居斌+高小春

摘 要： 介紹了Agilent1100 HPLC儀操作技術(shù)規(guī)程，總結(jié)了Agilent1100 HPLC儀日常維護(hù)保養(yǎng)事項(xiàng)，旨在幫助Agilent1100 HPLC儀操作者使用。

關(guān)鍵詞：Agilent1100 型 HPLC 操作規(guī)程 維護(hù)保養(yǎng)

中圖分類號(hào)：TH833 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1003-9082（2016）12-0250-01

HPLC儀是目前應(yīng)用廣泛的分離、分析、純化有機(jī)化合物（包括能通過化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)化合物的無機(jī)物）的有效儀器之一。 在已知的有機(jī)化合物中，約有80%能用HPLC分離、分析，而且由于此法條件溫和，不破壞樣品，因此特別適合高沸點(diǎn)、難氣化揮發(fā)、熱穩(wěn)定性差的有機(jī)化合物和生命物質(zhì)。本文主要介紹Agilent1100 HPLC儀操作技術(shù)規(guī)程及日常維護(hù)保養(yǎng)事項(xiàng)。

一、儀器的環(huán)境要求

儀器環(huán)境要求：排風(fēng)良好、周圍沒有電磁干擾、無強(qiáng)烈的機(jī)械振動(dòng)的室內(nèi)，溫度為10℃～30℃，相對(duì)濕度不高于80%；電源要求：電壓為220±22V，電源頻率為50±0.5Hz。

二、操作規(guī)程

1.開機(jī)

1.1接通電源，打開計(jì)算機(jī)及工作站其它各部件開關(guān)，約30秒鐘后，各部件進(jìn)入待機(jī)狀態(tài)，指示燈為黃色或無色。

1.2打開HP ChemStations，進(jìn)入Instrument 1 online狀態(tài)，約30秒鐘后，計(jì)算機(jī)進(jìn)入工作站的操作頁(yè)面。該頁(yè)面主要由以下幾部分組成：最上方為命令欄，依次為File，Run Control，Instrument等；命令欄下方為快捷操作圖標(biāo)，由多個(gè)樣品連續(xù)進(jìn)行分析、單個(gè)樣品進(jìn)樣分析、調(diào)用文件、保存文件等；左邊為樣品信息欄；中部為工作站各部件的工作流程示意圖，依次為進(jìn)樣器→輸液泵→柱溫箱→檢測(cè)器→數(shù)據(jù)處理→報(bào)告；中下部為動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)信號(hào)；右下部為色譜工作參數(shù)：進(jìn)樣體積、流速、分析停止時(shí)間、流動(dòng)相比例、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)等。

1.3 色譜條件的設(shè)定（色譜條件的設(shè)定可以通過下列幾種方法實(shí)現(xiàn)）

1.3.1直接設(shè)定

在操作頁(yè)面的右下部一色譜工作參數(shù)中設(shè)定。將鼠標(biāo)移移至要設(shè)定的參數(shù)如進(jìn)樣體積、流速、分析停止時(shí)間、流動(dòng)相比例、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)等，單擊一下，即可顯示該參數(shù)的設(shè)置頁(yè)面，鍵入設(shè)定值后，單擊“OK”，即完成。

1.3.2 調(diào)用已設(shè)置好的文件

在命令欄“Method”下，選擇“Load Method”，或直接單擊快捷鍵操作的“Load Method”圖標(biāo)，選定文件名，單擊“OK”， 此時(shí)，工作站即調(diào)用所選用文件中設(shè)定的參數(shù)。如欲進(jìn)行修改，則可同1.3.3項(xiàng)下，在色譜工作參數(shù)中作修改；亦可在命令欄“Method”下，選擇“Edit Entire Method”， 在每個(gè)頁(yè)面中鍵入設(shè)定值，單擊“OK”， 即完成。

1.3.3 編輯新文件

先在命令欄“Method”下，選擇“New Method”，之后再在命令欄“Method”下，選擇“Edit Entire Method”， 在每個(gè)頁(yè)面中鍵入設(shè)定值，完成后，“Save Method”， 先在命令欄“Method”下選擇“Save Method”，給新文件命名，單擊“OK”，即完成。

2.儀器的運(yùn)行

當(dāng)色譜參數(shù)設(shè)置完成后，單擊工作站流程圖右下角的“on”儀器開始運(yùn)行。此時(shí)，畫面顏色由灰色變成黃色或綠色，當(dāng)各部件達(dá)到所設(shè)定的參數(shù)時(shí)，畫面均變?yōu)榫G色，左上角紅色的“not ready ”變?yōu)榫G色的“ready ”，表明可以進(jìn)行分析。

3.進(jìn)樣分析（有單個(gè)樣品分析和多個(gè)樣品連續(xù)分析兩種）

3.1單個(gè)樣品分析

如無自動(dòng)進(jìn)樣器，在命令欄“Run Control”下，選擇“Sample Info……” 可輸入操作者（Operator Name）、數(shù)據(jù)存貯通道（Subdirectory）、樣品名（Sample Name）等信息，單擊“OK”，然后即可用手動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣。如有自動(dòng)進(jìn)樣器，在命令欄“Run Control”下，選擇“Sample Info……”或點(diǎn)擊快捷操作的“一個(gè)小瓶”圖標(biāo)，之后單擊樣品信息欄內(nèi)的小瓶，選擇“Sample Info……”即打開了樣品信息頁(yè)面，可輸入操作者（Operator Name）、數(shù)據(jù)存貯通道（Subdirectory）、進(jìn)樣瓶號(hào)（Vial）、樣品名（Sample Name）等信息，單擊“OK”， 即完成。

3.2多個(gè)樣品連續(xù)樣品分析

單擊快捷操作的“三個(gè)小瓶”圖標(biāo)，之后單擊樣品信息欄內(nèi)的樣品盤，選擇“Sequence Table”，即進(jìn)入連續(xù)樣品序列表的編輯，可輸入進(jìn)樣瓶號(hào)、樣品名進(jìn)樣次數(shù)、進(jìn)樣體積等信息，單擊“OK”， 即完成。否則儀器將運(yùn)行至色譜參數(shù)設(shè)置中所設(shè)定的分析停止時(shí)間方結(jié)束分析。

3.3單擊信息欄上方綠色的“Start”，自動(dòng)進(jìn)樣器即按“3.1”或“3.2”設(shè)置的程序進(jìn)行分析，如欲終止分析，可單擊信息欄上方綠色的“Stop”，否則儀器將運(yùn)行至色譜參數(shù)設(shè)置中所設(shè)定的分析停止時(shí)間方結(jié)束分析。

4.數(shù)據(jù)分析

在命令欄“ View”下選擇“Data Analysis”，則進(jìn)入數(shù)據(jù)處理頁(yè)面。該頁(yè)面最上方為命令欄，依次為File ，Graphics，Integration……等，命令欄下方為快捷操作圖標(biāo)，如積分、校正、色譜圖、單一色譜圖調(diào)用、多色譜圖調(diào)用、調(diào)用方法、保存方法等。

4.1調(diào)用色譜圖

在命令欄“File”下，選擇“Load Signal”或單擊快捷操作的“單一色譜圖調(diào)用”圖標(biāo)選擇色譜圖文件名，單擊“OK”，畫面中即可出現(xiàn)所調(diào)用的色譜圖。

4.2 積分

先調(diào)用所要分析的圖譜，在命令欄“Integration”下選擇“Integration” 或單擊快捷鍵操作的“積分”圖標(biāo)，此時(shí)儀器按內(nèi)置的積分參數(shù)給出積分結(jié)果。如欲對(duì)其中參數(shù)進(jìn)行修改，可在命令欄“Integration”下選擇“Integration Events”或單擊快捷鍵操作的“編輯/設(shè)定積分表”圖標(biāo)，此時(shí)，在屏幕下方左側(cè)出現(xiàn)積分參數(shù)表，右側(cè)為積分結(jié)果，在積分參數(shù)表中按實(shí)際的要求輸入修改的參數(shù)，如斜率、峰寬、最小峰面積、最低峰高等。在命令欄“Integration”下選擇“Integration ” 或單擊快捷鍵操作的“對(duì)現(xiàn)有色譜圖積分”圖標(biāo)，儀器即按照新設(shè)定的積分參數(shù)重新積分，完成后，單擊積分參數(shù)表中“取消積分參數(shù)”的快捷圖標(biāo)，保存所作的參數(shù)修改，單擊“OK”，即可退出。

5.分析報(bào)告的打印

在命令欄“Report”下，選擇“Specify Report”或單擊最右側(cè)快捷鍵操作的“定義報(bào)告及打印格”（右下角帶叉的報(bào)告畫面）圖標(biāo)，根據(jù)實(shí)際要求選擇報(bào)告的格式和輸出形式等， 單擊“OK”， 即完成。例如，可在“Destination”項(xiàng)下選擇“Screen”，在“Quantitative Result”項(xiàng)下，對(duì)“Calculate”選“Percent”、對(duì)“Based On”選“Area”、對(duì)“Sorted By”選“Signal ”；在 “Style”項(xiàng)下，對(duì)“Report Style”選“Short”，再依次選擇“Sample into on each page”、“Add chromatogram output”之后選擇快捷鍵操作的“報(bào)告預(yù)覽”圖標(biāo)，可預(yù)覽報(bào)告的全貌，單擊“Print”，即可進(jìn)行報(bào)告的打印。最后，單擊“close”退出此操作頁(yè)面。

6.關(guān)機(jī)

6.1在命令欄“View”下，選擇“Method and Run Control”，回到主控制頁(yè)面，在命令欄“File”下，選擇“Exit”， 單擊“Yes”，關(guān)閉“Instrument 1 online”，再單擊“Yes”，關(guān)閉輸液泵、柱溫箱及檢測(cè)器氘燈。

6.2在化學(xué)工作站頁(yè)面上，在“File”下選“Close”，退出“HP ChemStation”。

6.3 關(guān)閉計(jì)算機(jī)及所有工作站所有各部件電源開關(guān)。

三、日常維護(hù)保養(yǎng)

1.定期清洗溶劑過濾頭，用35%濃硝酸浸泡1小時(shí)，不要使用超聲波清洗。

2.流動(dòng)相應(yīng)經(jīng)過0.45um或更小孔徑的濾器過濾，如果使用濾膜，注意有機(jī)膜與水膜的區(qū)別（聚四氟乙烯能適用于所有溶劑）。

3.根據(jù)情況更換Purge閥內(nèi)的在線過濾頭（Purge閥打開，純水5ml/min，壓力超過10bar時(shí)需更換）。

4.注意清洗在線脫氣機(jī)及比例閥，尤其是長(zhǎng)期使用水相或緩沖鹽的通路，使用純水沖洗后，再使用甲醇沖洗，可以打開Purge閥，使用5ml/min的流速。污染比較嚴(yán)重時(shí)，可以使用異丙醇（IPA）清洗。

5.安裝有seal wash組件的，無論是否使用緩沖鹽，開泵之前都應(yīng)該使之充滿流動(dòng)的液體（10%IPA水溶液）并調(diào)流速為20滴/分鐘。

6.正相色譜、反相色譜切換時(shí)應(yīng)使用IPA過渡，長(zhǎng)期使用正相，應(yīng)更換正相柱塞密封墊。

7.樣品進(jìn)樣之前最好過濾，如果樣品量太少，可以適當(dāng)抬高進(jìn)樣針的位置。

8.流動(dòng)相pH大于9.5或小于2.3時(shí)，進(jìn)樣閥應(yīng)更換四氟（tefzel）轉(zhuǎn)子密封圈。

9.注意不同檢測(cè)器流通池耐壓?jiǎn)栴}，盡量避免使用pH>9.5的流動(dòng)相，以防腐蝕流通池石英窗，避免使用可能析晶的流動(dòng)相，防止流通池堵塞。

四、小結(jié)

HPLC儀是一種精密的分析儀器，日常工作中要正確的操作使用，并定期維護(hù)保養(yǎng)和期間核查，每1～3年進(jìn)行計(jì)量檢定，使HPLC儀的技術(shù)性能處于良好工作狀態(tài)，以確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。