武 偉張岱權(quán)賀 葵洪 音王茂嬌黃雨佳吳顯和劉珉甬

腸通對(duì)小鼠急性毒性的影響※

武 偉1張岱權(quán)1賀 葵1洪 音2王茂嬌2黃雨佳2吳顯和3劉珉甬4

目的探討腸通對(duì)小鼠急性毒性的影響。方法將36只SPF級(jí)小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（n=12）和實(shí)驗(yàn)組（n=24），雌雄各半。對(duì)照組：采用0.9%氯化鈉注射液灌胃，0.8 ml/只，1次/d，連續(xù)觀察14 d；實(shí)驗(yàn)組：0.9%氯化鈉注射液0.8 ml/只+腸通0.4 g灌胃，1次/d，連續(xù)觀察14 d。比較兩組小鼠一般情況及主要臟器外形、體積、顏色與病理檢查結(jié)果。結(jié)果對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組小鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)度、大便均正常，體重、進(jìn)食量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P＞0.05）；對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組小鼠各臟器均無(wú)變性、充血、水腫、壞死等異?，F(xiàn)象；部分實(shí)驗(yàn)組小鼠肝細(xì)胞輕度水腫，雙核細(xì)胞增多，遠(yuǎn)端結(jié)腸淋巴細(xì)胞增多，但肝、腎、結(jié)腸病理檢查結(jié)果異常率與對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 P＞0.05）。結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)條件下，腸通無(wú)明顯急性毒性，安全性較高。

腸通；小鼠；急性毒性

便秘主要表現(xiàn)為排便頻率減少，排便費(fèi)力，糞便量減少或干結(jié)，是常見的消化系統(tǒng)疾病，發(fā)病率約為10%～15%，且呈逐年上升趨勢(shì)[1]。其不僅可嚴(yán)重影響患者生命質(zhì)量[2]，還可引發(fā)多種并發(fā)癥，甚至導(dǎo)致心血管性猝死[3]，因此及時(shí)、有效防治便秘具有重要意義。目前，治療便秘的西藥包括瀉劑、促動(dòng)力藥、鈣通道阻滯劑等，雖然療效較確切，但易出現(xiàn)不同程度不良反應(yīng)，如胃腸脹氣、腹痛、腹瀉、頭暈等，長(zhǎng)期使用還易產(chǎn)生依賴性，誘發(fā)瀉劑依賴性便秘[3]，各因素之間互相影響，導(dǎo)致便秘反復(fù)發(fā)作，

遷延難愈。目前國(guó)家衛(wèi)生部大力推行特膳食品防治慢性疾病，臨床急需安全有效、服用方便、價(jià)格低廉的食品防治便秘。腸通是依據(jù)中醫(yī)“食藥同源”特性，結(jié)合現(xiàn)代腸道微生態(tài)研究進(jìn)展，根據(jù)便秘特點(diǎn)自主研制的食品。前期已對(duì)組方配伍及制劑工藝進(jìn)行了相關(guān)研究，小樣本人群實(shí)驗(yàn)取得良好效果，現(xiàn)開展腸通對(duì)小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)其安全性，為其應(yīng)用于臨床提供客觀科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 SPF級(jí)健康昆明小鼠36只 [由西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（川）2013-17]，隨機(jī)分為對(duì)照組（n=12）和實(shí)驗(yàn)組（n=24），雌雄各半，體重18～22 g，自由飲食，飼料為依科達(dá)普通繁殖生產(chǎn)料[成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，批號(hào)：蘇飼審（2009）05032]。實(shí)驗(yàn)環(huán)境：西南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，濕度：40%～70%，溫度：20～25 ℃。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑 0.9%氯化鈉注射液（四川美大康佳樂(lè)藥業(yè)有限公司，批號(hào)：15032142），腸通（西南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理器械研發(fā)實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)），10%甲醛溶液（上海榕柏生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：060701），3%戊巴比妥鈉（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)：F20050405）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)器材 動(dòng)物電子稱（上?；ǔ彪娖饔邢薰?，型號(hào)：ES-06B），分析天平（上海卓精電子科技有限公司，型號(hào)：BSM/BS），1 ml、5 ml注射器（成都市新津事豐醫(yī)療器械有限公司，批號(hào)：160116），灌胃針（贊德儀器有限公司，型號(hào)：FNC-12-4），手術(shù)器械（深圳市瑞沃德生命科技有限公司，型號(hào)：SP1006-M），眼科鑷（深圳市瑞沃德生命科技有限公司，型號(hào)：F14004-08），刀片（杭州華威醫(yī)療用品有限公司，批號(hào)：20100227），濾紙（杭州沃華濾紙有限公司，批號(hào)：GB/T1914-2007）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，禁食不禁水12 h，分組進(jìn)行干預(yù)。對(duì)照組采用0.9%氯化鈉注射液灌胃，0.8 ml/只，1次/d，連續(xù)觀察14 d；實(shí)驗(yàn)組采用0.9%氯化鈉注射液0.8 ml/只+腸通0.4 g（腸通最大給藥量為0.4 g,相當(dāng)于臨床劑量400倍）灌胃，1次/d，連續(xù)觀察14 d。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 一般情況 每天觀察并記錄小鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)度、體重、進(jìn)食量、大便（性狀、顏色）。

1.3.2 大體解剖觀察 實(shí)驗(yàn)第15天用3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，頸椎脫臼處死小鼠并解剖，觀察其心、肝、肺、腎、脾、胃、結(jié)腸外形、體積、顏色。1.3.3 顯微鏡下觀察 在實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組分別隨機(jī)選取50%小鼠切取肝臟、雙側(cè)腎臟、遠(yuǎn)端結(jié)腸8～10 mm，用10%甲醛溶液固定24 h后包埋、切片、蘇木精-伊紅染色法（HE染色）。觀察：①肝組織、細(xì)胞結(jié)構(gòu)是否完整，分界是否清楚，有無(wú)異常改變；②腎組織有無(wú)出血、腎小管結(jié)構(gòu)有無(wú)異常改變、有無(wú)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、皮質(zhì)與髓質(zhì)分界是否清楚；③遠(yuǎn)端結(jié)腸黏膜細(xì)胞有無(wú)異常改變。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用 t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況實(shí)驗(yàn)期間無(wú)小鼠病死，兩組小鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)度及大便性狀顏色均正常。

2.2 體重變化對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組小鼠體重均穩(wěn)定增長(zhǎng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠體重變化比較(g,±s)

表1 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠體重變化比較(g,±s)

組別 數(shù)量(只) 第1天 第5天 第9天 第13天對(duì)照組 12 18.5±0.9 19.5±0.9 22.1±1.0 26.3±1.2實(shí)驗(yàn)組 24 18.8±1.2 19.8±1.0 22.0±1.1 25.4±1.3 t值 0.78 0.63 0.28 1.97 P值 0.22 0.71 0.98 0.88

2.3 進(jìn)食量比較 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組小鼠進(jìn)食量呈同步變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠進(jìn)食量變化比較(g,±s)

表2 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠進(jìn)食量變化比較(g,±s)

組別 數(shù)量(只)第1天第5天第9天第13天對(duì)照組 12 3.8±0.3 3.48±0.1 2 3.92±0.1 8 3 .66±0.1 3實(shí)驗(yàn)組 24 3 .65±0.2 2 t值3.8±0.3 3.51±0.1 6 3.90±0.2 0 0.37 0.43 0.26 0.16 P值0.95 0.37 0.35 0.07

2.4 大體解剖肉眼觀察對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組小鼠心、肝、肺、腎、脾、胃、結(jié)腸外形、體積、顏色均無(wú)異常。

2.5 顯微鏡下觀察對(duì)照組小鼠肝臟、腎臟、遠(yuǎn)端結(jié)腸均正常，見圖1、圖3、圖5。實(shí)驗(yàn)組小鼠腎組織結(jié)構(gòu)正常，皮、髓質(zhì)分界清楚，無(wú)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，見圖2；部分肝細(xì)胞輕度水腫，雙核細(xì)胞增多，見圖4；部分遠(yuǎn)端結(jié)腸淋巴細(xì)胞增多，見圖6。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組小鼠肝、腎、結(jié)腸病理檢查結(jié)果異常率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表3。

圖2 實(shí)驗(yàn)組腎臟(HE,×200)

圖1 對(duì)照組腎臟(HE,×200)

圖3 對(duì)照組肝臟(HE,×200)

圖4 實(shí)驗(yàn)組肝臟 (HE,×200)

圖5 對(duì)照組遠(yuǎn)端結(jié)腸(HE,×200)

圖6 實(shí)驗(yàn)組遠(yuǎn)端結(jié)腸 (HE,×200)

表3 對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠病理檢查結(jié)果比較[只(%)]

3 討論

近年來(lái)，功能性食品治療便秘取得了顯著成效[4-5]，突顯了其獨(dú)有的特色與優(yōu)勢(shì)。腸通是自主研制食品，已申報(bào)國(guó)家發(fā)明專利，其主要成分為腸通1與腸通2單體。腸通1具有低聚木糖生理活性，前期預(yù)實(shí)驗(yàn)表明，能有效減少老年便秘發(fā)生。分析原因，可能是腸通 1分子具有多個(gè)親水基團(tuán)，可與水分子聚集成巨大分子，且黏度高，穩(wěn)定性好有關(guān)。在胃腸道中，腸通 1能吸水與水形成黏稠膠狀物，軟化食物殘?jiān)苯影l(fā)生通便作用[6]。腸通 1是由2～10個(gè)單糖分子通過(guò)糖苷鍵連接形成的低度聚合糖，其可有效促進(jìn)生物體內(nèi)以雙歧桿菌為代表的腸道有益菌群特異性增殖。多項(xiàng)研究證實(shí)低聚木糖可被多種雙歧桿菌所代謝，產(chǎn)生一系列腸保健功能[7-9]。腸通 2是中藥單體，促進(jìn)腸蠕動(dòng)作用顯著。兩者組合，是一種較好的潤(rùn)腸通便保健食品。

精神狀態(tài)、活動(dòng)度、體重、進(jìn)食量、飲水量、大便是綜合反映藥物毒性對(duì)機(jī)體代謝、健康狀況影響的基本指標(biāo)。本研究中對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)度均正常，體重穩(wěn)定增長(zhǎng)，進(jìn)食量呈同步變化，大便性狀正常。表明腸通最大給藥量0.4 g對(duì)小鼠生長(zhǎng)代謝無(wú)明顯影響。內(nèi)臟是機(jī)體發(fā)揮生理功能的場(chǎng)所，其組織結(jié)構(gòu)的改變將對(duì)機(jī)體正常生理功能造成影響。本研究病理檢查結(jié)果顯示，部分肝細(xì)胞輕度水腫，雙核細(xì)胞增多；部分遠(yuǎn)端結(jié)腸淋巴細(xì)胞增多。提示腸通0.4 g+0.9%氯化鈉注射液0.8 ml灌胃對(duì)部分小鼠肝臟、遠(yuǎn)端結(jié)腸產(chǎn)生了一定影響，發(fā)生機(jī)制有待進(jìn)一步研究，但對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組小鼠肝、腎、結(jié)腸病理檢查結(jié)果異常率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，腸通的安全劑量約為0.4 g，相當(dāng)于人臨床用量的400倍，灌胃對(duì)小鼠的生長(zhǎng)代謝無(wú)明顯影響，且在該劑量范圍內(nèi)對(duì)小鼠腎臟也無(wú)可見病變損傷，安全性較高。

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10.12010/j.issn.1673-5846.2017.05.009

1西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，四川瀘州 646000

2西南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理學(xué)院，四川瀘州 646000

3西南醫(yī)科大學(xué)護(hù)理醫(yī)療器械研發(fā)實(shí)驗(yàn)室，四川瀘州 646000

4瀘州岷宏科技有限公司，四川瀘州 646000

四川省科技廳支撐計(jì)劃（編號(hào)：2016FZ0059）

武偉，主管護(hù)師。研究方向：應(yīng)用技術(shù)和應(yīng)用基礎(chǔ)研究

劉珉甬，Email：1047986020@qq.com