蒲 磊, 楊 智, 于 霞,2, 江 蔓, 王鳳怡, 江 虹*

(1. 長(zhǎng)江師范學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院, 重慶 408100; 2. 重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所, 重慶 408000)

溴代十六烷基吡啶增敏共振瑞利散射法測(cè)定藥物中的維生素B1含量

蒲 磊1, 楊 智1, 于 霞1,2, 江 蔓1, 王鳳怡1, 江 虹1*

(1. 長(zhǎng)江師范學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院, 重慶 408100; 2. 重慶市涪陵食品藥品檢驗(yàn)所, 重慶 408000)

在pH 6.38的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖溶液和溴代十六烷基吡啶存在下,維生素B1與氯酚紅結(jié)合生成的締合物使共振瑞利散射顯著增強(qiáng)并產(chǎn)生新的共振瑞利散射光譜,最大共振瑞利散射峰位于339 nm處,維生素B1的質(zhì)量濃度在0.03～0.42 mg·L-1內(nèi)與其對(duì)應(yīng)的共振瑞利散射增強(qiáng)程度(ΔIRRS)呈線性關(guān)系,檢出限(3s/k)為0.004 2 mg·L-1。據(jù)此提出了溴代十六烷基吡啶增敏共振瑞利散射法測(cè)定藥物中的維生素B1的方法。應(yīng)用此方法分析了維生素B1藥物,加標(biāo)回收率在99.2%～102%之間,測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)在2.1%～2.5%之間。

共振瑞利散射法; 維生素B1; 藥物; 溴代十六烷基吡啶

維生素B1是由嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)結(jié)合而成的一種B族維生素,具有保護(hù)人體神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)等的作用。目前,測(cè)定維生素B1的方法主要有高效液相色譜法[1-2]、熒光光譜法[3-4]、分光光度法[5]、化學(xué)發(fā)光法[6]和電化學(xué)法[7]等。高效液相色譜法所用儀器較貴,前處理麻煩,不能滿足快速檢測(cè)的需要。其他方法存在選擇性差、靈敏度低或條件苛刻等問題。本工作在弱酸性條件下,利用陽(yáng)離子表面活性劑溴代十六烷基吡啶增敏氯酚紅(CPR),采用共振瑞利散射(RRS)技術(shù)測(cè)定藥物中維生素B1的含量。方法用于藥物中維生素B1的測(cè)定,結(jié)果滿意。

1 試驗(yàn)部分

1．1 儀器與試劑

日立F-2500型熒光分光光度計(jì);pHS-3C型精密酸度計(jì)。

維生素B1(VB1)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:30.08 mg·L-1,稱取VB1標(biāo)準(zhǔn)品適量,用0.010 mol·L-1鹽酸溶液溶解并定容至100 mL,于4 ℃冰箱保存。使用時(shí)用水稀釋配制成3.008 mg·L-1維生素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液。

氯酚紅溶液:1.0×10-4mol·L-1,稱取適量氯酚紅,用少量乙醇溶解后,用水稀釋配制而成。

溴代十六烷基吡啶(TPB)溶液:400 mg·L-1,稱取適量TPB,用適量無水乙醇溶解后,用水稀釋配制而成。

pH 3.0～9.5的三羥甲基氨基甲烷(Tris)-鹽酸緩沖溶液:將適量的0.10 mol·L-1鹽酸溶液和0.20 mol·L-1Tris溶液混合,用酸度計(jì)測(cè)定,配成不同pH的溶液。

所用試劑均為分析純,試驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

1．2 試驗(yàn)方法

于具塞比色管中,加入適量的3.008 mg·L-1VB1標(biāo)準(zhǔn)溶液,再依次加入1.0×10-4mol·L-1CPR溶液2.5 mL,pH 6.38的Tris-鹽酸緩沖溶液1.0 mL及400 mg·L-1TPB溶液0.10 mL,用水稀釋至10 mL,搖勻。放置10 min后,在熒光分光光度計(jì)上,設(shè)測(cè)定狹縫10 nm,激發(fā)波長(zhǎng)(λex)=發(fā)射波長(zhǎng)(λem)=220 nm,掃描RRS光譜,記錄最大共振散射波長(zhǎng)處體系的RRS強(qiáng)度(IRRS)和試劑空白的RRS強(qiáng)度(I0),計(jì)算共振瑞利散射增強(qiáng)程度(ΔIRRS),ΔIRRS=IRRS-I0。

2 結(jié)果與討論

2．1 VB1-CPR-TPB的RRS光譜

RRS光譜圖見圖1。

1-0.301 mg·L-1 VB1溶液;2-2.5×10-5mol·L-1 CPR溶液;3-2.5×10-5mol·L-1 CPR(pH 6.38)溶液;4-0.301 mg·L-1 VB1-2.5×10-5mol·L-1 CPR(pH 6.38)混合液;5～9-VB1-2.5×10-5mol·L-1 CPR-4.0 mg·L-1 TPB(pH 6.38)混合液,其中VB1的質(zhì)量濃度依次為0,0.060 2,0.181,0.301,0.421 mg·L-1圖1 VB1-CPR-TPB的RRS光譜Fig. 1 RRS spectra of VB1-CPR-TPB

由圖1可知:VB1溶液自身的RRS十分微弱(曲線1),CPR溶液有較強(qiáng)的RRS強(qiáng)度(曲線2);當(dāng)在CPR的酸性溶液中加入VB1溶液后,酸性染料CPR與質(zhì)子化的VB1以靜電引力結(jié)合生成二元離子締合物,但靈敏度仍很低(曲線3～4)。如果在CPR的酸性溶液中加入陽(yáng)離子表面活性劑TPB后,溶液的RRS顯著增強(qiáng)(曲線5);若在曲線5溶液的基礎(chǔ)上加入VB1溶液,則CPR與TPB及VB1反應(yīng)生成三元締合物,最大共振瑞利散射峰位于339 nm處,VB1溶液的質(zhì)量濃度在一定范圍內(nèi)與產(chǎn)物的共振瑞利散射強(qiáng)度呈線性關(guān)系(曲線6～9)。故本方法可用于VB1的定量分析。

可能的反應(yīng)機(jī)理:CPR分子上的2個(gè)酚基氫可離解,使自身帶2個(gè)單位負(fù)電荷,TPB在水溶液中可離解出Br-,使自身帶1個(gè)單位正電荷。CPR與TPB結(jié)合生成帶負(fù)電荷的締合顆粒,進(jìn)而與質(zhì)子化的VB1作用生成三元締合物,其體積及摩爾質(zhì)量顯著增大,故體系的共振瑞利散射強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。

2．2 試驗(yàn)條件的選擇

2．2．1 溶液酸度

試驗(yàn)考察了Tris-鹽酸緩沖溶液在不同pH時(shí)對(duì)體系ΔIRRS的影響。結(jié)果表明:適宜pH范圍為4.8～6.6;當(dāng)pH小于4.8或大于6.6時(shí),體系的ΔIRRS均有不同程度的下降。試驗(yàn)選用pH 6.38的Tris-鹽酸緩沖溶液,用量為1.0 mL。

2．2．2 CPR溶液的濃度

試驗(yàn)考察了不同濃度的CPR溶液對(duì)體系ΔIRRS的影響。結(jié)果表明:CPR溶液的濃度為2.5×10-5mol·L-1時(shí),體系的ΔIRRS較大。試驗(yàn)選用1.0×10-4mol·L-1CPR溶液,用量為2.5 mL。

2．2．3 表面活性劑

試驗(yàn)考察了多種陽(yáng)離子表面活性劑、陰離子表面活性劑及非離子表面活性劑對(duì)體系靈敏度的影響。結(jié)果表明:只有陽(yáng)離子表面活性劑TPB有較好的增敏性。試驗(yàn)選用400 mg·L-1TPB溶液,用量為0.10 mL。

2．2．4 試劑加入順序

試驗(yàn)考察了1.2節(jié)中各試劑溶液在不同加入順序時(shí)對(duì)體系靈敏度的影響。結(jié)果表明:按試驗(yàn)方法的加入順序?yàn)樽罴选?/p>

2．2．5 反應(yīng)時(shí)間

試驗(yàn)考察了室溫下最大散射波長(zhǎng)處反應(yīng)時(shí)間不同時(shí)對(duì)體系靈敏度的影響。結(jié)果表明:反應(yīng)在10 min內(nèi)即可完全,產(chǎn)物的ΔIRRS至少可穩(wěn)定1 h。試驗(yàn)選擇放置10 min后測(cè)定。

2．3 干擾試驗(yàn)

試驗(yàn)考察了部分常見物質(zhì)對(duì)0.301 mg·L-1VB1標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定的影響。結(jié)果表明,當(dāng)相對(duì)誤差不大于±5%時(shí),以下物質(zhì)不干擾測(cè)定:200倍的葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、L-色氨酸、甘氨酸、L-組氨酸、DL-蘋果酸、K+、Na+、NO3-、CO32-、Cl-、I-,100倍的L-賴氨酸、L-亮氨酸、氨基乙酸、尿素、Fe2+、S2O32-、S2-,50倍的抗壞血酸、Zn2+、Cu2+、NH4+、SO42-,30倍的Pb2+、Ba2+、Sr2+、Mg2+、Ca2+、Al3+、Fe3+、Br-?？梢?方法有較高的選擇性。

2．4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

按試驗(yàn)方法掃描VB1標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的RRS光譜,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明:VB1的質(zhì)量濃度在0.03～0.42 mg·L-1內(nèi)與其對(duì)應(yīng)的ΔIRRS呈線性關(guān)系,線性回歸方程為ΔIRRS=3 923ρ-31.24,相關(guān)系數(shù)為0.999 4,方法的檢出限(3s/k)為0.004 2 mg·L-1。

2．5 樣品分析

取維生素B1藥片(標(biāo)示量10 mg·片-1) 5粒,用0.010 mol·L-1鹽酸溶液溶解并定容至1 L,搖勻后,靜置,移取清液2.0 mL于100 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,即為待測(cè)液。取維生素B1注射液(標(biāo)示量100 mg·支-1) 1支,將內(nèi)容物置于1 L容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻。取該溶液1.0 mL于100 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,即為待測(cè)液。分別取藥片和注射液待測(cè)液各2.0 mL,按試驗(yàn)方法平行測(cè)定6份,并做加標(biāo)回收試驗(yàn),結(jié)果見表1。

表1 樣品分析結(jié)果(n=6)Tab. 1 Analytical results of samples

本工作建立了TPB增敏CPR測(cè)定VB1的共振瑞利散射法,簡(jiǎn)便、快速、有很高的靈敏度和良好的選擇性,準(zhǔn)確度和精密度均能滿足微量分析的要求,方法可用于維生素B1生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制。

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Determination of Vitamin B1in Pharmaceuticals by Resonance Rayleigh Scattering with Hexadecylpyridinium Bromide as Sensitizer

PU Lei1, YANG Zhi1, YU Xia1,2, JIANG Man1, WANG Feng-yi1, JIANG Hong1*

(1.CollegeofChemistryandChemicalEngineering,YangtzeNormalUniversity,Chongqing408100,China;2.ChongqingFulingforFoodandDrugControl,Chongqing408000,China)

In Tris-HCl buffer solution of pH 6.38 and in the presence of hexadecylpyridinium bromide,vitamin B1reacts with chlorophenol red to form a new complex, leading to a significant enhancement of resonance Rayleigh scattering, and giving a new resonance Rayleigh scattering spectrum. The resonance Rayleigh scattering peak was found to locate at 339 nm. Linear relationship between values of resonance Rayleigh scattering intensity (ΔIRRS) and mass concentration of vitamin B1was kept in the range of 0.03-0.42 mg·L-1, with detection limit (3s/k) of 0.004 2 mg·L-1. Based on these facts, resonance Rayleigh scattering method for determination of vitamin B1in pharmaceuticals with hexadecylpyridinium bromide as sensitizer was proposed. The proposed method was applied to the analysis of vitamin B1pharmaceuticals, giving values of recovery and RSD′s (n=6) in the ranges of 99.2%-102% and 2.1%-2.5% respectively.

Resonance Rayleigh scattering; Vitamin B1; Pharmaceuticals; Hexadecylpyridinium bromide

10.11973/lhjy-hx201702007

2016-02-28

重慶市教委科技基金資助項(xiàng)目(KJ1401226);長(zhǎng)江師 范學(xué)院科技基金資助項(xiàng)目(2016CXX092)

蒲 磊(1995-),男,重慶萬州人,本科生,研究方向 為分子光譜分析。

* 通信聯(lián)系人。E-mail:jianghongch@163.com

O657.32

A

1001-4020(2017)02-0157-03