楊忠臣 袁 軼 姜麗麗 張 舒

（齊齊哈爾市第二○三醫(yī)院，黑龍江 齊齊哈爾 161000）

HBV-DNA及HBeAg陰性乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）檢測的臨床價值

楊忠臣 袁 軼 姜麗麗 張 舒

（齊齊哈爾市第二○三醫(yī)院，黑龍江 齊齊哈爾 161000）

目的 對慢性乙型肝炎患者血清檢測乙型肝炎病毒的脫氧核糖核酸（HBV-DNA）及乙型肝炎病毒E抗原（HBeAg），結果陰性的標本進一步檢測乙型肝炎病毒大蛋白（HVB-LP），用以判斷乙型肝炎病毒是否復制的臨床價值。方法 以302例慢性乙型肝炎患者為研究對象，50例健康體檢者做為對照組，采取酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血HBV-LP和乙型肝炎病毒標志物（HBV-M），熒光定量PCR檢測HBV-DNA。進行HBV-DNA、HBV-LP和HBeAg的陽性率差異性比較，比對HBV-DNA及HBeAg陰性患者檢測血清HBV-LP的陽性率。結果 HBV-LP陽性率為78.8%，較HBV-DNA、HBeAg均敏感。HBV-LP檢出率為78.8%高于HBV-DNA（70.8%）（χ2=0.4674，P＞0.05），二者無顯著性差異， HBV-LP和HBeAg檢出率（40.7%）比較（χ2=91.058，P＜0.01）二者差別有非常顯著意義；HBV-LP的HBeAg陰性患者陽性率為69.3%，對比HBV-DNA陰性患者HBV-LP陽性檢出率（11.27%）（χ2=62.43，P＜0.01）顯著高；有18例慢性乙型肝炎患者血清檢測HBV-DNA和HBeAg皆是是陰性的標本中，檢出4例HBV-LP陽性。結論 血清HBV-LP檢測是對HBV-DNA及HBeAg檢測的補充，HBV-LP是鑒別慢性乙型肝炎患者體內病毒是否復制的敏感指標，對提高監(jiān)測慢性乙型肝炎患者體內的病毒復制、觀察療效及判斷預后提供了進一步的保障。

乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）；乙型肝炎病毒DNA；乙型肝炎病毒標志物（HBV-M）

中國是乙型肝炎病毒（HBV）感染性疾病的重災區(qū)，約有1.2億人感染乙型肝炎病毒，約為1/3的全球感染者，其中乙型肝炎E抗原（HBeAg）陰性慢性肝炎平均占52%，約20%的慢性HBV感染患者中死于HBV感染相關的肝病[1]。治療慢性乙型肝炎患者臨床常用HBVDNA＜103拷貝/mL為陰性或HBeAg轉陰（產生E抗體）來判斷患者的HBV停止復制，而臨床檢測證實部分HBeAg陰性的患者體內病毒仍然大量復制，并且HBV-DNA轉陰時也不能徹底排除HBV的復制[2-3]。乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）是乙型肝炎病毒（HBV）上重要的傳染性顆粒（Dane顆粒）和亞病毒顆粒管的包膜蛋白，它是乙型肝炎病毒形式完整外膜的一個重要指標，由HBsAg和前S蛋白（PreSl蛋白和PreS2蛋白）組成，HBV-LP的前S蛋白具有復雜跨膜構象拓撲結構，其對乙型肝炎病毒復制過程起激活作用，并參與在細胞中的病毒顆粒的調節(jié)釋放，與病毒復制密切相關[4-6]。本實驗通過對302例慢性乙型肝炎患者血清進行HBV-LP、HBV-DNA和HBV-M定量的檢測，探討HBV-LP的檢測在慢性乙型肝炎HBV-DNA和HBeAg陰性患者中的臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象：選取2015年健康體檢者50例為對照組，排除病毒肝炎感染者，其中，男性28例，女22例，年齡分布在19～67歲。另外，選取2015年1月至2016年4月感染科住院及肝病專家門診就診慢性乙型肝炎患者302例為實驗組，排除其他型肝炎病毒感染，以及非病毒引起的肝臟疾病等。其中，男性233例，女性69例；年齡7～76歲。診斷標準依照《慢性乙型肝炎防治指南（2014年版）》，由中華醫(yī)學會的肝病學分會和感染病學分會聯(lián)合制訂。

1.2 試劑與儀器：①乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-LP）酶免定量檢測試劑由北京熱景鹽物技術有限公司生產（結果判斷標準：CUTOFF=陰性對照OD均值Nc×2.1，陽性對照OD值≥1.0，陰性對照OD值＜0.1，樣品OD值≥CUTPFF判為陽性）；②HBV-DNA采用熒光定量聚合酶鏈反應測定試劑盒（深圳市匹基生物工程股份有限公司），結果判斷標準以HBV-DNA拷貝數＞103 copy/mL判斷為HBV-DNA陽性；③HBeAg血清標志物采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測試劑盒（英科新創(chuàng)廈門科技有限公司）；上述試驗嚴格按照標準操作規(guī)程進行操作。主要儀器為深圳RAYTO公司生產的RT-2100C型全自動酶標儀，美國BIO公司生產的熒光定量PCR儀。

1.3 統(tǒng)計學處理：應用SPSS19.0進行數據的統(tǒng)計分析，計數資料用率表示，采用χ2檢驗進行兩指標間陽性率的比較和相關分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 對照組的50例健康體檢者血清HBV-M檢測結果：41.8%抗-HBs陽性，其他項目皆陰性，HBV-DNA、HBV-LP陽性檢測率為零。慢性乙型肝炎患者各項指標的檢測結果HBV-LP陽性率為78.8%，高于HBVDNA的檢出陽性率76.5%，以及HBeAg的檢出陽性率40.7%。HBV-LP檢出率為78.8%高于HBV-DNA（76.5%）（χ2=0.4674，P＞0.05）二者無顯著性差異，HBV-LP和HBeAg檢出率（40.7%）比較（χ2=91.058，P＜0.01）二者差別有非常顯著意義；HBV-LP的HBeAg陰性患者陽性率為69.3%，對比HBV-DNA陰性患者HBV-LP陽性檢出率（11.27%）（χ2=62.43，P＜0.01）顯著高。HBV-DNA和LHB-LP陽性的標本檢測值比較，LHB-LP的檢測值（OD值）與HBV-DNA拷貝數對數值之間呈正相關，相關系數為r=0.86，P＜0.01，有18例慢性乙型肝炎患者血清檢測HBV-DNA和HBeAg皆是是陰性的標本中，檢出4例HBV-LP陽性。HBV-LP能夠反應HBV的復制情況見表1。

表1 HBeAg、HBV-DNA、HBV-LP檢出率

2.2 HBV-DNA及HBeAg陰性樣本LHBs檢測結果：見表2。在179例HBeAg陰性血清中，LHBs的陽性率為69.3%，在71例HBV-DNA陰性血清中LHBs的陽性率11.27%。

表2 HBV-DNA及HBeAg陰性標本中LHBs檢測結果[n（%）]

3 討 論

乙型肝炎病毒大蛋白是傳染性顆粒（Dane顆粒）和亞病毒顆粒的主要包膜成分，Dane顆粒的數目和亞病毒顆粒的數目與HBV的復制程度密切相關。HBV-LP在肝細胞內質網聚集是導致內質網應激的關鍵因素，亞病毒顆粒能通過反式激活使病毒繼續(xù)復制。目前，在抗病毒治療慢性乙型肝炎患者時，能抑制乙型肝炎病毒前基因組RNA復制的原始模板（cccDNA）再復制，但乙型肝炎病毒表達蛋白活性不能及時抑制，在HBV-DNA數量＜103copy/mL的低水平時，HBV-LP仍能在血清中檢測到，證明患者體內Dane顆粒和亞病毒顆粒依然存在，說明HBV的復制仍在繼續(xù)[7-11]。因此檢測HBV-LP對臨床上判定HBV復制具有一定的意義。

血清HBV-DNA檢測是評估的HBV復制可靠的指標，可直接反映患者體內乙型肝炎病毒的載量，是判定攜帶者和乙型肝炎患者有無傳染性重要依據，是目前判斷乙型肝炎病毒是否復制和抗病毒治療中評判藥物療效的良好指標。但HBV-DNA檢測對PCR實驗室條件和儀器設備要求較高，操作復雜，并且擴增產物極易受到污染而產生假陽性檢測結果，特別是基層醫(yī)院不能進行HBV-DNA檢測，僅僅以HBeAg陽性判斷HBV是否復制、以及傳染性的強弱，試驗表明HBeAg陰性并不代表HBV復制能力減低，在乙型病毒肝炎治療中，可導致病毒基因前C區(qū)或者CP區(qū)發(fā)生突變，使HBeAg合成受阻，故HBeAg檢測陰性，不能除外病毒的復制[12]。實驗數據表明，231例慢性乙型肝炎患者HBV-DNA陽性乙型肝炎患者血清中，隨著HBV-DNA拷貝數的升高其血清LHB-LP的含量（OD值）呈上升趨勢，兩項檢測具有良好的相關性（r=0.86，P＜0.01），說明體內HBV-LP與病毒復制程度密切相關，能準確反映出患者體內病毒的復制的情況，各項指標的檢測結果HBV-LP陽性率為78.8%，高于HBV-DNA的檢出率76.5%，以及HBeAg的檢出率40.7%。HBV-LP和HBV-DNA檢出率二者無顯著性差異，HBV-LP和HBeAg檢出率比較二者差別有非常顯著意義，HBV-LP的HBeAg陰性患者陽性率為69.3%，對比HBV-DNA陰性患者HBV-LP陽性檢出率（11.27%）（χ2=62.43，P＜0.01）顯著高，有8份HBV-DNA陰性標本檢測結果為而LHB-LP陽性，因此，抗病毒治療即使HBVDNA轉陰，也不能表明HBV已清除，如果此時盲目停止抗病毒治療，又何能使HBV死灰復燃病情復發(fā)，血清HBV-LP的檢測，可補充乙型肝炎患者抗病毒治療過程中HBV-DNA檢測在終止治療時機和療效觀察中的不足。有124份HBeAg陰性標本LHB-LP檢測結果為陽性，長期抗病毒治結果療可致使病毒基因發(fā)生突變，可使HBeAg合成受阻，此時慢性乙型肝炎患者血清HBeAg檢測陰性也不能說明病毒停止復制，HBV-LP的檢測就可判斷患者體內HBV的復制狀況，對病情監(jiān)測、觀察療效和判斷預后有很高的臨床價值。

總之，LHB-LP是HBV感染的一個新的標志物，對慢性乙型肝炎患者特別是血清HBV-DNA及HBeAg陰性的乙型肝炎患者，檢測血清HBV-LP的是反映患者體內病毒持續(xù)復制的敏感指標，能夠準確的反映出乙型肝炎患者體內病毒的感染情況，從適用和推廣的角度看，LHB-LP檢測由于易操作、成本低廉及易于推廣，因而更優(yōu)于HBVDNA的檢測?？勺鳛镠BV-DNA的替代及補充檢測指標，對提高血清學手段診斷HBV的水平有積極意義。

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