于 非

(黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院，哈爾濱150069)

樹莓組織培養(yǎng)快繁體系的建立

于 非

(黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院，哈爾濱150069)

以樹莓品種“哈瑞太茲”和“紅寶玉”1年生枝條帶腋芽的莖段為外植體，研究光照時(shí)長、植物生長調(diào)節(jié)劑對腋芽增殖的影響；探討組培苗生根的最佳培養(yǎng)基，以建立樹莓組織培養(yǎng)快繁體系。結(jié)果表明：“哈瑞太茲”的培養(yǎng)基為MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂；“紅寶玉”的培養(yǎng)基為MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂,光照時(shí)長12～14h/d最佳；組培苗最佳生根培養(yǎng)基均為1/2MS+1mg/L IBA+2mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L。

樹莓；培養(yǎng)基；生根；快繁

樹莓(Rubusspp.)為薔薇科懸鉤子屬植物，灌木型果樹，果實(shí)為聚合漿果，其根、莖、葉皆有藥用價(jià)值，顏色鮮艷，口感良好，即可鮮食，也可以加工成果汁、果醬、果凍等多種食品添加劑，可清除氧自由基、提高免疫力、具有美容和抗衰老的作用；富含天然的阿司匹林，可抗血凝、鎮(zhèn)痛解熱[1]；含有居各類食物之首的抗癌物質(zhì)，歐洲人稱其為“癌癥克星”。其營養(yǎng)價(jià)值跟經(jīng)濟(jì)價(jià)值都高于市面上大部分水果。市近年來世界發(fā)展最為迅速、及營養(yǎng)和保健于一身的新興水果[2-3]。

樹莓栽培最早起源于歐洲。15世紀(jì)中期西歐國家把樹莓作為果樹開始栽培，末期已經(jīng)發(fā)展成樹莓產(chǎn)業(yè)；18世紀(jì)樹莓被引入美洲，19世紀(jì)以后成為世界廣泛栽培的漿果類果樹[4]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，20世紀(jì)90年代中期世界樹莓總產(chǎn)量已經(jīng)達(dá)到306326 t。我國開發(fā)和利用樹莓的歷史悠久，自古就有食用和藥用的記載。李時(shí)珍《本草綱目》中稱：“懸鉤，樹生，高四、五尺，其莖白色，有倒刺，故名懸鉤”[5-6]。

黑龍江省近幾年不斷從外地引進(jìn)優(yōu)良的樹莓品種，“哈瑞太茲”和“紅寶玉”屬于紅樹莓類群也稱空心莓類群，果實(shí)成熟時(shí)花托與果實(shí)分離。研究樹莓組織培養(yǎng)快繁技術(shù)對于我省的樹莓品種推廣及應(yīng)用具有巨大的意義[7]。本實(shí)驗(yàn)研究光照時(shí)長、芽萌發(fā)最佳培養(yǎng)基、組培苗生根的最佳培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，以建立樹莓組織培養(yǎng)快繁體系，提高樹莓優(yōu)質(zhì)種苗繁殖速度。

1 試驗(yàn)材料

1.1 外植體選擇

本試驗(yàn)采用樹莓品種“哈瑞太茲”和“紅寶玉”一年生枝條帶腋芽的莖段為外植體，采集地點(diǎn)為黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院。

1.2 材料處理

將采集的樹莓枝條葉片去除，在流水狀態(tài)下沖洗4h。沖洗干凈后，將枝條剪成1cm左右?guī)?或2個腋芽的莖段，置于超凈工作臺中70%的酒精中浸30s，無菌水沖洗2次，再放入到0.1%HgCl2中消毒10min，無菌水沖洗3次，接入到培養(yǎng)基上。

1.3 培養(yǎng)基的制作

試驗(yàn)采用的培養(yǎng)基均為MS和1/2MS，附加不同種類和濃度的生長調(diào)節(jié)劑，蔗糖濃度為 30g/L，瓊脂濃度為 8g/L，pH5.4～5.7。

2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法

2.1 不同生長激素對腋芽增殖的影響

腋芽增殖培養(yǎng)以MS為基本培養(yǎng)基進(jìn)行腋芽增殖培養(yǎng)，附加激素包括細(xì)胞分裂素(6-BA)和生長激素(NAA)，激素配比見表1，每一編號處理20瓶，每瓶2個外植體，觀察其成活率及增殖情況。

表1 腋芽增殖培養(yǎng)基激素配比表

2.2 光照時(shí)長對腋芽增殖的影響

“哈瑞太茲”采用的培養(yǎng)基為MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂；“紅寶玉”采用的培養(yǎng)基為MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂。光照時(shí)長設(shè)為10、12、14、16h/d，每一處理20瓶，每瓶3個外植體。接種25d后調(diào)查成活及增殖情況，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

2.3 不同生長激素對組培苗生根的影響

生根培養(yǎng)以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，附加生根素NAA和IBA，激素配比見表2。每一編號處理20瓶，每瓶3個外植體，觀察其生根情況。

表2 生根培養(yǎng)基激素配比表

3 結(jié)果與分析

3.1 適宜腋芽增殖的生長激素篩選

接種25天后調(diào)查成活及增殖情況。結(jié)果見表3。

表3 生長激素對腋芽增殖的影響

“哈瑞太茲”和“紅寶玉”接種1周后，腋芽開始陸續(xù)萌發(fā)，25天的時(shí)候均有腋芽萌發(fā)且開始增殖。從表3中可以看出“哈瑞太茲”成活率以編號8最高，成活率達(dá)到87.8%；“紅寶玉”成活率以編號9最高，成活率達(dá)到86.7%，6-BA濃度升高有利于腋芽增殖，但使用濃度太高會導(dǎo)致生長發(fā)育不良。

3.2 適宜腋芽增殖的光照時(shí)長

接種25天后調(diào)查成活及增殖情況。結(jié)果見表4。

表4 光照時(shí)長對腋芽增殖的影響

由表4可見，光照時(shí)長對“哈瑞太茲”和“紅寶玉”成活率有顯著的影響。光照12、14h/d“哈瑞太茲”的成活率分別為95.6%和93.4%，“紅寶玉”的成活率為94%和97.5%，效果均表現(xiàn)良好，因此，“哈瑞太茲”和“紅寶玉”的光照時(shí)長應(yīng)選擇在12～14h。

3.3 適宜組培苗生根生長激素篩選

將增殖培養(yǎng)獲得的壯苗接入生根培養(yǎng)基中，接種25天后觀察生根情況。結(jié)果見表5

表5 生長激素對組培苗生根的影響

從表5中可以看出，“哈瑞太茲”和“紅寶玉”接種到4號生根培養(yǎng)基中生根率均最高，分別為85.7%和88.7%。

4 結(jié)論與討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對于促進(jìn)兩個樹莓品種腋芽萌發(fā)及生長，“哈瑞太茲”的最佳培養(yǎng)基為MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂；“紅寶玉”的最佳培養(yǎng)基為8：MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L IAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂，光照時(shí)長均為12～14h/d有利于芽的增殖。適宜“哈瑞太茲”和“紅寶玉”生根培養(yǎng)基為1/2MS+1mg/L IBA+2mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂。

在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，不同季節(jié)取材對外植體的污染率、發(fā)芽及褐化都有明顯的影響，其中春季4～5月取材的效果最好；生根培養(yǎng)受溫度的影響也較大，樹莓組培苗生根溫度應(yīng)控制在22～25℃為最佳；激素濃度過高，極易導(dǎo)致樹莓組培苗枯死，因此在實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制激素濃度。

[1]蔣桂華,吳延軍,謝鳴,等.樹莓、黑莓組織培養(yǎng)及遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J].果樹學(xué)報(bào),2006(4):593-598.

[2]樸日子,曹后男,陳艷秋,等.無刺紅樹莓組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)研究[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006(4):411-414.

[3]李維林,李海燕,王小敏,等.黑莓和樹莓組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].林業(yè)科技開發(fā),2009(3):9-14.

[4]王岳英.樹莓組織培養(yǎng)最佳外植體材料試驗(yàn)[J].山西林業(yè)科技,2009(2):12-13,30.

[5]解瑞彬,李秋菊,曹媛媛,等.樹莓的組織培養(yǎng)快繁研究[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(3):23-25.

[6]崔雪艷,王海新.樹莓組織培養(yǎng)技術(shù)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2009(12):42,45.

[7]王岳英.樹莓組織培養(yǎng)生根煉苗技術(shù)[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2010(6):121-122.

Establishment ofRubusspp. Tissue Culture Rapid Propagation System

Yu Fei

(Horticultural Sub-academy of Heilongjiang Academy of Agriculture Sciences, Harbin 150069)

This experiment with raspberry varieties “Heritage” and“Hongbaoyu”annual branches stem segment with axillary bud as explants，Study the illumination time、The influence of plant growth regulator on axillary bud germination；The best medium somaclone take root，To establish a raspberry tissue culture system of rapid propagation.The results show that：“Haritage” culture medium for MS + 2 mg/L 6-BA + 0.2 mg/LNAA 30 g/L + sugar + 8 g/L AGAR；“Hongbaoyu” medium for MS + 2 mg/L 6-BA + 0.3 mg/LNAA 30 g/L sugar + 8 g/L AGAR.The best illumination time 12 -14 hours/day；Somaclone best rooting medium are 1/2MS+1mg/LIBA+2mg/LNAA+30g/L sugar +8 g/L AGAR.

Tree blackberry; Culture medium; Take root; Rapid propagation

2016-11-28

于非(1986-)，女，碩士研究生，實(shí)習(xí)研究員，從事植物組織培養(yǎng)的研究,E-mail：37880420@qq.com。

S663.2

A

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2017.03.003