徐 越，吳宛君，白美玲，韓 丹，劉東艷，劉 揚(yáng)，王志勇

(1.河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2014級，河北 張家口 075000；2．河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,河北 張家口 075000；3．河北北方學(xué)院校團(tuán)委，河北 張家口 075000；4.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100700)

TGFBI和TCTP在食管癌組織中的表達(dá)及腫瘤耐藥相關(guān)性

徐 越1，吳宛君1，白美玲2，韓 丹3，劉東艷4，劉 揚(yáng)4，王志勇2

(1.河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2014級，河北 張家口 075000；2．河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,河北 張家口 075000；3．河北北方學(xué)院校團(tuán)委，河北 張家口 075000；4.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100700)

目的 探討轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)基因(transforming growth factor beta induced gene，TGFBI)和翻譯調(diào)控腫瘤蛋白(translationally controlled tumor protein，TCTP)在食管鱗癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素的聯(lián)系及其與腫瘤耐藥性之間的相關(guān)性。方法 免疫組化SP法檢測90例食管鱗癌標(biāo)本及33例正常食管黏膜組織中TGFBI和TCTP的表達(dá)情況，分析二者與食管癌耐藥的關(guān)系及二者之間的相關(guān)性。結(jié)果 食管鱗癌組織中TGFBI和TCTP的陽性表達(dá)率均高于正常組織(P<0.05)；分化程度越低，TGFBI和TCTP的陽性表達(dá)越明顯，呈負(fù)相關(guān)性(P<0.05)；且TGFBI和TCTP的表達(dá)與腫瘤TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與患者年齡、性別等無關(guān)；食管鱗癌組織中TGFBI和TCTP表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 聯(lián)合檢測TGFBI和TCTP可為進(jìn)一步研究食管鱗狀細(xì)胞癌逆轉(zhuǎn)耐藥機(jī)制和判斷患者預(yù)后提供理論依據(jù)。

轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)基因；翻譯調(diào)控腫瘤蛋白；耐藥逆轉(zhuǎn)；食管鱗癌

食管癌是常見消化道惡性腫瘤，發(fā)病率呈逐年遞增趨勢，盡管多年來針對該病的手術(shù)方式和治療方法不斷得到改進(jìn)，但食管癌患者的生存率仍然很不樂觀,可能與常規(guī)化療藥物多藥耐藥有關(guān)。腫瘤多藥耐藥的產(chǎn)生機(jī)制復(fù)雜，已有報道指出轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)基因(transforming growth factor beta induced gene，TGFBI)與翻譯調(diào)控腫瘤蛋白(translationally controlled tumor protein，TCTP)的陽性表達(dá)與腫瘤耐藥密切相關(guān)，但其具體機(jī)制尚不清楚。TGFBI蛋白屬于細(xì)胞外基質(zhì)分子之一，最初被關(guān)注是由于其具有調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附和遷移的能力，腫瘤的類型不同，其表達(dá)情況也不一致，如在胃癌[1]、結(jié)腸癌[2]及腎癌[3]中表達(dá)升高，而在乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)降低。TCTP是一類在多種腫瘤如胃癌、肺癌、肝癌等[4,5]中高度表達(dá)的保守小分子蛋白質(zhì)。

本研究采用免疫組織化學(xué)SP法，檢測TGFBI和TCTP在食管鱗癌中的表達(dá)及其與諸多臨床病理因素的相關(guān)性，以期待為臨床食管癌靶向治療和臨床醫(yī)生判斷患者預(yù)后提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 標(biāo)本 標(biāo)本取自河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院2012—2015年手術(shù)切除的食管鱗癌存檔蠟塊90例，術(shù)前均未進(jìn)行任何治療。其中女性30例，男性60例；年齡在60歲以上患者36例，中位年齡58歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移48例；高分化鱗癌52例，中低分化鱗癌38例。同時取33例癌旁正常食管組織(經(jīng)病理檢查證實(shí)無增生及腫瘤性病變)為對照。

1.1.2 試劑 鼠抗人TGFBI單克隆抗體和鼠抗人TCTP單克隆抗體為Jackson Immuno Research 公司產(chǎn)品，SP免疫組化染色及DAB顯色試劑盒購自武漢博士德公司。

1.2 方法

免疫組織化學(xué)染色：采用常規(guī)SP法，嚴(yán)格按照試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行操作，陽性對照為試劑公司提供。

免疫組織化學(xué)染色評估：TGFBI和TCTP陽性物質(zhì)主要在細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)，部分在胞核內(nèi)出現(xiàn)。HIPAS 100圖象分析儀分析染色結(jié)果，隨機(jī)選取每張切片的5個不重復(fù)區(qū)域，觀察并測量陽性表達(dá)率，以出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，選取均數(shù)作為該切片的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，TGFBI和TCTP表達(dá)及其與各臨床病理特征關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)，Spearman秩相關(guān)分析TGFBI和TCTP的相關(guān)性；兩者相對含量比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 TGFBI和TCTP在食管癌及正常組織中表達(dá)的比較

TGFBI在食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞胞質(zhì)中呈陽性表達(dá)(見圖1)，陽性表達(dá)率為73.42%，高于正常組織(27.23%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；TCTP在食管癌細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有陽性表達(dá)，在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)水平高于細(xì)胞核(見圖2)，在食管癌組織及正常組織中陽性表達(dá)率分別為68.17%和30.56%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。TGFBI和TCTP在食管癌中的陽性表達(dá)率均高于正常組織。

圖1 TGFBI在食管鱗癌的陽性表達(dá)(SP法，x40) 圖2 TCTP在食管鱗癌的陽性表達(dá)(SP法，x40)

2.2 食管鱗癌中TGFBI和TCTP的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

食管鱗癌組織中TGFBI在高分化組的陽性表達(dá)率為44.20%，在中低分化組的陽性表達(dá)率為65.80%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.02)，結(jié)果表明隨著分化程度的降低，TGFBI的陽性表達(dá)率升高；無外膜浸潤組TGFBI的陽性表達(dá)率為52.90%，外膜浸潤組TGFBI的陽性表達(dá)率為71.40%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.003)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組TGFBI陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.014)；TGFBI在I～I(xiàn)I期和III～I(xiàn)V期食管癌組織中的陽性表達(dá)率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.021)；TGFBI的表達(dá)與患者性別、年齡無關(guān)。TCTP在高分化組的陽性表達(dá)率為65.40%，在中低分化組的陽性表達(dá)率為84.20%(P=0.008)，表明TCTP的表達(dá)與分化程度顯著相關(guān)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組TCTP陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.018)；TCTP在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期食管癌組織中的陽性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.005)；TCTP的表達(dá)與患者年齡、性別無關(guān)(見表1)。

表1 TGFBI與TCTP陽性表達(dá)率與食管鱗狀上皮細(xì)胞癌臨床病理特征相關(guān)性

2.3 TGFBI和TCTP在食管鱗狀上皮細(xì)胞癌中表達(dá)的相關(guān)性

58例TGFBI陽性表達(dá)的食管鱗癌患者中TCTP陽性表達(dá)者41例，66例TCTP陽性表達(dá)的患者中TGFBI陽性表達(dá)的有45例，Spearman秩相關(guān)分析顯示TGFBI和TCTP在食管鱗癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.395，P=0.007)。

3 討 論

食管鱗癌近年來發(fā)病率不斷上升，其多藥耐藥是治療需攻克的難點(diǎn)，探討食管癌的耐藥蛋白有重要的臨床意義。

TGFBI基因編碼的TGFBI蛋白屬于細(xì)胞外基質(zhì)成分，TGFBI蛋白主要包含一個精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(arginine-glycine-aspartic acid,RGD)基序和4個高度保守的同源內(nèi)部重復(fù)結(jié)構(gòu)域(fasciclin-1，F(xiàn)as-1)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，TGFBI對不同種類腫瘤細(xì)胞的作用不同，結(jié)腸癌、食管癌及胰腺癌中其表達(dá)水平明顯高于正常組織，但在皮膚癌及乳腺癌中其陽性表達(dá)率接近正常，且隨著惡性程度增加表達(dá)量減少，表明TGFBI與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[6]。本研究結(jié)果顯示TGFBI表達(dá)水平與臨床分期明顯正相關(guān),而與分化程度呈明顯負(fù)相關(guān)，說明隨食管癌分化程度降低及腫瘤發(fā)展至臨床晚期,腫瘤獲得TGFBI耐藥性；其陽性表達(dá)率還與有無外膜浸潤和淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移呈明顯正相關(guān)。

研究表明TCTP可調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生發(fā)展、多藥耐藥、應(yīng)急反應(yīng)、氧化應(yīng)激反應(yīng)等[7]，TCTP可能參與細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、抗凋亡、腫瘤耐藥和腫瘤逆轉(zhuǎn)等生物學(xué)功能[8-10]。本研究表明TCTP陽性表達(dá)率與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期都呈正相關(guān)，因此其表達(dá)水平可作為食管癌患者的一項(xiàng)預(yù)后指標(biāo),據(jù)此指導(dǎo)臨床合理用藥。

本研究結(jié)果顯示食管鱗癌組織中TGFBI和TCTP陽性表達(dá)呈正相關(guān)，臨床中通過檢測二者表達(dá)率來準(zhǔn)確判斷食管癌的發(fā)生發(fā)展對判斷患者預(yù)后有重要意義。

[1]Courtney D G,Toftgaard P E.Protein composition of TGFBI-R124C-and TGFBI-R555W-associated aggregates suggests multiple mechanisms leading to lattice and granular corneal dystrophy[J].Invest Ophthalmol Vis Sci,2015,56(8):4653-4661.

[2]Song J S,Lim D H,Chung E S,et al.Mutation analysis of the TGFBI gene in consecutive Korean patients with corneal dystrophies[J].Ann Lab Med,2015,35(3):336-340.

[3]Han B,Luo H,Raelson J,et al.TGFBI(βIG-H3)is a diabetes-risk gene based on mouse and human genetic studies[J].Hum Mol Genet,2014,23(17):4597-4611.

[4]Fang H,Liu J,Guo D,et al.Epigenetic regulation of putative tumor suppressor TGFBI in human leukemias[J].Chin Med J,2014,127(9):1645-1650.

[5]Kojima Y,Inoue T,Hori Y,et al.Unilateral variant of late-onset lattice corneal dystrophy with the Pro501Thr mutation in the TGFBI gene without deposits in the unaffected cornea using confocal microscopy[J].Cornea,2013,32(10):1396-1398.

[6]Bommer U A,Iadevaia V,Chen J,et al.Growth-factor dependent expression of the translationally controlled tumour protein TCTP is regulated through the PI3-K/Akt/mTORC1 signalling pathway[J].Cell Signal,2015,27(8):1557-1568.

[7]Kaarbφ M,Storm M L,Qu S,et al.Correction:TCTP is an androgen-regulated gene implicated in prostate cancer[J].PLoS One,2015,10(5):1791-1798.

[8]Miao X,Chen Y B,Xu S L,et al.TCTP overexpression is associated with the development and progression of glioma[J].Tumor Biol,2013,34(6):3357-3361.

[9]Buch D R,Souza F N,Meissner G O，et al.Brown spider(Loxosceles genus)venom toxins:Evaluation of biological conservation by immune cross-reactivity[J].Toxicon，2015,108:154-166.

[責(zé)任編輯：李薊龍 英文編輯：劉彥哲]

Expression of TGFBI and TCTP in Esophageal Carcinoma and Correlation with Tumor Drug Resistance

XU Yue1,WU Wan-jun2,BAI Mei-ling2，HAN Dan3,LIU Dong-yan4,LIU Yang4,WANG Zhi-yong2
(1.Student of Grade 2014,School of Basic Medicine of Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China;2.School of Basic Medicine of Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China;3.League Committee of Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China;4.Department of Laboratory Medicine,Dongzhimen Hospital of Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100700,China)

Objective To investigate the correlation between the expression of TGFBI and TCTP in esophageal squamous cell carcinoma and clinicopathological factors as well as their correlation with tumor resistance.Methods Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of TGFBI and TCTP in 90 cases of esophageal squamous cell carcinoma and 33 cases of normal esophageal mucosa.The relationship between the expression of TGFBI and TCTP and esophageal cancer resistance,and the correlation between TGFBI and TCTP were analyzed.Results The positive expressions of TGFBI and TCTP in esophageal squamous cell carcinoma were higher than those in normal tissue(P< 0.05);along with the lower degree of differentiation,the expression of TGFBI and TCTP increased significantly,while the degree of differentiation and the expression of TGFBI and TCTP was negatively correlated(P<0.05).The expression of TGFBI and TCTP were related tostage of Tumor Node Metastasis and lymph node metastasis(P<0.05),but not to age and gender.The expressions of TGFBI and TCTP in esophageal squamous cell carcinoma were positively correlated(P<0.05).Conclusion The combined detection of the expressions of TGFBI and TCTP can provide a theoretical basis for further study on the reversal of drug resistance and prognosis in esophageal squamous cell carcinoma.

TGFBI;TCTP;drug resistance reversal;esophageal squamous cell carcinoma

河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究青年基金項(xiàng)目(No.QN2014217)；河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(No.ZD20140202)；河北北方學(xué)院青年基金項(xiàng)目(No.Q2014033)

徐越(1996-)，女，河北唐山人，河北北方學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2014級法醫(yī)學(xué)1班學(xué)生。

指導(dǎo)教師：白美玲(1979-)，女，河北張家口人，講師，醫(yī)學(xué)碩士，從事消化道腫瘤研究。

R 730.2

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2017.04.001

來稿日期：2016-11-02