程麗麗

(響水縣中醫(yī)院，江蘇 響水 224600)

乙肝五項(xiàng)檢測(cè)中酶免疫法和金標(biāo)免疫法的應(yīng)用研究

程麗麗

(響水縣中醫(yī)院，江蘇 響水 224600)

目的 研究乙肝五項(xiàng)檢測(cè)中酶免疫法和金標(biāo)免疫法的檢測(cè)的一致性和靈敏度的差異及其在臨床中的應(yīng)用。方法 隨機(jī)選取我院檢驗(yàn)科2012年6月至2015年6月的血樣150例作為研究樣本，分別采用酶免疫法和金標(biāo)免疫法檢測(cè)樣本乙肝五項(xiàng)，比較兩者對(duì)乙肝的確診結(jié)果有無(wú)異同以及兩者檢出率是否有差別。結(jié)果 酶免疫法大三陽(yáng)檢出率為100%(41/41)，小三陽(yáng)檢出率為97.29%(36/37)，較金標(biāo)免疫法的100%(41/41)，89.18%(33/37)效果好。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。結(jié)論 酶免疫法和金標(biāo)免疫法對(duì)乙肝五項(xiàng)檢測(cè)的結(jié)果具有一致性，且酶免疫法較金標(biāo)免疫法檢測(cè)靈敏度高。兩者檢測(cè)結(jié)果理想，值得臨床推薦。

乙肝五項(xiàng)檢測(cè)；酶免疫法；金標(biāo)免疫法；應(yīng)用研究

現(xiàn)今乙型病毒性肝炎已經(jīng)成為全世界范圍內(nèi)流行的疾病，是全世界感染人數(shù)最多的慢性傳染性疾病[1]，然而這種疾病并沒(méi)有得到及時(shí)有效的控制，很多乙肝患者發(fā)展為肝硬化，甚至威脅生命。為此，我們提出用酶免疫法和金標(biāo)免疫法[2]對(duì)乙肝HBsAg(乙肝病毒表面抗原)、HBsAb(乙肝病毒表面抗體)、HBeAg(乙肝病毒e抗原)、HBeAb(乙肝病毒e抗體)、HBcAb(乙肝病毒核心抗體)五項(xiàng)內(nèi)容(俗稱(chēng)“乙肝兩對(duì)半”)進(jìn)行檢測(cè)[1]，檢驗(yàn)其一致性及靈敏度，并得到一些有意義的結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)抽取2012年6月至2015年6月的患者血樣150例，乙肝陽(yáng)性102例，陰性48例。其中男性80例，乙肝陰性28例，HBsAg，HBeAg，HBcAb三項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性(大三陽(yáng))20例，HBsAg，HBeAb，HBcAb三項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性(小三陽(yáng))18例，其他14例，年齡在30到49歲之間，平均年齡為39.1±2.7歲，女性70例，乙肝陰性20例，HBsAg，HBeAg，HBcAb三項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性(大三陽(yáng))21例，HBsAg，HBeAb，HBcAb三項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性(小三陽(yáng))19例，其他10例，年齡在31到50歲之間，平均年齡為38.8±3.9歲[2]。臨床資料符合實(shí)驗(yàn)因素外其他非實(shí)驗(yàn)因素基本相同，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。具有可比性。

1.2 研究方法 靜脈采血于真空促凝試管中，在37℃的溫度下靜置，待凝固后離心完全分離血清，在兩小時(shí)內(nèi)分別采取酶免疫法和金標(biāo)免疫法兩種方法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)。采用酶標(biāo)儀以450/630nm雙波長(zhǎng)比色，以S/CO值判定ELISA檢測(cè)結(jié)果.。金標(biāo)法嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)滴加標(biāo)本和緩沖液，在15分鐘內(nèi)判定結(jié)果。兩種檢測(cè)方法的步驟嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)定進(jìn)行。密切注意實(shí)驗(yàn)過(guò)程，及時(shí)將檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和各項(xiàng)數(shù)據(jù)記錄在表格中。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析，比較兩種檢測(cè)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的確定是否具有一致性及其敏感度的比較。

1.3 儀器與試劑 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀：深圳凱特KC-100，自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)：優(yōu)利特URIT-670。濰坊三維生物工程集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的乙型肝炎病毒診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)，艾博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的金標(biāo)快速檢測(cè)板。一次性使用靜脈血采集容器(促凝管)。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) “優(yōu)”為陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果高于90%，“良”為陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果在80%到90%之間，“可”為陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果在50%到80%之間，“差”為陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果低于50%[3]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以SPSS13.0軟件分析。數(shù)據(jù)比較以x2檢驗(yàn)。計(jì)量數(shù)據(jù)以t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組效果對(duì)比 酶免疫法大三陽(yáng)檢出率為100%(41/41)，小三陽(yáng)檢出率為97.29%(36/37)，較金標(biāo)免疫法的100%(41/41)，89.18%(33/37)效果好。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。但兩種方法對(duì)大三陽(yáng)和小三陽(yáng)的檢測(cè)率均在90%左右，且大三陽(yáng)均完全檢出，因此提示酶免疫法和金標(biāo)免疫法在乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)中具有高度一致性。見(jiàn)表1

表1 兩組效果對(duì)比(例，%)

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05

2.2 兩種檢測(cè)方法敏感度和特異度對(duì)比 通過(guò)對(duì)乙肝兩對(duì)半的敏感度和特異度的實(shí)驗(yàn)對(duì)比，得出酶免疫法的敏感度為97.2%，特異度為96.5%，均高于金標(biāo)免疫法的敏感度96.9%，特異度88.9%，計(jì)算x2值，得到P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示兩種方法相比較，酶免疫法對(duì)乙肝兩五項(xiàng)的檢出率要更高。詳見(jiàn)下表2

表2 兩種檢測(cè)方法敏感度和特異度對(duì)比

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05

3 討論

目前，我國(guó)是世界上感染乙型肝炎病毒人數(shù)最多的國(guó)家，乙肝病毒傳播途徑以母嬰傳播為垂直傳播，以血液傳播和性傳播為平行傳播，傳播范圍廣，速度快，嚴(yán)重威脅我國(guó)人民的健康水平，對(duì)患病家庭造成經(jīng)濟(jì)、心理等各方面影響[3]。積極探索科學(xué)方法，找到迅速有效的治療和預(yù)防措施顯得刻不容緩。為此，我院采用酶免疫法和金標(biāo)免疫法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)指標(biāo)，探究?jī)煞N方法檢測(cè)率及其敏感度差異，旨在指導(dǎo)臨床運(yùn)用，并取得了一些結(jié)論。究其主要原因，酶免疫法為雙抗體夾心法，原理是形成抗原-抗體復(fù)合物，然后通過(guò)顯色來(lái)診斷鑒別，其形成的復(fù)合物穩(wěn)定性高，不易分離，因此具有較高的靈敏度(0.5ng/ml)。在ELISA檢測(cè)中需強(qiáng)調(diào)注意：血清分離必須徹底，避免纖維蛋白吸附導(dǎo)致結(jié)果假陽(yáng)性；標(biāo)本不可溶血，否則血紅蛋白殘留也會(huì)致結(jié)果假陽(yáng)性；操作必須規(guī)范，滴加樣本和試劑要垂直，保證加入量的準(zhǔn)確性；試劑盒在使用前應(yīng)先從冰箱取出放置37℃恒溫30分鐘方可使用，滴加時(shí)需搖勻試劑，棄去2滴后再加入；溫育時(shí)要封板，時(shí)間要準(zhǔn)確，以防影響結(jié)果的判定；洗板步驟非常重要，要先檢查洗板機(jī)，確保管道通暢，足量清洗液洗板5次洗完后要拍干ELISA板；在滴加終止液后10分鐘內(nèi)要在酶標(biāo)儀上比色讀取結(jié)果，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可致假陽(yáng)性。金標(biāo)免疫法是以膠體金作為免疫示蹤物檢測(cè)患者血清中抗原抗體，但由于需要較高濃度的免疫示蹤物，所以其靈敏度(5ng/ml)在一定程度上受到限制，這也是該方法稍差于酶免疫法的主要原因。

本文通過(guò)對(duì)酶免疫法和金標(biāo)免疫法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，酶免疫法大三陽(yáng)檢出率為100%(41/41)，小三陽(yáng)檢出率為97.29%(36/37)，較金標(biāo)免疫法的100%(41/41)，89.18%(33/37)效果好。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。因此提示酶免疫法和金標(biāo)免疫法在乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)中具有高度一致性。但兩種方法對(duì)大三陽(yáng)和小三陽(yáng)的檢測(cè)率均在90%左右，且大三陽(yáng)均完全檢出，因此提示酶免疫法和金標(biāo)免疫法在乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)中具有高度一致性，均能有效檢測(cè)出陽(yáng)性患者，符合張曉春等人的報(bào)道結(jié)果[4]。此外，通過(guò)對(duì)乙肝五項(xiàng)的敏感度和特異度的實(shí)驗(yàn)對(duì)比，得出酶免疫法的敏感度為97.2%，特異度為96.5%，均高于金標(biāo)免疫法的敏感度96.9%，特異度88.9%，說(shuō)明酶免疫法比金標(biāo)免疫法的敏感程度更高。有報(bào)道表明[5]，酶免疫法靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，可用于乙型肝炎的明確診斷；金標(biāo)免疫法由于顯示出與酶免疫法密切的相關(guān)性，亦能較準(zhǔn)確檢測(cè)乙肝表面抗原，且該方法簡(jiǎn)單易行，大多數(shù)可以肉眼觀察到實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，操作快捷，因此一定程度上也可以指導(dǎo)臨床研究備。

綜上所訴，酶免疫法和金標(biāo)免疫法都可以應(yīng)用于乙肝五項(xiàng)檢測(cè)中，且酶免疫法效果優(yōu)于金標(biāo)免疫法，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，值得臨床推薦，但操作過(guò)程繁瑣，影響因素較多，適合批量檢測(cè)。金標(biāo)法快速簡(jiǎn)便，可立即出結(jié)果，無(wú)需儀器設(shè)診，適合急診。臨床可以根據(jù)工作需要進(jìn)行選用。

[1] 李家明. 慢性乙型病毒性肝炎患者的臨床五項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果分析[J]. 中外醫(yī)學(xué)研究,2014,34(2):66-67.

[2]云春鳳,陳競(jìng),楊春，等. 酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)25-羥基維生素D的一致性[J]. 衛(wèi)生研究,2015,03(4):435-439.

[3]倪紅霞. 乙肝病毒母嬰傳播的病毒變異規(guī)律與乙肝疫苗免疫保護(hù)效果研究[D].第二軍醫(yī)大學(xué),2013，28(7):77-81

[4]張曉春,陸燕蓉. 標(biāo)記免疫技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,1999,02(8):64-67.

[5]胡麗華. 乙肝兩對(duì)半測(cè)試卡快速檢測(cè)血清乙肝三系應(yīng)用及評(píng)價(jià)[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2001,12(7):1433.

10.3969/j.issn.2095-9559.2017.02.020

2095—9559(2017)02—2926—02

2016-08-03