国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

2017-05-30 06:43李天寧
科技風(fēng) 2017年14期
關(guān)鍵詞:結(jié)核分枝桿菌免疫檢測(cè)

李天寧

DOI:10.19392/j.cnki.16717341.201714220

摘要:結(jié)核病是一個(gè)全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題。結(jié)核病的病原菌為結(jié)核分枝桿菌??汕址溉砀髌鞴?。本文旨在對(duì)這些結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法和最新進(jìn)展進(jìn)行綜述,以此來(lái)評(píng)價(jià)結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)技術(shù)的新進(jìn)展在結(jié)核實(shí)驗(yàn)室中的診斷價(jià)值。

關(guān)鍵詞:結(jié)核分枝桿菌;免疫檢測(cè);分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)

結(jié)核病高死亡率的主要原因是缺乏對(duì)結(jié)核分枝桿菌快速有效的檢測(cè)方法。本文現(xiàn)對(duì)這些結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法和最新進(jìn)展進(jìn)行綜述,為實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌時(shí)提供參考。

1 細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法

1.1 抗酸染色

取患者的痰液或組織切片標(biāo)本,將其中的膿性物質(zhì)或干酪樣物質(zhì)部分厚涂片,然后進(jìn)行抗酸染色,在顯微鏡下觀察涂片。一般每100個(gè)視野出現(xiàn)1~9條視為陽(yáng)性。其優(yōu)點(diǎn)為操作簡(jiǎn)便易行;缺點(diǎn)是敏感性低,陽(yáng)性率低。而過(guò)氧化氫能夠提高細(xì)胞壁通透性,使染液易于進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),因此,可將30%過(guò)氧化氫加入堿性品紅染液中,有效提高抗酸染色敏感性,增加抗酸染色陽(yáng)性率。

1.2 金胺O熒光染色

結(jié)核桿菌細(xì)胞壁具有嗜石炭酸性,可選擇在染色劑中加入石炭酸,使其作為媒染劑,促使抗酸桿菌著色。鏡下觀察,亮綠色熒光表示金胺 O 熒光染色陽(yáng)性,即為抗酸桿菌。與暗色背景形成鮮明對(duì)比。在顯微鏡下觀察涂片,一般每50個(gè)視野出現(xiàn)2~18個(gè)熒光點(diǎn)則視為陽(yáng)性。其優(yōu)點(diǎn)為與暗色背景對(duì)比鮮明,不易漏檢,但其缺點(diǎn)是由于在暗場(chǎng)中觀察,而且熒光強(qiáng)度不斷衰減,因此要及時(shí)觀察,涂片后保存時(shí)間較短。近幾年來(lái)有將發(fā)光二極管技術(shù)與熒光顯微鏡相結(jié)合,其鏡檢時(shí)間明顯縮短,陽(yáng)性檢出率也有所提高。

1.3 噬菌體壓電傳感器快速檢測(cè)

利用串聯(lián)式壓電石英傳感器對(duì)環(huán)境電參數(shù)相應(yīng)靈敏的特點(diǎn),對(duì)壓電頻移曲線(xiàn)進(jìn)行分類(lèi),用噬菌體成斑率為指標(biāo),根據(jù)噬菌體只能感染活的結(jié)合分枝桿菌的特點(diǎn),將PAMSPQC法應(yīng)用于結(jié)合分枝桿菌耐藥檢測(cè)。該方法特異性比較好,但是PAMSPQC同樣存在噬菌體感染效率的問(wèn)題。

1.4 結(jié)核桿菌培養(yǎng)法

傳統(tǒng)的固體培養(yǎng)法以改良羅氏培養(yǎng)基最為常見(jiàn),其靈敏度高于涂片鏡檢。隨著快速培養(yǎng)概念的提出,半自動(dòng)和全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)系統(tǒng)迅速涌入市場(chǎng)。隨后的BACTECMGIT 960系統(tǒng)保留 BACTEC 460 快速培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)得同時(shí)以熒光代替放射元素進(jìn)行檢測(cè)。

法國(guó)生物梅里埃公司研制的BacT/Alert 3D全自動(dòng)快速結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng),根據(jù)培養(yǎng)管中CO2 變化導(dǎo)致的pH 改變,設(shè)計(jì)可以隨著 pH 改變發(fā)生顏色改變的傳感器進(jìn)行檢測(cè)。

2 免疫檢測(cè)方法

2.1 血清學(xué)診斷

血清學(xué)診斷常用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)的方法?,F(xiàn)在常用的結(jié)核分枝桿菌抗體包括LAM、38×103與16×1033種抗原的IgG。在最新的研究中,主要將重組抗原應(yīng)用于ELISA,以提高反應(yīng)的敏感性和特異性,如包含幾個(gè)MTB蛋白的融合蛋白(如CFP10、EAST6、MPT64 和 38 kDa 蛋白)。

人群中結(jié)核分支桿菌的感染局較高,其中大部分發(fā)生是隱性感染,導(dǎo)致在不發(fā)病的健康群體內(nèi)也會(huì)存在一定基礎(chǔ)滴度的結(jié)核分支桿菌抗體,此外各地區(qū)健康人群內(nèi)結(jié)核分支桿菌抗體基礎(chǔ)水平有較大差異,綜上,血清中結(jié)核分支桿菌抗體檢測(cè)雖然具備一定診斷價(jià)值,但仍存在局限性。血清學(xué)只能作為輔助結(jié)核病診斷的指標(biāo)之一。

2.2 抗酸免疫組化雙重染色

在此前的研究中,常應(yīng)用抗酸和免疫組織化學(xué)的方法對(duì)組織切片進(jìn)行染色。但在應(yīng)用免疫組化的方法同時(shí)檢測(cè)肺結(jié)核組織和淋巴結(jié)結(jié)核組織中結(jié)核桿菌的分泌蛋白 ( MPT32、MPT44、MPT46、MPT51、MPT53、MPT59、MPT63 和MPT64) 及菌體蛋白( Mce1A、Hsp65、MPT57)的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),不同感染階段結(jié)核桿菌的分泌蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在很大差異,因此無(wú)法應(yīng)用于結(jié)核病的診斷。此外,結(jié)核桿菌菌體蛋白特異性過(guò)低,不能較好的反應(yīng)分枝桿菌與巨噬細(xì)胞的準(zhǔn)確位置關(guān)系,現(xiàn)結(jié)核病組織病理學(xué)研究時(shí),多應(yīng)用萋納氏抗酸染色法和CD68免疫組化雙重染色,在同一組織切片中達(dá)到同時(shí)顯示結(jié)核分枝桿菌與巨噬細(xì)胞分布情況的目的。

采用先免疫組化染色,再抗酸染色,最后蘇木素染核的順序進(jìn)行操作處理的組織切片,背景清晰、對(duì)比鮮明、顯色效果好,在同一切片內(nèi)可以清楚觀察到巨噬細(xì)胞和結(jié)核分枝桿菌的分布狀態(tài),便于判定結(jié)核病病程性質(zhì)。

2.3 結(jié)核分枝桿菌抗體(IgG)生物微矩陣(芯片)法

利用生物蛋白芯片對(duì)結(jié)核患者的蛋白制備進(jìn)行檢測(cè),需要將幾個(gè)蛋白指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè),如可將LAM、38 KDa及 16KDa等蛋白聯(lián)合,有利于結(jié)核病陽(yáng)性蛋白檢測(cè)的準(zhǔn)確率,為結(jié)核與肺外結(jié)核的早期診斷提供參考。系統(tǒng)包括生物微矩陣(芯片)分析儀與生物微矩陣(芯片),可對(duì)生物微矩陣(芯片)的檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行定量分析和結(jié)果判定,只需3~5min即可讀取數(shù)據(jù),特異性好,靈敏度高。

最近20多年來(lái),近年來(lái)結(jié)核病疫情呈明顯上升趨勢(shì),現(xiàn)在中國(guó)成為全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一,全球的流行形勢(shì)十分嚴(yán)峻。本文通過(guò)對(duì)這些結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法和最新進(jìn)展進(jìn)行綜述,以此來(lái)評(píng)價(jià)結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)技術(shù)的新進(jìn)展在結(jié)核實(shí)驗(yàn)室中的診斷價(jià)值。

參考文獻(xiàn):

[1]Global Tuberculosis Control:Epidemiology,Strategy,F(xiàn)inancing:WHO report 2009[R].Genera,WHO HTM TB 2009.

[2]米賢文.新型噬菌體壓電傳感器快速檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的機(jī)理及其藥敏應(yīng)用效果的研究[D].湖南大學(xué),2013.

[3]曹冉冉,劉邦英,等.分子信標(biāo)熒光定量PCR在肺結(jié)核早期診斷及療效評(píng)價(jià)中的初步應(yīng)用[J].中國(guó)防癆雜志,2012.

猜你喜歡
結(jié)核分枝桿菌免疫檢測(cè)
牛奶及水樣中泰樂(lè)菌素酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法研究
電化學(xué)發(fā)光傳感器的應(yīng)用研究
淺析進(jìn)行酶聯(lián)免疫檢測(cè)在診斷乙型病毒性肝炎中的價(jià)值
大鯢虹彩病毒主要衣殼蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體制備
建澤瀉鯊烯合酶原核表達(dá)、功能驗(yàn)證及其免疫檢測(cè)研究
萊克多巴胺檢測(cè)方法研究進(jìn)展
安陽(yáng)地區(qū)初治肺結(jié)核患者菌型鑒定與耐藥性分析
利福平和異煙肼耐藥基因突變快速檢測(cè)方法在結(jié)核病中的應(yīng)用
廣東順德區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床耐藥性分析