王亞麗 沙拉麥提·艾力

(新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，新疆 烏魯木齊 830004)

通滯埃提勒菲力沙那片是由番瀉葉、余甘子、西青果、訶子肉、毛訶子肉等5味藥材組成，具有開(kāi)通阻滯，通便止痛的功效。用于熱性頭痛、便秘、瘙癢及關(guān)節(jié)疼痛等。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法測(cè)定通滯埃提勒菲力沙那片中番瀉苷A、番瀉苷B的含量，可用于該制劑的測(cè)定[1-4]。

1 儀器與試藥

美國(guó)Thermo U3000型高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器；CPA 225D型電子分析天平(德國(guó)sartorius公司)，Mettler MS 204S電子分析天平(德國(guó)梅特勒公司)；中草藥粉碎機(jī)(德國(guó)IKA)；KLZ-UP超純水儀(臺(tái)灣艾柯成都康寧實(shí)驗(yàn)專用純水設(shè)備廠)；KUDOS SK7210LHC型超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

番瀉苷A對(duì)照品(批號(hào)：110824-201301，純度：94.7%)；番瀉苷B對(duì)照品(批號(hào)：110825-201301，純度：94.9%)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。乙腈(色譜純)購(gòu)自fisher公司，四庚基溴化銨(分析純，批號(hào)：224-458-3)購(gòu)自東京化成工業(yè)株式會(huì)社；水為超純水，其他試劑均為分析純。

通滯埃提勒菲力沙那片(批號(hào)：140929、140928、YF1503001)由新疆維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：色譜柱為Thermo AcclaimTM120-C18(4.6mm×250mm 5μm)；以乙腈-5mmol·L-1四庚基溴化銨的乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH5.0)(1→10)[注](37：63)(緩沖液1000mL加入四庚基溴化銨2.45g)為流動(dòng)相；流速為1.0mL·min-1，柱溫為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為340nm，進(jìn)樣量：各10μL。理論塔板數(shù)按番瀉苷B峰計(jì)算應(yīng)不低于6500。

[注]1、1mol/L乙酸-乙酸鈉(pH5.0)緩沖液的制備：取1mol/L乙酸鈉溶液，用稀乙酸試液調(diào)制成pH為5.0的溶液，再稀釋10倍，即得。2、以上緩沖液與乙腈按比例混合后，再加四庚基溴化銨2.45g使溶解，過(guò)濾后即得流動(dòng)相。

2.2 對(duì)照品溶液的制備：取番瀉苷A、番瀉苷B對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加0.1%NaHCO3溶液制成每1mL含番瀉苷A、番瀉苷B各50μg的混合溶液，搖勻，即得。見(jiàn)圖1。

2.3 供試品溶液制備： 取本品20片，去除薄膜衣，精密稱定。研細(xì)，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入0.1%NaHCO3溶液50mL，稱定重量，超聲處理(功率350W,頻率59kHz)15min(30～40℃)，放冷，再稱定重量，用0.1%NaHCO3溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，即得。

2.4 線性關(guān)系考察： 精密稱取番瀉苷A對(duì)照品適量，加0.1%NaHCO3溶液適量溶解，搖勻，制成每mL含番瀉苷A 1.792μg、14.3μg、44.8μg、89.6μg、179.2μg；番瀉苷B1.883μg、18.83μg、47.08μg、94.2μg、188.3μg的系列濃度對(duì)照品溶液，分別進(jìn)10μL，按“2.1”項(xiàng)測(cè)定，以進(jìn)樣量(X，μg)濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，番瀉苷A為Y=6.2403X+0.3995，r2=0.9999；番瀉苷A在1.792μg～179.2μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。番瀉苷B為Y=0.1499X-0.0124，r2=1.0000；番瀉苷B在1.883μg～188.3μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液10μL，按“2.1”項(xiàng)連續(xù)進(jìn)樣6次測(cè)定峰面積，結(jié)果番瀉苷A峰面積的RSD為0.295%，番瀉苷B峰面積的RSD為0.731%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取通滯埃提勒菲力沙那片(批號(hào)：YF1503001)，按“2.3”項(xiàng)制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件，分別于0,2,4,6,8,12,24h測(cè)定，結(jié)果番瀉苷A峰面積RSD為1.159%，番瀉苷B峰面積RSD為11.04%，結(jié)果表明番瀉苷A在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好，但番瀉苷B相對(duì)不穩(wěn)定，需及時(shí)測(cè)定提取后的樣品。

表1 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)：取通滯埃提勒菲力沙那片(批號(hào)：YF1503001)，按“2.3”項(xiàng)制備方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件，測(cè)定樣品中番瀉苷A、番瀉苷B含量，結(jié)果平均含量番瀉苷A為2.1028mg·g-1(RSD=1.78%)；番瀉苷B為3.0933mg·g-1(RSD=1.26%)，表明方法的重復(fù)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)：取通滯埃提勒菲力沙那片(批號(hào)YF1503001)研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共9份，分別精密加入混合對(duì)照品溶液(含番瀉苷A對(duì)照品0.2235 mg·mL-1、番瀉苷B對(duì)照品0.3094mg·mL-1) 4mL、5mL、6mL，補(bǔ)足溶劑，按“2.3”項(xiàng)制備，按“2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，計(jì)算回收率。番瀉苷A平均回收率為96.3%，RSD為1.78%；番瀉苷B平均回收率為105.2%，RSD為2.06%。表明該方法準(zhǔn)確度較好。

3 樣品的測(cè)定

取通滯埃提勒菲力沙那片，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2.

4 討論

4.1 超聲溫度對(duì)樣品提取的關(guān)鍵作用；樣品提取過(guò)程中，超聲溫度的升高或者降低具有較為明顯的影響作用，在溫度為(30～40℃)時(shí)番瀉苷A與B的峰面積最大，超聲時(shí)以35℃設(shè)定溫度最佳。

4.2 流動(dòng)相配制：需將乙腈與緩沖液混合后再加入四庚基溴化銨，四庚基溴化銨為離子對(duì)色譜試劑，不溶于水，所以在配置5mmol·L-1四庚基溴化銨的乙酸-乙酸鈉緩沖液(pH5.0)(1→10)時(shí)，表現(xiàn)為渾濁狀態(tài)，但在加入乙腈后四庚基溴化銨迅速溶解。另外，四庚基溴化銨只加入1次，即為2.45g。

4.3 進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)番瀉苷B的穩(wěn)定性較差，提取2h后峰面積下降原來(lái)的4.0%，查閱文獻(xiàn)，多有提到番瀉苷類成分不穩(wěn)定，因此樣品提取后需及時(shí)上機(jī)進(jìn)樣。因此，在進(jìn)行重復(fù)性及回收率試驗(yàn)時(shí)，分批提取和測(cè)定，以降低因穩(wěn)定性差帶來(lái)的影響。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典一部[S].2010.326.

[2] 王童,劉娜娜.HPLC法測(cè)定番瀉葉中番瀉苷A、番瀉苷B含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2014.08：32-33.

[3] 曹秀榮,向陽(yáng),馮井慶,等.HPLC法測(cè)定通滯蘇潤(rùn)江膠囊中番瀉苷A、B的含量[J].中國(guó)藥師,2014, 1311-1313.

[4] 黃娟,張靜,徐文,等.番瀉葉提取液中番瀉苷A、番瀉苷B的穩(wěn)定性考察[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2014.05, 34(10)794-797.