以及AA。DHA和AA是大腦中的主要結(jié)構(gòu)性脂肪酸，兩者在大腦中的含量相當(dāng)，約占總脂肪酸的25%[22]。新生兒在出生后的前幾個(gè)月腦部發(fā)育尚未完成，腦細(xì)胞的數(shù)量、體積仍在增長(zhǎng)，是腦部發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期，為滿足這一時(shí)期的生長(zhǎng)發(fā)育需求，必須供給嬰兒豐富的DHA，而此時(shí)嬰兒體內(nèi)的脂肪酸去飽和酶活性較低，自身合成能力低下，因此在早期的母乳中DHA含量較高。隨著嬰幼兒發(fā)育的逐漸成熟、自身合成能力的提高，母乳中的DHA和AA含量逐漸下降。Weiss等[23]對(duì)1個(gè)月內(nèi)的母乳成分進(jìn)行分析也發(fā)現(xiàn)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，DHA和AA呈下降趨勢(shì)，但AA水平的下降無顯著性意義。在本研究中DHA和AA水平均呈顯著降低趨勢(shì)，DHA的前體脂肪酸除C22∶5ω3含量降低外，其他如ALA、EPA以及AA/DHA的比值則沒有明顯的變化；AA的前體脂肪酸C20∶2ω6、C20∶3ω6及下游產(chǎn)物C22∶2ω6、C22∶4ω6和C22∶5ω6含量逐漸降低，而C18∶3ω6水平增加；這與嬰幼兒的生長(zhǎng)發(fā)育相適應(yīng)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，嬰兒體內(nèi)的脂肪酸碳鏈延長(zhǎng)酶和減飽和酶活性逐漸成熟，可利用C18∶2ω6、C18∶3ω6等前體脂肪酸自身合成長(zhǎng)鏈PUFA[24]，對(duì)母乳中的這些脂肪酸的需求降低?？傮w而言，ω-3 PUFA水平隨著泌乳時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，ω-6 PUFA水平保持穩(wěn)定，但是ω-6長(zhǎng)鏈脂肪酸水平逐漸減小，與Mihályi[13]、Moltó-Puigmartí[20]等所得結(jié)果一致。Jiang等[25]對(duì)杭州、蘭州和北京等地的母乳進(jìn)行研究則發(fā)現(xiàn)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，ω-3 PUFA水平保持穩(wěn)定，而ω-6 PUFA逐漸下降；同時(shí)，他們也發(fā)現(xiàn)ω-6 PUFA和ω-3 PUFA水平變化在北京、杭州等產(chǎn)婦中的存在顯著性差異?？梢?，各研究結(jié)果仍存在一定的差異，產(chǎn)后不同時(shí)期母乳中脂肪酸水平的變化比較還需結(jié)合各地區(qū)乳母的飲食攝入情況、人種等因素綜合考慮。

為適應(yīng)嬰幼兒生長(zhǎng)發(fā)育的需求，母乳中的各種脂肪酸水平隨著泌乳時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷發(fā)生著變化。因此，在進(jìn)行新生兒喂養(yǎng)以及配方奶粉的配制時(shí)應(yīng)考慮各種脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)素的微觀變化，使之更符合嬰幼兒的營(yíng)養(yǎng)需求?！?/p>

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(責(zé)任編輯 李婷婷)

Changes in Fatty Acids Among Colostrum，Transitional，and Mature Milk from Chinese Women

LI Hui1，2，GUO Qian-ying3，LIU Peng3，ZHANG Yan-chun4，DAI Zhi-yong4，GAO Ying5，WANG Jun-bo1，2

(1Department Of Nutrition and Food Hygiene，School of Public Health，Peking University，Beijing 100191，China;2Beijing Key Laboratory of Toxicological Research and Risk Assessment for Food Safety，Peking University，Beijing 100191，China;3Peking University People’s Hospital，Beijing 100044，China；4Ausnutria Dairy (China)Company Ltd，Changsha 410200，China；5CAS Key Laboratory of Nutrition and Metabolism，Institute for Nutritional Sciences， Shanghai Institutes for Biological Sciences，Chinese Academy of Sciences，Shanghai 200031，China)

human milk；fatty acids；saturated fatty acids(SFA)；polyunsaturated fatty acids；monounsaturated fatty acids

長(zhǎng)沙市科技計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：K1005092-11)。

李 慧(1991— )，女，在讀碩士研究生，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與疾病。

王軍波(1973— )，男，博士，副教授，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與疾病、嬰幼兒營(yíng)養(yǎng)。