司曉輝，孫攀興

(焦作煤業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司中央醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 焦作454000)

Septin-9在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義

司曉輝，孫攀興

(焦作煤業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司中央醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 焦作454000)

目的 探討Septin-9在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)及及意義。方法 選取子宮內(nèi)膜癌患者63例、子宮內(nèi)膜不典型增生患者30例和正常子宮內(nèi)膜組織42例作為對(duì)照組，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)不同組織中Septin-9基因表達(dá)，所有子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后均獲得隨訪，隨訪截止日期2015年4月30日，以子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量的中位數(shù)為界值，將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，利用Kaplan-Meier生存分析法分析不同Septin-9表達(dá)水平對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后生存時(shí)間的影響。結(jié)果 子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量高于子宮內(nèi)膜不典型增生組織和對(duì)照組，且子宮內(nèi)膜不典型增生組織高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=29.673，P<0.05)；子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量與組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(t值分別為17.921、5.211和6.042，P<0.05)；Kaplan-Meier生存分析顯示，低表達(dá)組患者術(shù)后平均生存時(shí)間77.4個(gè)月，高表達(dá)組患者術(shù)后平均生存時(shí)間59.0個(gè)月，Log Rank檢驗(yàn)顯示兩組患者術(shù)后生存時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.238，P=0.022)。結(jié)論 Septin-9在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高表達(dá)，可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，且與患者預(yù)后密切相關(guān)。

子宮內(nèi)膜癌；Septin-9；實(shí)時(shí)定量PCR；預(yù)后

子宮內(nèi)膜癌作為女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，占女性生殖道惡性腫瘤的25%～40%，近年來(lái)發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且呈年輕化[1]，嚴(yán)重影響女性健康。目前，子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機(jī)制尚未研究清楚。胞裂蛋白(Septin)是廣泛存在于真核生物中的進(jìn)化上保守的細(xì)胞骨架GTP結(jié)合蛋白基因家族，Septin-9是其重要家族成員，參與調(diào)控細(xì)胞質(zhì)分裂、細(xì)胞膜重構(gòu)、細(xì)胞極化、囊泡運(yùn)輸?shù)榷喾N生物過(guò)程[2]。研究表明[3-4]，Septin-9與多種惡性腫瘤發(fā)生及進(jìn)展過(guò)程有關(guān)，但有關(guān)Septin-9與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的關(guān)系鮮有報(bào)道。本研究擬利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析Septin-9在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)，探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、進(jìn)展中的作用，以期為臨床實(shí)踐提供基礎(chǔ)資料。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2008年4月至2010年4月在焦作煤業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司中央醫(yī)院擇期行手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜癌患者63例，年齡36～71歲，平均年齡(56.2±8.3)歲，所有患者均經(jīng)術(shù)后病理學(xué)檢查確診，術(shù)前均未接受放化療治療；同期，選取在我院治療的子宮內(nèi)膜不典型增生患者30例，年齡37～73歲，平均年齡(56.9±8.8)歲，并留取在我院治療的子宮肌瘤患者正常子宮內(nèi)膜組織42例作為對(duì)照組，年齡33～69歲，平均年齡(55.7±8.0)歲，三組研究對(duì)象年齡無(wú)差異(P>0.05)，均衡可比。所有研究對(duì)象于術(shù)中留取組織并存放于液氮中以備檢。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，均取得患者知情同意。

1.2方法

1.2.1主要試劑及器材

Trizol總RNA抽提試劑盒購(gòu)自上海恪敏生物科技有限公司，逆轉(zhuǎn)錄和PCR試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，Septin-9和內(nèi)參引物均由上海生工公司設(shè)計(jì)合成，紫外分光光度計(jì)購(gòu)自上海譜元儀器有限公司，ABI 7300熒光定量PCR儀購(gòu)自美國(guó)ABI公司。

1.2.2利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)不同組織中Septin-9基因表達(dá)

取組織研磨后，加入細(xì)胞裂解液進(jìn)行裂解，用Trizol總RNA抽提試劑盒對(duì)組織中總RNA進(jìn)行提取，用紫外分光光度計(jì)對(duì)獲得的總RNA純度進(jìn)行檢測(cè)，取A260/A280≥1.80樣本完成后續(xù)操作。用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為模板單鏈cDNA，以cDNA為模板用PCR儀進(jìn)行PCR。Septin-9和內(nèi)參引物分別為：Septin-9引物序列：上游：5′-CAGA￣GCGGCTTGGGTAAATCC-3′，下游：5′-CTCCTCA￣ATATCGT￣GCGTGATGG-3′；β-actin內(nèi)參引物：上游：5′-GCTG￣TCACCTTCACCGTTC-3′，下游：5′-CCATC￣GTCC￣ACC￣GCAAAT-3′。PCR反應(yīng)條件：94℃ 60s，92℃ 45s，56℃ 30s，74℃ 30s，連續(xù)進(jìn)行38個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品均設(shè)置3個(gè)平行反應(yīng)復(fù)孔。用2-△△Ct法獲得不同組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量。

1.2.3子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后隨訪

所有子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后均獲得隨訪，隨訪形式包括門診和電話隨訪，隨訪截止日期2015年4月30日。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1不同子宮內(nèi)膜組織中Septin-9基因表達(dá)水平比較

子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量高于子宮內(nèi)膜不典型增生組織和對(duì)照組，且子宮內(nèi)膜不典型增生組織高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳見(jiàn)圖1。

圖1 Septin-9基因在不同子宮內(nèi)膜組織中表達(dá)

Fig.1 Expressions of Septin-9 gene in different endometrial tissues

2.2子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量與臨床病理特征之間的關(guān)系

子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量與年齡、組織學(xué)類型無(wú)關(guān)(P>0.05)，而與組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，詳見(jiàn)表1。

表1 子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量與臨床

病理特征之間的關(guān)系±S)Table 1 Relationship between the expressions of Septin-9 in endometrial carcinoma tissues and clinicopathological ±S)

2.3子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量對(duì)患者預(yù)后的影響

63例子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)后均獲得隨訪，隨訪中17例患者出現(xiàn)死亡。以子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量的中位數(shù)為界值，將患者分為高表達(dá)組(n=31)和低表達(dá)組(n=32)，Kaplan-Meier生存分析顯示，低表達(dá)組患者術(shù)后平均生存時(shí)間77.4個(gè)月，高表達(dá)組患者術(shù)后平均生存時(shí)間59.0個(gè)月，Log Rank檢驗(yàn)顯示兩組患者術(shù)后生存時(shí)間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.238，P=0.022)，見(jiàn)圖2。

圖2 子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量對(duì)患者預(yù)后的影響

Fig.2 Effects of expressions of Septin-9 mRNA in endometrial carcinoma tissues on prognosis

3討論

子宮內(nèi)膜癌是常見(jiàn)的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，是卵巢癌、宮頸癌之后第三個(gè)女性癌癥死亡原因，近年來(lái)，在我國(guó)發(fā)病率逐年升高，已成為第二位女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤[5]。目前，該病病因不明，發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚。Septin-9定位于人染色體17q25.3，研究發(fā)現(xiàn)，siRNA干擾Septin-9蛋白表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞分裂不完全[6]。同時(shí)，Septin-9表達(dá)異常可致細(xì)胞形態(tài)改變、細(xì)胞極性丟失，使細(xì)胞向腫瘤特性轉(zhuǎn)變風(fēng)險(xiǎn)增加[7]。Septin-9在乳腺癌[8]、胃癌[9]、卵巢癌[10]等惡性腫瘤中均出現(xiàn)表達(dá)失調(diào)。本研究顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量高于子宮內(nèi)膜不典型增生組織和對(duì)照組，且子宮內(nèi)膜不典型增生組織高于對(duì)照組，說(shuō)明Septin-9基因在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)上調(diào)，且呈現(xiàn)從子宮內(nèi)膜不典型增生到子宮內(nèi)膜癌逐漸升高的趨勢(shì)，提示Septin-9可能作為癌基因而參與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生過(guò)程。

本研究顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量與組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，組織學(xué)分級(jí)越高、FIGO分期越高、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量越高，說(shuō)明Septin-9基因可能參與了子宮內(nèi)膜癌侵襲、轉(zhuǎn)移及進(jìn)展過(guò)程，有研究指出，Septin-9可通過(guò)HIF途徑而參與腫瘤轉(zhuǎn)移、耐藥過(guò)程[11]。亦有研究指出，Septin-9可通過(guò)JNK途徑和Rho信號(hào)通路而參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分裂過(guò)程[12]。但具體到子宮內(nèi)膜癌尚待進(jìn)一步研究明確。為進(jìn)一步分析子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量對(duì)患者預(yù)后的影響，根據(jù)Septin-9 mRNA表達(dá)量將患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，Kaplan-Meier生存分析顯示，低表達(dá)組患者術(shù)后平均生存時(shí)間77.4個(gè)月，高表達(dá)組患者術(shù)后平均生存時(shí)間59.0個(gè)月，Log Rank檢驗(yàn)顯示兩組患者術(shù)后生存時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.238，P=0.022)，說(shuō)明子宮內(nèi)膜癌組織中Septin-9 mRNA表達(dá)量可影響患者預(yù)后，高表達(dá)患者術(shù)后生存時(shí)間顯著縮短，提示Septin-9有望成為判定患者預(yù)后的指標(biāo)。

綜上所述，Septin-9在子宮內(nèi)膜癌組織中呈高表達(dá)，可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，且與患者預(yù)后密切相關(guān)，有望成為評(píng)估患者預(yù)后的指標(biāo)。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：張冠軍]

Expression and significance of Septin-9 in endometrial carcinoma

SI Xiao-hui, SUN Pan-xing

(DepartmentofObstetricsandGynecology,CentralHospitalofJiaozuoCoal(Group)LimitedLiabilityCompany,HenanJiaozuo454000,China)

Objective To investigate the expression and clinical significance of Septin-9 in endometrial carcinoma. Methods Totally 63 cases of endometrial carcinoma, 30 cases of endometrial atypical hyperplasia and 42 cases of normal endometrial tissues in control group were selected. The expressions of Septin-9 in different tissues were detected by using real-time fluorescence quantitative PCR. All endometrial cancer patients after surgery were followed up. Follow-up deadline was April 30, 2015. The median value of the expression level of Septin-9 mRNA in endometrial carcinoma tissue was taken as the community value, and the patients were divided into high expression group and low expression group. The effects of different levels of expressions of Septin-9 in endometrial carcinoma tissues on the survival time after surgery were analyzed by using Kaplan-Meier survival analysis. Results The expression levels of Septin-9 mRNA in endometrial carcinoma tissues were higher than in atypical endometrial hyperplasia tissues and in the control group, and those in atypical endometrial hyperplasia tissues were higher than in the control group. The differences were statistically significant (F=29.673,P<0.05). The expression levels of Septin-9 mRNA in endometrial carcinoma tissues were correlated with histological grade, FIGO stage and lymph node metastasis (tvalue was 17.921, 5.211 and 6.042, respectively, allP<0.05). Kaplan-Meier survival analysis showed that the average survival time of patients in low expression group was 77.4 months and 59.0 months in high expression group. Log Rank test showed the difference in the survival time between two groups after surgery was statistically significant (χ2=5.238,P=0.022). Conclusion Septin-9 is highly expressed in endometrial carcinoma. It might play an important role in the occurrence and progression of endometrial carcinoma, and it is closely related to the prognosis of patients.

endometrial carcinoma; Septin-9; real-time quantitative PCR; prognosis

2016-07-18

吳階平醫(yī)學(xué)基金資助項(xiàng)目(課題編號(hào)320.6750.14109)

司曉輝(1985-) ，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事婦科疾病的診斷與治療。

王 青 ，副主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.02.014

R711.74

A

1673-5293(2017)02-0140-02