蔣 思 鄭楷平 劉 琴 杜田鍇 黎 錦 宋繼權(quán)

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·論著·

帶狀皰疹患者T細胞亞群的檢測

蔣 思1鄭楷平1劉 琴1杜田鍇1黎 錦2宋繼權(quán)1

目的： 檢測帶狀皰疹患者外周血T細胞亞群表達水平。方法： 采用流式細胞儀檢測116例帶狀皰疹患者及80名健康對照者外周血T細胞亞群。結(jié)果： 帶狀皰疹患者外周血CD3+T細胞、CD4+T細胞均顯著高于健康人群，患者不同年齡組間、不同病程組間CD3+T細胞、CD4+T細胞無明顯差異。結(jié)論：帶狀皰疹患者CD3+T細胞、CD4+T細胞升高，提示特異性細胞免疫得以重建。

帶狀皰疹； T細胞亞群

帶狀皰疹病原體為水痘帶狀皰疹病毒(VZV)，初次感染后，VZV便潛伏于顱神經(jīng)及背根感覺神經(jīng)節(jié)，當其再次活化時則可引起健康人或免疫抑制患者發(fā)生帶狀皰疹[1,2]。本病的發(fā)生發(fā)展與細胞免疫功能密切相關(guān)，VZV特異性細胞免疫水平下降是誘發(fā)帶狀皰疹的關(guān)鍵[3]，但發(fā)病后常獲終生免疫力，提示帶狀皰疹患者患病后重建VZV特異性免疫力。為進一步探索帶狀皰疹患者細胞免疫過程，筆者對116例帶狀皰疹患者進行了T細胞亞群分析。

1 資料和方法

1.1 研究對象 選取2016年1～9月我院皮膚科病房住院治療的帶狀皰疹患者116例為研究對象，同時選取相同時間段來我院體檢中心體檢的健康人群80名為對照組。所有帶狀皰疹患者均具有典型的臨床表現(xiàn)，符合診斷標準[4]。排除標準：合并惡性腫瘤；合并自身免疫性疾?。皇褂妹庖咭种苿┱?；HIV患者；妊娠及哺乳期婦女。發(fā)病年齡為20～90歲，平均(59.72±13.805)歲；發(fā)病時間為1～15天，平均(5.69±2.671)天。

分組情況：研究證明VZV特異性細胞免疫水平40歲時達最高峰，之后隨年齡增長而下降[5]，而60歲以上人群為帶狀皰疹高發(fā)人群，故按發(fā)病年齡分為4組，即≤40歲、41～50歲、51～60歲、≥61歲；根據(jù)病毒感染后免疫應答的時相變化，通常感染后3天效應性T細胞即開始活化、8～9天達到高峰，故按發(fā)病時間分為3組，即≤3天、4～7天、≥8天。正常對照組年齡17～89歲，兩組間年齡與性別構(gòu)成均無統(tǒng)計學差異，具有可比性。

1.2 檢測方法 100 μL抗凝血加入FITC標記的抗CD3、CD4、CD8單克隆抗體孵育(所有抗體均購自Abcam公司)，上流式細胞術(shù)儀檢測(美國BD公司生產(chǎn))，配套軟件分析，計算CD3+、CD4+、CD8+各細胞群的相對比值。

2 結(jié)果

2.1 帶狀皰疹患者與健康人群相比，外周血總T細胞(CD3+T細胞)百分比與CD3+CD4+T細胞百分比均升高，差異有統(tǒng)計學意義，兩組間CD8+T細胞百分比差異無統(tǒng)計學意義(表1)。以正常參考范圍作參照，116例帶狀皰疹患者僅有1例CD3+T細胞低于正常值下限，52.6%位于正常范圍，47.4%高出正常值上限(圖 1)；33.6%的患者CD3+CD4+T細胞位于正常參考范圍，66.4%超過正常值上限(圖2)。

圖1 CD3+T細胞(%)正常參考范圍為38.56%～70.06%(兩條紅線之間的范圍)。116例帶狀皰疹患者僅有1例T細胞低于正常值下限，52.5%的位于正常值范圍，47.4%高出正常值上限 圖2 CD3+CD4+T細胞(%)正常參考范圍為14.21%～36.99%(兩條紅線之間的范圍)。116例帶狀皰疹患者33.6%位于正常參考范圍，66.4%超過正常值上限

表1 帶狀皰疹患者與健康人群外周血T細胞亞群檢測結(jié)果 %

2.2 帶狀皰疹患者不同年齡組相比，各年齡組間外周血總T細胞(CD3+T細胞)、CD3+CD4+T細胞、CD3+CD8+T細胞百分比差異均無統(tǒng)計學意義(表2)。

表2 帶狀皰疹患者不同年齡組間T細胞亞群檢測結(jié)果 %

2.3 帶狀皰疹患者不同病程組間比較，≤3天、4～7天、≥8天各組間外周血總T細胞(CD3+T細胞)、CD3+CD4+T細胞、CD3+CD8+T細胞百分比差異均無統(tǒng)計學意義(表3)。

表3 帶狀皰疹患者不同病程組間T細胞亞群檢測結(jié)果 %

3 討論

帶狀皰疹發(fā)生與VZV特異性T細胞免疫有關(guān)。人類初次感染水痘帶狀皰疹病毒后表現(xiàn)為水痘，之后該病毒便長期潛伏于顱神經(jīng)及背根神經(jīng)節(jié)，同時獲得VZV特異性細胞免疫并維持在一定水平[6]，當機體免疫力下降時可誘發(fā)帶狀皰疹。但本文研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，檢測帶狀皰疹患者T細胞亞群并未出現(xiàn)“免疫力低下”，反而呈現(xiàn)“免疫力增強”現(xiàn)象，說明帶狀皰疹患者患病后特異性細胞免疫力得以重建。

潛伏病毒的亞臨床再活化是終生存在的，但并不會發(fā)病，這得益于該病毒特異性T細胞免疫的存在。但隨年齡增長(>40歲)或存在免疫抑制情況時，水痘帶狀皰疹病毒特異性T細胞免疫水平下降，當該免疫水平下降至某一臨界值后則不足以抑制潛伏的水痘帶狀皰疹病毒，結(jié)果導致病毒播散引發(fā)神經(jīng)節(jié)炎，臨床表現(xiàn)為神經(jīng)支配區(qū)域的皮膚神經(jīng)痛以及隨之而出現(xiàn)的水皰[5]。

T細胞是機體介導細胞免疫的重要細胞群，各T細胞亞群相互協(xié)作共同完成免疫應答，若T細胞總數(shù)或不同亞群的比值發(fā)生改變，可能與某些疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[7]。CD4+T細胞在抗病毒免疫反應中發(fā)揮極其重要的作用[8]。本文研究結(jié)果顯示帶狀皰疹患者CD3+T細胞與CD4+T細胞較正常人群顯著升高，CD3+T細胞升高主要由CD4+T細胞升高所致，說明CD4+T細胞與帶狀皰疹特異性細胞免疫關(guān)系密切。帶狀皰疹發(fā)病期間，大量VZV活化復制，激活免疫系統(tǒng)使得原本下降的VZV特異性細胞免疫水平回升，并維持在一定水平，這便為免疫力正常人群幾乎不會再次發(fā)病提供了合理的解釋[9]。

Weinberg等對753名健康人群定期隨訪檢測水痘帶狀皰疹病毒特異性細胞免疫水平，在觀察時間內(nèi)其中73例發(fā)生帶狀皰疹，從而將發(fā)生帶狀皰疹人群患病前后的細胞免疫水平與未發(fā)生帶狀皰疹人群的免疫水平進行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，患病人群在發(fā)病前的細胞免疫水平顯著低于未患病人群的細胞免疫水平，但VZV特異性效應T細胞反應快速上升并在帶狀皰疹皮疹出現(xiàn)后的1～3周達到峰值，第3～6周快速下降，在隨后至少2年維持穩(wěn)定水平。VZV特異性記憶T細胞上升慢，在皮疹出現(xiàn)后3～6周達到高峰，在感染后第1年內(nèi)下降，此后2年或更長時間以穩(wěn)定水平維持[10]。該研究結(jié)果揭示了帶狀皰疹患者特異性細胞免疫水平在發(fā)病前下降、發(fā)病后上升并維持穩(wěn)定水平的變化特點。本文檢測結(jié)果與Weinberg等[10]的結(jié)果一致。另有研究者通過VZV特異性IFN-γ釋放試驗，間接證實帶狀皰疹患者圍患病期的特異性細胞免疫水平呈升高狀態(tài)[3]。上述研究結(jié)果均證明帶狀皰疹患者患病后特異性細胞免疫水平得以重建。

CD8+T細胞具有特異性殺傷病毒感染細胞的功能，在感染恢復中起重要作用，但本文未發(fā)現(xiàn)帶狀皰疹患者與正常人群CD8+T細胞之間具有顯著差異。另外，本文也未發(fā)現(xiàn)不同年齡組間、不同病程組間CD3+T細胞百分比、CD3+CD4+T細胞百分比和CD3+CD8+T細胞百分比有顯著差異，說明患病短期內(nèi)獲得的細胞免疫水平可能與年齡關(guān)系不大。擬后期進一步擴大樣本量和后期定期隨訪檢測T細胞亞群，探索特異性細胞免疫水平隨病程延長及年齡增長的變化趨勢。

4 小結(jié)

VZV特異性細胞免疫水平的下降或升高與帶狀皰疹發(fā)病與否關(guān)系密切，其中CD4+T細胞發(fā)揮重要作用。帶狀皰疹患者發(fā)病前因各種因素使該細胞免疫水平下降，但發(fā)病后又迅速升高，并通?？色@終生免疫力，提示VZV特異性細胞免疫在潛伏VZV病毒再活化刺激下得以重建。另外，VZV特異性細胞免疫力升高可以降低帶狀皰疹的嚴重程度及帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛的發(fā)生率[11]。T細胞亞群測定可反映患者細胞免疫水平的高低，從而有助于評估病情與判斷預后。

[1] Cohen J, Straus S. Arvin AVaricella-zoster virus[M]. 5th edn. Philadelphia: Lippincott-Williams & Wilkins,2007.2547-2586.

[2] Zerboni L, Arvin AM. The patho- genesis of varicella zoster virus neurotropism and infection.In:Carol R (ed) Neurotropic viral infections[M]. New York: Cambridge Press,2008.225-250.

[3] Otani N, Yamanishi K, Sakaguchi Y, et al. Varicella-zoster virus-specific cell- medamediated immunity in subjects with herpes zoster[J]. J Immunol Methods,2012,377(1-2):53-55.

[4] 趙辨.臨床皮膚病學[M].3版.南京：江蘇科學技術(shù)出版社，2001.301.

[5] Allison A, Ann AM, Moffat JF. Varicella-zoster Virus[M]. New York: Springer,2010.342.

[6] Rotbart HA, Levin MJ, Hayward AR. Immune responses to varicella zoster virus infections in healthy children[J]. J Infect Dis,1993,167(1):195-199.

[7] 龔非力.醫(yī)學免疫學[M].3版.北京：科學出版社，2009. 118.

[8] Whitmire JK. Induction and function of virus-specific CD4+ T cell responses[J]. Virology,2011,411(2):216-228.

[9] Hope-Simpson RE. The nature of herpes zoster:a long-term study and a new hypothesis[J]. Proc R Soc Med,1965,58:9-20.

[10] Weinberg A, Zhang JH, Oxman MN. Varicella-zoster virus-specific immune responses to herpes zoster in elderly participants in a trial of a clinically effective zoster vaccine[J]. J Infect Dis,2009,200(7):1068-1077.

[11] Malavige GN, Jones L, Kamaladasa SD, et al. Viral load, clinical disease severitand cellular immune responses in primary varicella zoster virus infection in Sri Lanka[J]. PLoS One,2008,3(11):e3789.

(收稿：2016-10-29 修回：2016-12-05)

Detection of peripheral T-lymphocyte subsets in the patients with herpes zoster

JIANGSi1,ZHENGKaiping1,LIUQin1,DUTiankai1,LIJin2,SONGJiquan1.

1.DepartmentofDermatology,ZhongnanHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430071,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,ZhongnanHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430071,China

SONGJiquan,E-mail:songjiq@126.com

Objective: To detect the level of T-lymphocyte subsets in the patients with herpes zoster. Methods: T-lymphocyte subsets in 116 patients with herpes zoster and 80 healthy controls were detected by flow cytometry. Results: The levels of CD3+, CD4+lymphocyte in the patients with herpes zoster were higher than those in healthy controls. There was no significant difference in the levels of CD3+, CD4+lymphocyte among the patients in different age and duration of the disease. Conclusion: The levels of CD3+, CD4+lymphocyte in the patients with herpes zoster are increased, which indicates the reconstruction of of cellular immunity.

Herpes zoster; T-lymphocyte subsets

1武漢大學中南醫(yī)院皮膚科，湖北武漢，430071 2武漢大學中南醫(yī)院檢驗科，湖北武漢，430071

宋繼權(quán)，E-mail：songjiq@126.com