張若緯，彭冬秀，武云鵬，李素文，肖瑜，運(yùn)潔，王欽，張國(guó)華，田力鵬，吳均

（1.蔬菜種質(zhì)創(chuàng)新國(guó)家重點(diǎn)試驗(yàn)室·天津科潤(rùn)蔬菜研究所天津300384；2.天津市農(nóng)業(yè)廣播電視學(xué)校西青區(qū)分校天津300380）

甜瓜白粉病苗期抗病性鑒定方法

張若緯1，彭冬秀1，武云鵬1，李素文1，肖瑜1，運(yùn)潔1，王欽1，張國(guó)華1，田力鵬1，吳均2

（1.蔬菜種質(zhì)創(chuàng)新國(guó)家重點(diǎn)試驗(yàn)室·天津科潤(rùn)蔬菜研究所天津300384；2.天津市農(nóng)業(yè)廣播電視學(xué)校西青區(qū)分校天津300380）

為了探究一種高效的甜瓜白粉病苗期抗病性鑒定方法，筆者以薄皮甜瓜自交系‘KR-89’為試驗(yàn)材料，對(duì)接種方法（噴霧法、刷葉法、摩擦法）、接種時(shí)期（1葉1心、2葉1心、3葉1心）、接種濃度（2×104、2×106、2×108個(gè)·mL-1）進(jìn)行了系統(tǒng)研究。結(jié)果表明，甜瓜白粉病苗期最佳接種方法為噴霧法，發(fā)病率為96.66%，且操作簡(jiǎn)單易行；當(dāng)幼苗長(zhǎng)到2葉1心時(shí)，接種后發(fā)病快、發(fā)病率高，為94.66%，是最佳的接種時(shí)期；甜瓜白粉病苗期接種最適宜的孢子懸浮液濃度為2×106個(gè)·mL-1，發(fā)病率為96.00%。

甜瓜；白粉??；苗期；抗病性

白粉病俗稱(chēng)“白毛病”、“粉霉病”，是瓜類(lèi)作物普遍發(fā)生的病害之一。白粉病在全國(guó)各地瓜類(lèi)種植區(qū)保護(hù)地、露地均可發(fā)生，且多發(fā)生在結(jié)瓜期及成熟期[1]。隨著甜瓜栽培面積的逐年增加，白粉病已逐漸成為我國(guó)甜瓜主要病害之一。甜瓜白粉病發(fā)生初期主要危害葉片，若未及時(shí)防治，會(huì)迅速擴(kuò)展，后期蔓延至葉柄、莖蔓甚至果實(shí)上，最終導(dǎo)致葉片增厚老化而植株早衰，果實(shí)膨大受抑制而產(chǎn)量降低，嚴(yán)重影響果實(shí)品質(zhì)而失去市場(chǎng)價(jià)值[2]。甜瓜白粉病雖不是致命病害，可以采用化學(xué)防治，但由于危害瓜類(lèi)白粉病的病原菌生理小種較多且分化快，化學(xué)藥劑很難有效地保證瓜類(lèi)作物的無(wú)公害生產(chǎn)[3]。因此，選育抗白粉病甜瓜品種是解決此問(wèn)題的根本途徑。培育抗病品種需要相應(yīng)抗性材料作基礎(chǔ)，而進(jìn)行苗期抗白粉病接種鑒定是對(duì)育種材料進(jìn)行抗性評(píng)價(jià)、較快速篩選抗性材料的有效方法。甜瓜白粉病苗期接種鑒定研究較少，僅有對(duì)接種濃度和接種方法的研究[4]。故筆者在前人研究基礎(chǔ)上，利用薄皮甜瓜自交系為試驗(yàn)材料，首次對(duì)接種時(shí)期進(jìn)行了研究，對(duì)接種濃度進(jìn)行了改進(jìn)，率先對(duì)接種時(shí)期、接種方法、接種濃度等進(jìn)行系統(tǒng)研究，為進(jìn)一步開(kāi)展甜瓜抗白粉病育種奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1材料

試驗(yàn)于2015年5月在天津科潤(rùn)蔬菜研究所進(jìn)行。供試甜瓜試驗(yàn)材料為天津科潤(rùn)蔬菜研究所甜瓜研究室選育的薄皮甜瓜高代自交系‘KR-89’；白粉病菌取自塑料大棚自然發(fā)病的甜瓜葉片。

1.2方法

1.2.1接種方法接種方法采用噴霧法、刷葉法、摩擦法3種。噴霧法：于甜瓜幼苗2葉1心期用L型手持噴霧瓶將濃度為2×106個(gè)·mL-1的孢子懸浮液均勻噴灑到甜瓜葉片上，以菌液布滿(mǎn)葉片但不滴落為宜。刷葉法：甜瓜幼苗2葉1心期用滅菌后的毛筆將濃度為2×106個(gè)·mL-1的孢子懸浮液均勻刷到葉片上。摩擦法：將少量石英砂撒到甜瓜2 葉1心期幼苗葉片上，再用滅菌紗布蘸取濃度為2×106個(gè)·mL-1的孢子懸浮液輕輕涂抹在葉片上。以上3種方法共設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)接種50株幼苗。接種后均置于人工氣候箱中培養(yǎng)，保持夜晚溫度18℃，白天溫度28℃,相對(duì)濕度為85%，10 d后調(diào)查白粉病發(fā)病情況。

1.2.2接種時(shí)期分別在甜瓜幼苗1葉1心、2葉1心、3葉1心期將濃度為2×106個(gè)·mL-1的孢子懸浮液用L型手持噴霧瓶噴灑到葉片上，每個(gè)處理3次重復(fù)，每次重復(fù)接種50株。接種后均置于人工氣候箱中培養(yǎng)，保持夜晚溫度18℃，白天溫度28℃，相對(duì)濕度為85%，10 d后調(diào)查發(fā)病情況。

1.2.3接種濃度從田間植株上采集充分發(fā)病的甜瓜葉片，用滅菌的毛筆將白粉病病菌刷入含無(wú)菌蒸餾水的培養(yǎng)皿中，轉(zhuǎn)入三角瓶震蕩使孢子團(tuán)分散，加入1滴吐溫20，用血球計(jì)數(shù)板觀測(cè)孢子懸浮液濃度，調(diào)至最終濃度為2×104、2×106、2×108個(gè)·mL-1，之后將不同濃度的孢子懸浮液用L型手持噴霧瓶噴灑到2葉1心期的甜瓜幼苗上，每個(gè)處理3次重復(fù)，每次重復(fù)接種50株。接種后均置于人工氣候箱中培養(yǎng)，保持夜晚溫度18℃，白天溫度28℃，相對(duì)濕度為85%，10 d后調(diào)查發(fā)病情況。

2 結(jié)果與分析

2.1接種方法對(duì)白粉病發(fā)病率的影響

由表1可以看出，接種方法對(duì)白粉病的發(fā)病情況影響顯著。噴霧法發(fā)病率最高，為96.66%，刷葉法的發(fā)病率為82.00%，摩擦法的發(fā)病率為76.66%。經(jīng)生物學(xué)統(tǒng)計(jì)分析，刷葉法和摩擦法的發(fā)病率差異顯著，而噴霧法接種后與另外2種方法接種后發(fā)病率差異極顯著，為本試驗(yàn)最佳白粉病接種方法。

表1不同接種方法對(duì)白粉病發(fā)病率的影響

2.2接種時(shí)期對(duì)白粉病發(fā)病率的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（表2），當(dāng)甜瓜幼苗長(zhǎng)到2葉1心時(shí)期，接種白粉病病原菌后發(fā)病率為94.66%，且發(fā)病較快，與其余2個(gè)處理的差異達(dá)到極顯著水平，為最佳接種時(shí)期。幼苗1葉1心期接種后發(fā)病率最低，為80.66%，3葉1心期接種后發(fā)病率為84.66%，2者間差異顯著。

表2不同接種時(shí)期對(duì)白粉病發(fā)病率的影響

2.3接種濃度對(duì)白粉病發(fā)病率的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（表3），白粉病病原菌孢子懸浮液濃度不同時(shí)，接種后幼苗發(fā)病率亦有顯著不同。接種濃度為2×104個(gè)·mL-1時(shí)，發(fā)病率最低，為66.66%；隨著濃度的增加，發(fā)病率明顯增加，接種濃度為2×106個(gè)·mL-1時(shí)，發(fā)病率最高為96.00%；當(dāng)接種濃度為2×108個(gè)·mL-1時(shí)，發(fā)病率反而降低，為82.00%。經(jīng)差異顯著性分析，接種濃度為2×106個(gè)·mL-1時(shí)的發(fā)病率與另外2種濃度接種的發(fā)病率達(dá)到極顯著差異水平，因此認(rèn)為該濃度為白粉病接種的最佳孢子懸浮液濃度。

表3不同接種濃度對(duì)白粉病發(fā)病率的影響

3 討論

筆者對(duì)甜瓜白粉病苗期接種鑒定涉及到的接種方法、接種時(shí)期、接種濃度進(jìn)行了初步探索。在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，從田間病葉上收集病原菌時(shí)的病斑形態(tài)和孢子發(fā)育時(shí)期對(duì)接種后的發(fā)病情況亦有一定影響，選擇發(fā)病初期的葉片即病原菌剛形成時(shí)較為適宜，此期病原菌孢子的活力最高，致病力最強(qiáng)。接種方法以噴霧法發(fā)病率最高，且操作簡(jiǎn)便易行，為最適宜方法，但與前人研究有一定差異[4]，可能與接種材料、接種后管理方法不同密切相關(guān)；噴霧接種法在其他瓜類(lèi)作物等病害苗期接種鑒定及相關(guān)研究中應(yīng)用較為廣泛[5-8]。關(guān)于甜瓜白粉病苗期接種時(shí)期的研究未見(jiàn)有報(bào)道，本試驗(yàn)白粉病苗期接種的最佳時(shí)期為2葉1心時(shí)期，與相關(guān)研究采用的接種時(shí)期一致[9]。伴隨接種濃度的升高，發(fā)病率呈現(xiàn)出“低-高-低”的變化趨勢(shì)，濃度較低時(shí)，發(fā)病慢且發(fā)病時(shí)間較長(zhǎng)，孢子懸浮液濃度為2×106個(gè)·mL-1時(shí)，發(fā)病率最高。本試驗(yàn)接種后均在人工氣候箱內(nèi)管理，光照、溫度、濕度等環(huán)境條件較一致，確保了試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，為進(jìn)一步開(kāi)展抗白粉病育種打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

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本刊聲明

本刊刊登的稿件，視為作者同意本刊對(duì)該文稿、圖片擁有復(fù)制、匯編、發(fā)行及在網(wǎng)絡(luò)、光盤(pán)等數(shù)字傳媒上進(jìn)行傳播宣傳的使用權(quán)。所付稿酬已包含上述使用費(fèi)。如有異議，請(qǐng)?jiān)趤?lái)稿時(shí)說(shuō)明。

《中國(guó)瓜菜》編輯部

Resistance identification method of melon powdery mildew at seedling stage

ZHANG Ruowei1,PENG Dongxiu1,WU Yunpeng1,LI Suwen1,XIAO Yu1,YUN Jie1,WANG Qin1, ZHANG Guohua1,TIAN Lipeng1,WU Jun2

(1.State Key Laboratory of Vegetable Gemplasm Innovation,Tianjin Kernel Vegetable Research Institute,Tianjin 300384,China;2.Tianjin Xiqing District Agricultural Broadcasting and Television School Campus,Tianjin 300380,China）

In order to explore an effective resistance identification method of melon powdery mildew at seedling stage, the inbred line‘KR-89’was used in this research,the inoculation methods(spray method,leaf brush method,mechanical inoculation method),inoculation stages(seedling with one leaf,two leaves and tree leaves)and inoculation concentrations (2×104per milliliter,2×106per milliliter,2×108per milliliter)were studied.The results showed that the best inoculation method was sprayed(the incidence was 96.66%),the most appropriate stage was the seedlings with two leaves stage(the incidence was 94.66%),and the optimum concentration was 2×106per milliliter(the incidence was 96.00%).

Melon;Powdery mildew;Seedling;Disease resistece

2016-07-13；

：2016-12-08

天津市院長(zhǎng)基金項(xiàng)目（13006）；天津市科技創(chuàng)新體系及平臺(tái)建設(shè)計(jì)劃“設(shè)施精品蔬菜品種分子育種技術(shù)平臺(tái)建設(shè)（14TX?SYJC00463）”

張若緯，女，助理研究員，研究方向?yàn)樘鸸线z傳育種。E-mail：zhangruowei0102@163.com

李素文，女，研究員，研究方向?yàn)榛ㄒ诉z傳育種。Tel：022-23792115；E-mail：tjvri@126.com