高 騰,陳建酬

(1.廣東省清遠(yuǎn)市水產(chǎn)技術(shù)推廣站,廣東 清遠(yuǎn) 511515;2.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與工程學(xué)院,廣東 佛山 528231)

微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦幼體發(fā)育的影響

高 騰1,陳建酬2*

(1.廣東省清遠(yuǎn)市水產(chǎn)技術(shù)推廣站,廣東 清遠(yuǎn) 511515;2.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院 生命科學(xué)與工程學(xué)院,廣東 佛山 528231)

研究了不同質(zhì)量濃度的微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦(Macrobrachiumrosenbergii)幼體生長(zhǎng)發(fā)育的影響。試驗(yàn)分為5組，對(duì)照、A、B、C、D組的微綠球藻質(zhì)量濃度分別為0、2.5×105、7.5×105、12.5×105和25.0×105cell/mL。試驗(yàn)結(jié)果顯示: C組和D組的羅氏沼蝦幼體存活率分別為54.7%和59.3%,顯著高于其他組的(P<0.05);C組和D組的幼體變態(tài)時(shí)間顯著短于A組與對(duì)照組的,以D組的變態(tài)時(shí)間最短,僅為29.3 d；C組和D組的變態(tài)仔蝦干重顯著大于A組與對(duì)照組的；不同濃度微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦變態(tài)仔蝦的全長(zhǎng)影響不顯著。說(shuō)明在羅氏沼蝦育苗過(guò)程中,添加12.5×105～25.0×105cell/mL的微綠球藻,有利于羅氏沼蝦幼體的生長(zhǎng)發(fā)育。

羅氏沼蝦;微綠球藻;育苗;幼體；存活率;發(fā)育

羅氏沼蝦(Macrobrachiumrosenbergii)又稱馬來(lái)西亞大蝦、淡水長(zhǎng)臂大蝦,是目前世界上重要的淡水養(yǎng)殖蝦類之一[1]。20世紀(jì)60年代,羅氏沼蝦人工繁殖獲得成功,推動(dòng)了其規(guī)?；庇宛B(yǎng)殖的全球化發(fā)展。目前,羅氏沼蝦苗種產(chǎn)業(yè)在國(guó)內(nèi)某些省市發(fā)展趨勢(shì)良好,但其育苗生產(chǎn)還存在一些不足,如苗種存活率不高、出苗不齊、蝦苗抗病力弱(易患白尾病)、變態(tài)仔蝦個(gè)體小等問(wèn)題,這在一定程度上制約了羅氏沼蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。因此,開(kāi)展羅氏沼蝦幼體發(fā)育的研究對(duì)提高其苗種產(chǎn)量具有重要意義。

現(xiàn)代育苗實(shí)踐認(rèn)為,微藻在甲殼動(dòng)物特別是蝦蟹類動(dòng)物苗種培育過(guò)程中占有重要地位。利用微藻富含高度不飽和脂肪酸的特點(diǎn),可以通過(guò)直接營(yíng)養(yǎng)作用或營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化動(dòng)物性餌料,間接促進(jìn)蝦蟹苗種發(fā)育和提高苗種的存活率[2-5]。微藻對(duì)改善水體也起到十分重要的作用。微藻在其種群持續(xù)穩(wěn)定過(guò)程中,通過(guò)生長(zhǎng)作用吸收并消除水體中有毒有害物質(zhì),通過(guò)光合作用提高水體溶氧,從而可為養(yǎng)殖動(dòng)物提供一個(gè)健康的養(yǎng)殖環(huán)境[6-7]。微綠球藻作為水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物生態(tài)育苗的重要微藻之一,具有易培養(yǎng)、繁殖迅速、營(yíng)養(yǎng)豐富的特點(diǎn),在泥蚶、蟹、蝦等育苗及輪蟲(chóng)培養(yǎng)中應(yīng)用較為廣泛,是目前生態(tài)養(yǎng)殖領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。研究發(fā)現(xiàn),在羅氏沼蝦幼體培育池中添加微綠球藻,幼體存活率提高30%以上,出苗時(shí)間縮短[8];微綠球藻的凈化和穩(wěn)定水質(zhì)能力最好,能有效抑制有害藻類過(guò)度繁殖,提高中華絨螯蟹幼體的變態(tài)存活率[9]。

我們開(kāi)展了用不同質(zhì)量濃度微綠球藻培育羅氏沼蝦幼體的育苗試驗(yàn),旨在分析微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦幼體培育的影響,并探討微綠球藻培育羅氏沼蝦幼體的適宜濃度,為羅氏沼蝦生態(tài)育苗提供一種新的思路和技術(shù)方法。

1 材料與方法

1.1 幼體來(lái)源及管理

羅氏沼蝦親蝦購(gòu)自廣東清遠(yuǎn)市某羅氏沼蝦良種場(chǎng),幼體來(lái)源于同一批次同一天生產(chǎn)的親本雌蝦。幼體孵出后,撈取趨光性強(qiáng)、活力好和經(jīng)檢測(cè)無(wú)攜帶特定病原體的幼體,暫養(yǎng)于體積100 L的白色塑料桶中。水質(zhì)因子控制:鹽度12,1000 lx光照12 h/d,溫度(30±1)℃,溶氧(6.0±0.5)mg/L, pH 7.8±0.5,總氨氮含量小于0.02 mg/L。

1.2 藻液活化及擴(kuò)培處理

采用成永旭等[10]的方法配制微綠球藻的培養(yǎng)液。培養(yǎng)液配方為NaCl 2.673 g, MgCl20.226 g,Na2HPO42 mg, Na2SiO32 mg, MgSO40.325 g, KCl 73 mg, NaHCO319.8 mg, NH4Cl 5.3 mg, CaCl2115 mg, FeC6H5O70.1 mg, KBr 5.8 mg, H3BO35.8 mg,純水100 mL。每天加入10 mL鹽度為12的配制海水,確保已馴化的微綠球藻能在鹽度12的咸淡水中正常生長(zhǎng),并用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)算1 mL培養(yǎng)液中微綠球藻細(xì)胞的濃度。微綠球藻的培養(yǎng)液現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)置5種不同質(zhì)量濃度的微綠球藻液水體,分別為:0 cell/mL(對(duì)照組)、2.5×105cell/mL(A組)、7.5×105cell/mL(B組)、12.5×105cell/mL(C組)和25.0×105cell/mL(D組)。每組試驗(yàn)設(shè)6個(gè)重復(fù),每個(gè)平行組用體積1000 mL大燒杯恒溫水浴培養(yǎng)50尾剛孵化出來(lái)的羅氏沼蝦幼體。培養(yǎng)水質(zhì)因子控制同1.1節(jié),按照工廠化育苗規(guī)范管理試驗(yàn)。每2 d更換1次藻液水體,記錄大燒杯中存活的幼體數(shù)量。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

用游標(biāo)卡尺測(cè)量仔蝦的全長(zhǎng)L(mm);變態(tài)時(shí)間t為幼體全部發(fā)育變態(tài)成為仔蝦的時(shí)間(d)。相關(guān)計(jì)算公式如下：

R=S/S0×100%；

M=(M總-M錫箔杯)/N×100%；

LSI=(Z1×1+Z2×2+Z3×3+…+Z11×11+P×12)/(Z1+Z2+Z3+…+Z11+P)。

上式中:R為存活率(%);S、S0分別為結(jié)束時(shí)的存活幼體數(shù)、試驗(yàn)初始時(shí)的幼體總數(shù);M為仔蝦干重(mg);M總、M錫箔杯分別表示樣品和錫箔杯的總重量、錫箔杯的重量(mg);N為稱量的幼體數(shù)量;LSI為幼體期指數(shù)；Z1、Z2、Z3、…、Z11分別表示羅氏沼蝦幼體1～11期的存活數(shù)量;P為變態(tài)成為仔蝦的數(shù)量；從溞狀幼體1期到仔蝦分別賦予1個(gè)數(shù)值,即1、2、3、…、11、12,代表幼體所處的發(fā)育階段。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel和軟件SPSS 17.0對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示,對(duì)組間平均值進(jìn)行差異顯著性分析,確定差異顯著后再進(jìn)行多重比較,顯著水平為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦幼體發(fā)育速度的影響

在不同質(zhì)量濃度微綠球藻的培育條件下,羅氏沼蝦幼體的發(fā)育速度有著明顯差別(圖1)。在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中,D組的幼體發(fā)育速度(以幼體期指數(shù)LSI計(jì))最快,對(duì)照組最慢,其余3個(gè)試驗(yàn)組幼體的發(fā)育速度居中。在第35天,C組和D組的幼體完全變態(tài)為仔蝦,而A、B兩組與對(duì)照組之間的幼體發(fā)育速度無(wú)明顯差異(P>0.05);在第40天,除對(duì)照組外,4個(gè)試驗(yàn)組的幼體全部變態(tài)發(fā)育成為仔蝦。

圖1 羅氏沼蝦幼體期指數(shù)的變化

2.2 微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦幼體存活率的影響

在不同質(zhì)量濃度微綠球藻培育條件下,羅氏沼蝦幼體的最終存活率明顯不同(圖2)。在高濃度微綠球藻D組，羅氏沼蝦幼體的最終存活率最高,為59.3%；對(duì)照組的幼體最終存活率為32.3%,遠(yuǎn)低于高濃度微綠球藻C組和D組(P<0.05),但與A組和B組的幼體最終存活率差異不顯著(P>0.05)。

在試驗(yàn)第1～8天,各組之間的幼體存活率均大于80%,差異不明顯;從第10天起,各組的幼體存活率出現(xiàn)了明顯差異,A組、B組和對(duì)照組的幼體死亡率較高,而C組和D組的幼體死亡率較低。另外,C組和D組的第1尾變態(tài)仔蝦出現(xiàn)較快,分別為第22天和第24天,而對(duì)照組第1尾變態(tài)仔蝦出現(xiàn)最為緩慢,為第36天(圖3)。

圖2 羅氏沼蝦幼體的最終存活率

圖3 羅氏沼蝦幼體存活率的變化

2.3 微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦仔蝦全長(zhǎng)、體重以及變態(tài)時(shí)間的影響

從表1可以看出：不同質(zhì)量濃度微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦變態(tài)仔蝦的全長(zhǎng)影響不顯著(P>0.05),而對(duì)變態(tài)仔蝦干重的影響顯著(P<0.05)。C組的變態(tài)仔蝦干重最大,為(1.88±0.22) mg，其次是D組的(1.87±0.21) mg,這2組的變態(tài)仔蝦干重均顯著大于對(duì)照組和A組的。另外,C組和D組幼體的變態(tài)時(shí)間均明顯短于對(duì)照組的(P<0.05),其中以D組的幼體變態(tài)歷時(shí)最短,僅為29.3 d,比對(duì)照組提前了12.3 d。

表1 羅氏沼蝦仔蝦的全長(zhǎng)、干重及變態(tài)時(shí)間

注:同一列數(shù)據(jù)后字母相同表示差異不顯著(P>0.05),字母不相同表示差異顯著(P<0.05)。

3 討論

3.1 微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦幼體存活率及生長(zhǎng)的影響

在本試驗(yàn)中,當(dāng)微綠球藻質(zhì)量濃度高于12.5×105cell/mL時(shí),羅氏沼蝦幼體培育存活率高;當(dāng)濃度低于7.5×105cell/mL時(shí),存活率顯著降低。這表明微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦幼體存活率的影響在7.5×105～12.5×105cell/mL質(zhì)量濃度水平之間存在一個(gè)關(guān)鍵臨界閾值。高濃度微綠球藻D組的幼體整體發(fā)育明顯比其他試驗(yàn)組和對(duì)照組要快,這明顯體現(xiàn)在幼體期指數(shù)(LSI)上,D組幼體在相同培養(yǎng)時(shí)間下均表現(xiàn)出最高的LSI。LSI可以表示幼體的生長(zhǎng)發(fā)育速度,同一時(shí)期的LSI越大,則表示幼體變態(tài)生長(zhǎng)發(fā)育越快[11]。在本試驗(yàn)中,各組的LSI在第5天表現(xiàn)出差異性,表明微綠球藻在育苗早期就對(duì)羅氏沼蝦幼體的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生了影響。另外,高濃度的微綠球藻在某種程度上促進(jìn)了羅氏沼蝦幼體的變態(tài)發(fā)育,其中C組和D組的變態(tài)仔蝦干重較大就是一個(gè)很好的例證。然而,不同濃度微綠球藻處理組間,變態(tài)仔蝦的全長(zhǎng)差異不顯著,說(shuō)明不同質(zhì)量濃度的微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦變態(tài)仔蝦全長(zhǎng)的影響不大。

此外,微綠球藻可為羅氏沼蝦幼體提供更好的營(yíng)養(yǎng)。Manzi等[12]在羅氏沼蝦幼體的消化道中發(fā)現(xiàn)存在微綠球藻,卻沒(méi)有證據(jù)直接證明該微綠球藻可被幼體直接消化或?qū)τ左w有直接的營(yíng)養(yǎng)作用。從攝食特性來(lái)分析,羅氏沼蝦幼體是偏肉食性動(dòng)物,對(duì)微綠球藻的直接消化吸收是有一定限度的。但據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,甲殼類動(dòng)物幼體可通過(guò)捕食微藻營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化過(guò)的鹵蟲(chóng),從而間接獲得營(yíng)養(yǎng)[13-14]。鹵蟲(chóng)作為羅氏沼蝦幼體的主要活餌料,其體內(nèi)高度不飽和脂肪酸(HUFA)含量低,特別是二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)含量不足,但這些高度不飽和脂肪酸對(duì)魚(yú)類和甲殼類幼體的存活及生長(zhǎng)發(fā)育起到十分重要的作用[15]。因此,鹵蟲(chóng)的HUFA含量往往決定鹵蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。微綠球藻雖然缺乏DHA,卻富含EPA[16-17]。在某種程度上,微綠球藻在營(yíng)養(yǎng)上可強(qiáng)化鹵蟲(chóng),提高鹵蟲(chóng)作為活餌料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,從而為羅氏沼蝦幼體間接提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

3.2 微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦育苗生態(tài)環(huán)境的影響

微綠球藻可以為羅氏沼蝦幼體提供一個(gè)良好的生態(tài)環(huán)境,有利于提高水體的生態(tài)質(zhì)量。微藻通過(guò)生理活動(dòng)可以降低水體中氨氮等有害物質(zhì)的濃度,通過(guò)光合作用增加水體中溶氧量,為幼體創(chuàng)造良好的生活環(huán)境[18-20]。在本試驗(yàn)中,每2 d完全更換一次水,水體中氨氮等物質(zhì)沒(méi)有表現(xiàn)出毒害作用,可實(shí)際育苗水體中的非離子氨氮、亞硝酸鹽等物質(zhì)的毒性作用很強(qiáng),可能會(huì)導(dǎo)致育苗失敗。微藻在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)不斷地向周圍釋放許多有機(jī)代謝產(chǎn)物,如碳水化合物、脂類、肽類、毒素、抑制因子和促進(jìn)因子等,使微藻細(xì)胞周圍形成一種獨(dú)特的藻際微環(huán)境。據(jù)報(bào)道,藻際微環(huán)境存在抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的抗生素類物質(zhì),這類物質(zhì)可以抑制水體中有害病原微生物的繁殖,降低蝦類幼體感染病菌和發(fā)病的幾率。有研究發(fā)現(xiàn)[21],弧菌屬是羅氏沼蝦幼體培育過(guò)程中主要的條件致病菌屬之一,而在微綠球藻培養(yǎng)系統(tǒng)中則幾乎分離不到弧菌,說(shuō)明微綠球藻系統(tǒng)可以抑制水體中有害弧菌的繁殖。另?yè)?jù)報(bào)道[22],在不使用抗生素藥物的情況下,在對(duì)蝦育苗過(guò)程中,弧菌密度在養(yǎng)殖水體中出現(xiàn)過(guò)兩個(gè)高峰,在此之間,弧菌數(shù)量的波谷明顯與微藻濃度有直接的聯(lián)系,表明微藻具有簡(jiǎn)單的生態(tài)調(diào)控作用。因此,在羅氏沼蝦幼體培育系統(tǒng)中添加微綠球藻,可以起到多重或協(xié)同效應(yīng),提高育苗效果。但微綠球藻在凈水和促進(jìn)苗種生長(zhǎng)等方面的作用機(jī)制,以及它們之間的關(guān)聯(lián)性,還有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

4 結(jié)論

不同濃度的微綠球藻對(duì)羅氏沼蝦幼體的生長(zhǎng)發(fā)育影響不一樣。在羅氏沼蝦育苗過(guò)程中,添加12.5×105～25.0×105cell/mL的微綠球藻,有利于羅氏沼蝦幼體的生長(zhǎng)發(fā)育,對(duì)提高幼體存活率、縮短幼體變態(tài)時(shí)間和增加仔蝦干重等具有明顯的作用。

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(責(zé)任編輯:黃榮華)

Influence ofNannochlorisoculataon Development ofMacrobrachiumrosenbergiiLarvae

GAO Teng1, CHEN Jian-chou2*

(1. Fishery Technique Popularization Station of Qingyuan City, Guangdong Province, Qingyuan 511515, China;2. College of Life Science and Engineering, Foshan University of Science and Technology, Foshan 528231, China)

The influence of different mass concentrations ofNannochlorisoculataon the growth and development ofMacrobrachiumrosenbergiilarvae was studied. This experiment designed five groups, and the mass concentration ofN.oculatain the control group, group A, group B, group C and group D was 0, 2.5×105, 7.5×105, 12.5×105and 25.0×105cell/mL, respectively. The experimental results showed that the larval survival rate ofM.rosenbergiiin group C and group D was 54.7% and 59.3%, respectively, which was significantly higher than that in the other groups (P<0.05). The metamorphic time ofM.rosenbergiilarvae in group C and group D was significantly shorter than that in group A and the control group, and the metamorphic time in group D was the shortest (29.3 d). The dry weight of metamorphic shrimps in group C and group D was significantly heavier than that in group A and the control group. The different mass concentrations ofN.oculatahad no significant influence on the full-length of metamorphic shrimps. It is concluded that adding 12.5×105～25.0×105cell/mLN.oculatais conducive to the growth and development ofM.rosenbergiilarvae in the course of larval breeding.

Macrobrachiumrosenbergii;Nannochlorisoculata; Larval breeding; Larvae; Survival rate; Development

2017-01-01

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013B020502003);佛山市科技創(chuàng)新專項(xiàng)基金項(xiàng)目(2014AG10022)。

高騰(1988─),男,助理工程師,研究方向?yàn)榈B(yǎng)殖和水產(chǎn)動(dòng)物繁育。*通訊作者:陳建酬。

S968.22

A

1001-8581(2017)06-0090-04