查翹楚，張力凡，韓超，葉密，陳輝，黃仁錄*，張建設，何曉中，李麗華

（1.河北農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，河北保定071000；2.石家莊藁城區(qū)畜牧水產(chǎn)局，河北石家莊052160）

不同濃度枯草芽孢桿菌對蛋雞血液生化指標的影響

查翹楚1，張力凡1，韓超1，葉密1，陳輝1，黃仁錄1*，張建設2，何曉中2，李麗華2

（1.河北農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，河北保定071000；2.石家莊藁城區(qū)畜牧水產(chǎn)局，河北石家莊052160）

為研究不同濃度的枯草芽孢桿菌對蛋雞血液指標的影響，試驗選用體重相近的19周齡健康“大午金鳳”蛋雞240只，隨機分成4組，試驗Ⅰ組為對照組，飼喂基礎日糧；試驗Ⅱ組飼喂基礎日糧+0.1%的枯草芽孢桿菌；試驗Ⅲ組飼喂基礎日糧+0.5%枯草芽孢桿菌；第Ⅳ組飼喂基礎日糧+1%的枯草芽孢桿菌。預飼期7 d，試驗期28 d。結果表明：試驗中期和末期，甘油三酯各組之間差異不明顯（P＞0.05）；總蛋白第Ⅲ組顯著高于對照組（P＜0.05）；試驗中期，尿素氮和尿酸第Ⅲ組均顯著低于對照組（P＜0.05）；血氨第Ⅱ、Ⅲ組極顯著低于對照組（P＜0.01），第Ⅳ組顯著低于對照組（P＜0.05）；IgA試驗組極顯著高于對照組（P＜0.01）；IgM、IgG試驗Ⅲ、Ⅳ組極顯著高于對照組（P＜0.01）。試驗末期尿素氮第Ⅲ組均顯著低于對照組（P＜0.05）；尿酸各組之間差異不顯著（P＞0.05）；血氨第Ⅲ組極顯著低于對照組（P＜0.01），第Ⅳ組顯著低于對照組（P＜0.05）；IgA、IgM試驗Ⅲ、Ⅳ組極顯著高于對照組（P＜0.01）。IgG試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組極顯著高于對照組（P＜0.01）。由此表明，添加0.5%的枯草芽孢桿菌對血清指標的影響比較顯著。

枯草芽孢桿菌；血液生化指標；蛋雞

益生菌是指通過改善宿主腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡，促進宿主體內(nèi)有益菌的優(yōu)勢菌群建立，來達到促進動物健康，提高動物免疫力的一系列細菌的統(tǒng)稱。益生菌能夠刺激動物產(chǎn)生干擾素，提高腸道免疫球蛋白濃度，從而減輕腸道炎性反應，改善腸黏膜功能，穩(wěn)定腸道，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)機能（Erika等，2001）。枯草芽孢桿菌作為益生菌的一種，在一定程度上能夠刺激免疫器官重量的增加，提高動物機體內(nèi)抗體和免疫球蛋白水平，從而加強細胞和體液免疫機能；同時自身可以合成一部分酶類，如蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶等，彌補動物內(nèi)源性消化酶分泌的不足，促進對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收（張揚等，2003）。本試驗以19周齡“大午金鳳”蛋雞為研究對象，旨在研究不同濃度的枯草芽孢桿菌對蛋雞血液生化指標影響，為枯草芽孢桿菌作為飼料添加劑在蛋雞中的應用提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料枯草芽孢桿菌：來自河北農(nóng)業(yè)大學生命科技學院，枯草芽孢桿菌含量約為1.0× 107cfu/g。

1.2 試驗動物健康、體重相近的19周齡“大午金鳳”蛋雞。

1.3 試驗日糧日糧組成及營養(yǎng)水平（表1）參照NRC（1994）蛋雞營養(yǎng)需要。

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 試驗分組與設計采取單因子試驗設計，將240只健康、體重相近的19周齡“大午金鳳”蛋雞隨機分成4個組，每組4個重復，每個重復15只雞，試驗Ⅰ組為對照組，飼喂基礎日糧；試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組為試驗組，試驗Ⅱ組飼喂基礎日糧和0.1%的枯草芽孢桿菌；試驗Ⅲ組飼喂基礎日糧和0.5%的枯草芽孢桿菌；試驗Ⅳ組飼喂基礎日糧和1%的枯草芽孢桿菌。預飼期為1周，試驗期為4周。

1.5 飼養(yǎng)管理本試驗在環(huán)境控制艙中進行，兩層立體籠養(yǎng)，自由采食、自由飲水，溫度設定為20℃，濕度設定為60%，光照設定為16L∶8D。按照常規(guī)的防疫程序進行清掃和消毒，定期接種疫苗，試驗期間時時觀察雞群的健康狀況。

1.6 樣品的采集在試驗期的第2周和第4周，以重復為單位，每個重復隨機選取2只雞，翅下靜脈采血，用促凝管收集5 mL，在4～5℃下以3000 r/min離心10 min，吸取上清液，置于血清管內(nèi)，-20℃冷凍保存待測血清生化指標。血液生化指標主要包括甘油三酯（TG）、總膽固醇（TCHO）、總蛋白（TP）、尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、血氨（BA）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）。

1.7 測定方法甘油三酯（TG）：采用試劑盒GPO-PAP酶法，單位g/L；總膽固醇（T-CHO）：采用試劑盒COD-PAP法測定，單位g/L；總蛋白（TP）：采用試劑盒法雙縮脲法（Biuret法）測定，單位g/L；尿酸（UA）：采用試劑盒酶比色法測定，單位μmol/L；尿素氮（BUN）：采用試劑盒OPA法測定，單位μmol/L；血氨（BA）：采用無蛋白濾液法測定，單位μmol/L。試劑盒購自南京建成生物試劑有限公司，分析儀器采用Microlab 300半自動生化分析儀。IgA、IgM、IgG：采用酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測，試劑盒購自南京建成生物試劑有限公司，分析儀器采用酶標儀。

1.8 數(shù)據(jù)整理與分析首先利用Microsoft office excel 2007軟件進行初步的數(shù)據(jù)整理，然后采用IBM SPSS Statistics 21.0軟件對各個因素進行單因素方差分析，再用LSD進行多重的比較分析。結果以“平均值±標準差”來表示，以P＜0.05來表示差異顯著，以P＜0.01表示差異極顯著。

2 結果與分析

由表2可知，試驗第2周時，甘油三酯各組之間差異不明顯（P＞0.05），但試驗組均低于對照組；第Ⅲ組總膽固醇較對照組降低34.86%（P＜0.05）；第Ⅲ組總蛋白較對照組提高42.06%（P＜0.05）；試驗第4周時，甘油三酯和膽固醇各組之間差異不明顯（P＞0.05），但試驗組均低于對照組；第Ⅲ組總蛋白較對照組提高19.05%（P＜0.05）。

表2 枯草芽孢桿菌制劑對蛋雞甘油三酯、總膽固醇、總蛋白的影響g/L

由表3可知，試驗第2周時，第Ⅲ組尿素氮和尿酸較對照組分別降低35.53%和24.91%（P＜0.05），第Ⅱ、Ⅳ組相對于對照組有降低趨勢；第Ⅱ、Ⅲ組血氨較對照組分別降低43.11%，52.64%（P＜0.01），第Ⅳ組較對照組降低30.12%（P＜0.05），試驗第4周時，第Ⅲ組尿素氮較對照組降低47.42%（P＜0.05），第Ⅱ、Ⅳ組相對于對照組有降低趨勢；尿酸各組之間差異不顯著（P＞0.05）；第Ⅲ組血氨較對照組降低35.81%（P＜0.01），第Ⅳ組較對照組降低25.82%（P＜0.05）。

表3 枯草芽孢桿菌制劑對蛋雞尿素氮、尿酸、血氨指標的影響μmol/L

由表4可知，試驗第2周時，試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組IgA分別較對照組提高58.45%、55.98%、41.93%（P＜0.01）；試驗Ⅲ、Ⅳ組IgM分別較對照組提高22.14%，13.89%（P＜0.01）；試驗Ⅲ、Ⅳ組IgG分別較對照組提高57.89%、40.26%（P＜0.01）；試驗第4周時，試驗Ⅲ、Ⅳ組IgA分別較對照組提高65.19%、28.03%（P＜0.01）；試驗Ⅲ、Ⅳ組IgM分別較對照組提高34.72%、16.61%（P＜0.05）試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組IgG分別較對照組提高69.37%，67.29%、51.91%（P＜0.01）。

3 分析與討論

3.1 不同濃度枯草芽孢桿菌對血清中甘油三酯、膽固醇、總蛋白的影響血清蛋白指標是機體蛋白質(zhì)合成代謝的一個重要標志，其中血清總蛋白濃度高是蛋白質(zhì)代謝旺盛的表現(xiàn)，有利于促進生長和提高飼料轉(zhuǎn)化率。楚青惠（2014）在保育仔豬日糧中添加乳酸菌研究結果表明，血清總蛋白和甘油三酯與對照組相比均無顯著差異。吳俊峰等（2012）研究表明，在蛋雞飼料中添加枯草芽孢桿菌使血清中總蛋白含量呈增加趨勢。本試驗研究表明，試驗中期和末期，試驗組中總蛋白質(zhì)含量均高于對照組，與前人的研究結果相一致，說明添加枯草芽孢桿菌能夠增強蛋白質(zhì)的代謝水平。血清總膽固醇含量受參與膽固醇合成的關鍵酶-羥甲基戊二酸單酰輔酶A活性的影響，F(xiàn)ukushima（1995）報道，益生菌可以抑制膽固醇合成過程中的關鍵酶。李福彬（2010）研究結果表明，飼料中添加地衣芽孢桿菌能夠降低血清膽固醇含量，這與本試驗研究結果相一致。由此可以表明枯草芽孢桿菌也可能通過抑制羥甲基戊二酸單酰輔酶A活性來降低血清膽固醇。

表4 枯草芽孢桿菌制劑對蛋雞IgA、IgM、IgG的影響μmol/L

3.2 不同濃度枯草芽孢桿菌對血清中含氮物濃度的影響蛋白質(zhì)進入動物體內(nèi)在多種酶的作用下生成氨基酸，氨基酸再經(jīng)分解代謝最終生成氨和其他物質(zhì)。氨是動物體內(nèi)的有毒物質(zhì)，體內(nèi)的氨大部分通過合成尿素排出體外，一部分合成其他含氮物質(zhì)（包括非必需氨基酸、谷氨酰胺等），少量的氨可直接經(jīng)尿排出，禽類則主要是生成尿酸。尿酸是禽類蛋白質(zhì)分解代謝的主要終產(chǎn)物，尿酸反映了機體蛋白質(zhì)代謝的差異，蛋白質(zhì)分解代謝減弱時尿酸含量下降。本試驗研究表明，試驗中期0.1%、0.5%、1%添加組尿素氮分別降低0.2、1.35、0.52 mmol/L；尿酸分別降低9.56、19.59、15.92μmol/L，血氨分別降低54.28、66.27、37.92μmol/L；試驗末期0.1%、0.5%、1%添加組尿素氮分別降低1.73、2.48、2.25 mmol/L；血氨分別降低32.73、50.69、36.55μmol/L；步長英（2008）研究結果表明，飼糧中添加不同濃度的芽孢桿菌使血清中尿酸含量顯著提高。楊海英等（2007）試驗證明，益生素可使仔豬血清尿素氮含量降低，促進蛋白質(zhì)沉積；與本試驗研究結果一致，說明蛋雞體內(nèi)內(nèi)源蛋白分解減弱，日糧氮素利用率得到有效提高。

3.3 不同濃度枯草芽孢桿菌對IgA、IgM、IgG的影響枯草芽孢桿菌能夠刺激畜禽免疫器官的發(fā)育，刺激T、B淋巴細胞，提高免疫球蛋白和抗體水平，增強畜禽的細胞免疫和體液免疫功能，提高畜禽機體健康水平（王宗偉等，2015）。馮敏山等（2009）在產(chǎn)蛋雞飼糧中添加微生態(tài)制劑后，發(fā)現(xiàn)血清中IgA、IgM、IgG含量均有所提高，祝天龍等（2015）在仔豬飼料中添加枯草芽孢桿菌制劑后發(fā)現(xiàn)，各試驗組IgA、IgM、IgG相對于對照組，均有不同程度的提高?？莶菅挎邨U菌可顯著提高IgA、IgG含量，對IgM有提高的趨勢。本試驗研究表明，蛋雞飼糧中添加0.1%、0.5%、1%枯草芽孢桿菌能夠使IgA、IgM、IgG含量增加，由此表明枯草芽孢桿菌能夠提供蛋雞免疫力。

4 結論

本試驗結果表明，蛋雞飼糧中添加0.5%的枯草芽孢桿菌能夠使總蛋白含量增加；膽固醇、尿素氮、尿酸、血氨含量降低；免疫球蛋白含量升高，從而改善了蛋雞的免疫水平。

[1]步長英.絲蘭皂甙_芽孢桿菌對肉雞生產(chǎn)性能_氮代謝和排泄物氨氣散發(fā)量的影響：[碩士學位論文][D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學，2008.

[2]程發(fā)祥，賈帥兵，張浩，等.暖季放牧條件下羔羊15種血清生化指標與體重變化關系的研究[J].中國畜牧獸醫(yī)，2009，36（7）：56～59.

[3]楚青惠.不同劑量乳酸菌對母豬和仔豬生產(chǎn)性能、血清生化指標以及糞便微生物的影響：[碩士論文][D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學，2014.

[4]李福彬.地衣芽孢桿菌的理化特性及對蛋雞生產(chǎn)性能影響機理的研究：[碩士學位論文][D].保定：河北農(nóng)業(yè)大學，2010.

[5]王宗偉，李法增，楊志平，等.枯草芽孢桿菌在畜禽營養(yǎng)上的研究進展[J].中國畜牧雜志，2015，51（1）：80～83.

[6]吳俊鋒，詹凱，曹君平，等.枯草芽孢桿菌及其發(fā)酵豆粕對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)及血清生化指標的影響[J].中國家禽，2012，34（1）：22～26.

[7]楊海英.益生素和低聚木糖對斷奶仔豬生產(chǎn)性能及促生長機理的研究：[碩士學位論文][D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學，2007.

[8]張揚，袁杰利.腸道益生菌對機體免疫功能的影響[J].中國微生態(tài)學雜志，2003，15（4）：246～248.

[9]祝天龍，李奎，邵強，等.枯草芽孢桿菌制劑對仔豬生長及免疫的影響[J].飼料研究，2015，3：26～31.

[10]Erika Isolauri，Yelda Sütas，Pasi Kankaanp覿覿，et al.Probiotics：effectson immunity[J].American Society for Clinical Nutrition，2001，73（2）：444～450.

[11]Fukushima M，Nakano M.The effect of a probiotic on faecal and liver lipid classes in rats[J].British Journalof Nutrition，1995，73：701～710.

In order to study the effects of different concentrations of Bacillus subtilis on blood biochemical index of laying hens，a total of two hundred and fouty healthy laying hens of Dawu Jinfeng with similar weight were selected and random ly divided into four groups with four replicates per group and fifteen hens per replicate.Layering hens in control group were fed basic diet.The other three trail groupswere fed diet supplemented with 0.1%，0.5%，1%of Bacillus subtilis respectively for a fourweeks.The results showed that in themiddle and the end of the test，triglycerides of each testgroups showed no significant differences；The total protein of groupⅢwas significantly higher than the control group（P＜0.05）；In themiddle of the test，urea nitrogen and uric acid of groupⅢwere significantly lower than control group（P＜0.05）；Blood ammonia of groupⅡand groupⅢwas very significantly lower than control group（P＜0.01），the groupⅣwas significantly lower than the control group（P＜0.05）；IgA of treatment groupswas significantly higher than the control group（P＜0.01）；IgM and IgG of groupⅢand groupⅣwere significantly higher than the control group（P＜0.01）；In the end of the test，urea nitrogen of groupⅢwas significantly lower than control group（P＜0.05）；uric acid of each test groups showed no significant differences（P＞0.05）；Blood ammonia of groupⅢwas very significantly lower than control group（P＜0.01），the groupⅣwas significantly lower than the control group（P＜0.05）；IgA，IgM of groupⅢ，Ⅳwere very significantly higher than the control group（P＜0.01）.IgG of treatment group was significantly higher than the control group（P＜0.01）.It’s concluded that the optimal supplementation of Bacillus subtilis was 0.05%.

Bacillus subtilis；blood biochemical index；laying hens

S816.7

A

1004-3314（2017）06-0015-04

DO I：10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170604

國家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術體系建設專項獎金（CARS-41-K18）

*通訊作者