鄢海波，趙令，馬寧，姜振宇

（吉林大學(xué)第一醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，吉林 長春 130021）

漢族人系統(tǒng)性紅斑狼瘡和狼瘡腎炎與IL-22受體基因多態(tài)性的關(guān)系*

鄢海波，趙令，馬寧，姜振宇

（吉林大學(xué)第一醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，吉林 長春 130021）

目的 對漢族人群系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者白細胞介素22（IL-22）受體基因多態(tài)性進行研究，探討其與系統(tǒng)性紅斑狼瘡和狼瘡腎炎的關(guān)系。方法選取2012年1月-2016年6月吉林大學(xué)第一醫(yī)院系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者360例和健康者360例作為研究對象，將其分為A組（系統(tǒng)性紅斑狼瘡組）和B組（對照組）；系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者分為C組（狼瘡腎炎組）和D組（無狼瘡腎炎組）。觀察IL-22R1基因rs3795299位點基因型和等位基因頻率與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、狼瘡腎炎及系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床特點的關(guān)系。結(jié)果A組與B組IL-22R1基因rs3795299位點基因型和等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。C組患者GG基因型所占比例高于D組患者（P<0.05），CG和CC基因型所占比例低于D組患者（P<0.05）；C組患者等位基因G頻率低于D組（P<0.05），等位基因C頻率高于D組（P<0.05）。IL-22R1基因rs3795299位點等位基因頻率在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者有關(guān)節(jié)炎、面部紅斑、光敏感和口腔潰瘍患者中的分布與無關(guān)節(jié)炎、面部紅斑、光敏感和口腔潰瘍患者中的分布不同，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論在中國漢族人群中，IL-22R1基因rs3795299位點基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的易感性無關(guān)，與狼瘡腎炎的易感性有關(guān)，與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床特點相關(guān)。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；IL-22受體；基因多態(tài)性；狼瘡腎炎

系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床特征復(fù)雜多樣，病情遷延反復(fù)，死亡率較高，對患者的身心健康和生活質(zhì)量帶來嚴重威脅。一部分系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者有腎臟損害表現(xiàn)，稱為狼瘡腎炎。狼瘡腎炎預(yù)后差，系統(tǒng)性損害比較嚴重。系統(tǒng)性紅斑狼瘡多發(fā)生于女性，可能與女性患者雌激素的分泌引起免疫系統(tǒng)異常，產(chǎn)生特征性抗體有關(guān)。系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病機制不太清楚，許多研究發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病可能與細胞因子的異常分泌，引起機體免疫功能異常，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致臟器損傷有關(guān)[1]，白細胞介素22（Interleukin-22，IL-22）是與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的細胞因子，IL-22在多種自身免疫性疾病的發(fā)病中發(fā)揮重要作用[2-3]，IL-22受體決定細胞組織對IL-22的反應(yīng)性情況[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，IL-22受體基因多態(tài)性與多發(fā)性硬化癥的發(fā)病關(guān)系密切[5-6]，與兒童免疫球蛋白A（immunoglobulin A，IgA）腎病的發(fā)生也有相關(guān)性[7]。系統(tǒng)性紅斑狼瘡作為自身免疫性疾病的一種，其易感性是否與IL-22受體的基因多態(tài)性有關(guān)？本研究對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者IL-22受體基因多態(tài)性進行研究，探討其與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2012年1月-2016年6月吉林大學(xué)第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者360例和體檢中心健康者360例作為研究對象，將其分為A組（系統(tǒng)性紅斑狼瘡組）和B組（對照組）；系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者根據(jù)是否合并有狼瘡腎炎分為C組（狼瘡腎炎組）和D組（無狼瘡腎炎組）。系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者男性39例，女性321例，年齡（38.3±5.4）歲；對照組男性41例，女性319例，年齡（39.1±6.7）歲，兩組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。所有研究對象之間沒有血緣關(guān)系，均來自中國東北地區(qū)漢族人群。排除標準：感染性疾病者，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等其他自身免疫性疾病者，嚴重心肝腎等重要臟器功能不全者，拒絕參加實驗者。

1.2 研究方法

采集所有患者外周靜脈血4ml，置于抗凝血管中，置入-80℃冰箱冷凍保存。IL-22R1基因rs3795299位點基因型測定：從冰箱中取出血液標本，采用氯仿法提取血液標本基因組DNA，測定DNA濃度，將DNA濃度合格的DNA樣本用于基因型分析。根據(jù)IL-22R1基因rs3795299位點兩側(cè)序列設(shè)計引物（蘇州天昊有限公司），在聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀（ABI-9700，天津金思德生物科技有限公司）中進行PCR擴增反應(yīng)，PCR總反應(yīng)體系為25μl，反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s、57℃退火30 s，72℃延伸30 s，共44個循環(huán)，72℃繼續(xù)延伸10 min。將PCR擴增產(chǎn)物加入上樣液中電泳，拍照觀察測序結(jié)果。

1.3 主要觀察指標

觀察IL-22R1基因rs3795299位點基因型和等位基因頻率與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、狼瘡腎炎及系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床特點的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件，基因型分布頻率用Hardy-Weinberg檢測，計數(shù)資料用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-22R1基因rs3795299位點基因分型

IL-22R1基因rs3795299位點有3個基因型：GG、CG及CC基因型。見圖1、2。

2.2 IL-22R1基因rs3795299位點基因型和等位基因頻率與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)系

A組IL-22R1基因rs3795299位點基因型頻率為GG基因型10.3%（37/360）、CG基因型 41.9%（151/360）、CC基因型47.8%（172/360）；等位基因頻率為 G等位基因 31.1%（224/720），C等位基因68.9%（496/720）。B組IL-22R1基因rs3795299位點基因型頻率為GG基因型10.0%（36/360），CG基因型42.2%（152/360），CC基因型47.8%（172/360）；等位基因頻率為G等位基因31.3%（225/720），C等位基因68.7%（495/720），經(jīng)χ2檢驗，兩組基因型和等位基因比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.017和0.000，P=0.992和0.969）。見表1。

圖1 IL-22R1基因rs3795299位點基因測序圖

圖2 rs3795299位點部分電泳圖

2.3 IL-22R1基因rs3795299位點基因型和等位基因頻率與狼瘡腎炎的關(guān)系

C組患者GG基因型、CG基因型和CC基因型所占比例分別為22.5%（23/102）、37.3%（38/102）和40.2%（41/102），D組患者GG基因型、CG基因型和CC基因型所占比例分別5.0%（13/258）、44.6%（115/ 258）和50.4%（130/258），經(jīng)χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=24.933，P=0.000），C組患者GG基因型所占比例高于D組患者GG基因型所占比例，C組患者CG和CC基因型所占比例低于D組患者CG和CC基因型所占比例。C組患者等位基因G頻率和C頻率分別為41.2%（84/204）和58.8%（120/204），D組患者等位基因G頻率和等位基因G頻率為58.5%（302/516）和41.5%（214/516），經(jīng)χ2檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=26.314，P=0.000），C組患者等位基因G頻率低于D組，等位基因C頻率高于D組（P< 0.05）。結(jié)果表明IL-22R1基因rs3795299位點基因型和等位基因頻率與系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎炎的易感性相關(guān)。見表2。

表1 IL-22R1基因rs3795299位點基因型和等位基因頻率與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)系 [n=360，例（%）]

表2 IL-22R1基因rs3795299位點基因型和等位基因頻率與狼瘡腎炎的關(guān)系 例（%）

2.4 IL-22R1基因rs3795299位點等位基因頻率與系統(tǒng)性紅斑狼瘡癥狀的關(guān)系

IL-22R1基因rs3795299位點等位基因頻率在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者有關(guān)節(jié)炎、面部紅斑、光敏感和口腔潰瘍患者中的分布與無關(guān)節(jié)炎、面部紅斑、光敏感和口腔潰瘍患者中的分布比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明IL-22R1基因rs3795299位點等位基因頻率分布與系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的關(guān)節(jié)炎、面部紅斑、光敏感和口腔潰瘍等癥狀有關(guān)。見表3。

表3 系統(tǒng)性紅斑狼瘡癥狀與IL-22R1基因rs3795299位點等位基因頻率的關(guān)系

續(xù)表3

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病與環(huán)境、遺傳及內(nèi)分泌等多種因素有關(guān)，各種因素相互作用，引起釋放炎癥因子，產(chǎn)生自身抗體，引起免疫應(yīng)答的異常[8-9]，導(dǎo)致系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生、發(fā)展。系統(tǒng)性紅斑狼瘡具有家族聚集性的特點，在有系統(tǒng)性紅斑狼瘡的家族中，系統(tǒng)性紅斑狼瘡的患病率較沒有系統(tǒng)性紅斑狼瘡的家族中高，表明遺傳因素在系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病中發(fā)揮一定作用。系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病與多種細胞因子的異常有關(guān)，IL-22、腫瘤壞死因子α等多種細胞因子的異常，引起機體免疫功能紊亂，發(fā)生炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致組織器官的損傷[10]。IL-22由Th22細胞核Th17細胞產(chǎn)生，Th22細胞產(chǎn)生的IL-22在自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用，IL-22是白細胞介素10家族成員之一，是Th17和Th22細胞的重要效應(yīng)分子，IL-22的表達與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病等自身免疫性疾病的發(fā)病關(guān)系密切[11]，自身免疫性疾病患者IL-22的表達增加，IL-22還可以誘導(dǎo)多種信號通路的活化，對自身免疫性疾病發(fā)病的多個環(huán)節(jié)造成影響[12]。

IL-22通過其受體信號通路的激活發(fā)揮細胞因子功能。IL-22受體IL-22R1的表達對組織細胞對IL-22的反應(yīng)起決定性作用[13]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-22受體與多種自身免疫性疾病相關(guān)，在自身免疫性疾病的發(fā)病中發(fā)揮一定作用[14]。隨著對IL-22受體研究的深入，有學(xué)者對IL-22受體的基因多態(tài)性進行研究[15]，發(fā)現(xiàn)IL-22受體基因多態(tài)性與多發(fā)性硬化癥[5-6]、IgA腎病等[7]的發(fā)生關(guān)系密切。系統(tǒng)性紅斑狼瘡作為一種自身免疫性疾病是否與IL-22受體的基因多態(tài)性有關(guān)？本研究對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者IL-22受體基因多態(tài)性進行研究，探討其與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者與健康對照者IL-22R1基因rs3795299位點基因型和等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，狼瘡腎炎患者GG基因型所占比例高于無狼瘡腎炎患者，狼瘡腎炎患者等位基因G頻率低于無狼瘡腎炎患者。IL-22R1基因rs3795299位點等位基因頻率在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者有關(guān)節(jié)炎、面部紅斑、光敏感和口腔潰瘍患者中的分布與無關(guān)節(jié)炎、面部紅斑、光敏感和口腔潰瘍患者中的分布不同，本研究結(jié)果表明，在中國漢族人群中，IL-22R1基因rs3795299位點基因多態(tài)性與狼瘡腎炎的易感性有關(guān)，與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的易感性無關(guān)，與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床特點相關(guān)。SUH等[7]對韓國194例IgA腎病患者及287例健康者進行研究，該研究性別相匹配，年齡之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（年齡相匹配對照選擇比較困難），研究結(jié)果表明，IL-22受體的基因多態(tài)性和IgA腎病關(guān)系密切。王紅蕾等[16]對中國北方漢族人群IL-22R1基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病相關(guān)性進行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-22RA1外顯子基因多態(tài)性可能與系統(tǒng)性紅斑狼瘡易感性無關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IL-22R1基因rs3795299位點基因多態(tài)性與狼瘡腎炎的發(fā)病關(guān)系密切，與SUH等[7]的研究結(jié)果一致。本研究同時發(fā)現(xiàn)，IL-22R1基因rs3795299位點基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的部分臨床癥狀關(guān)系密切，但并沒有發(fā)現(xiàn)IL-22R1基因rs3795299位點基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病有相關(guān)性，與王紅蕾等[16]研究結(jié)果一致。考慮本研究納入患者數(shù)量較少及基因多態(tài)性存在地區(qū)種族差異等，對結(jié)果會產(chǎn)生一定影響，因此本研究并不能明確IL-22R1基因rs3795299位點基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病有無關(guān)系，需要進行大樣本、多地區(qū)、多種族的進一步研究，明確兩者的相關(guān)性。

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（童穎丹 編輯）

Relationships of systemic lupus erythematosus and lupus nephritis in Han population with IL-22 receptor gene polymorphisms*

Hai-bo Yan,Ling Zhao,Ning Ma,Zhen-yu Jiang
(Department of Rheumatology,the First Hospital of Jilin University, Changchun,Jilin 130021,China)

ObjectiveTo study the interleukin-22 (IL-22)receptor gene polymorphisms in Han patients with systemic lupus erythematosus (SLE),and to examine its relationships with SLE and lupus nephritis.MethodsA total of 360 patients with SLE(group A)and 360 health people(control group)in the First Hospital of Jilin University from January 2012 to June 2016 were selected as research subjects.The group A was further divided into group C(lupus nephritis group)and group D(without lupus nephritis group).The correlations of rs3795299 genotypes and allele frequency ofIL-22R1gene with SLE,lupus nephritis and clinical characteristics of SLE were observed.ResultsThe differences in the rs3795299 genotypes and allele frequency ofIL-22R1gene were not statistically significant between the group A and the group B (P>0.05).The proportion of GG genotype in the group C was higher than that in the group D (P<0.05),while the proportions of CG and CC genotypes in the group C were lower than those in the group D (P<0.05).The frequency of allele G in the group C was lower than that in the group D (P<0.05),but the frequency of allele C in the group C was higher than that in the group D (P<0.05).The distribution of allele frequency of rs3795299locus inIL-22R1gene was significantly different between the SLE patients with arthritis,facial redness,light sensitivity or oral ulcers and the SLE patients without arthritis,facial redness,light sensitivity or oral ulcers (P<0.05).ConclusionsIn Chinese Han population,IL-22R1gene rs3795299 gene polymorphism is not in significant correlation with the susceptibility of SLE,but is related to lupus nephritis and clinical features of SLE.

systemic lupus erythematosus;IL-22 receptor;gene polymorphism;lupus nephritis

R593.241

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.09.009

1005-8982（2017）09-0044-05

2016-05-17

國家自然科學(xué)基金（No：3A515BF53428）

姜振宇，E-mail：jlujzy@aliyun.com；Tel：15843079623