李琴琴，趙英虎，高莉，侯倩倩，王芳，賈萬利，王英勇

?

納米銀對小麥赤霉病菌的抑制

李琴琴1，趙英虎1，高莉1，侯倩倩1，王芳1，賈萬利1，王英勇2

1 中北大學(xué)化工與環(huán)境學(xué)院，山西太原 030051 2 中國科學(xué)院山西煤炭化學(xué)研究所煤轉(zhuǎn)化國家重點實驗室，山西太原 030001

采用化學(xué)還原法制備納米銀，以小麥赤霉病菌為受試菌株，研究納米銀對小麥赤霉病菌抗菌活性、對細(xì)胞內(nèi)3種保護(hù)酶：超氧化物歧化酶 (SOD)、過氧化物酶 (POD)、過氧化氫酶 (CAT) 活性和對細(xì)胞滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)：丙二醛 (MDA)、可溶性蛋白、可溶性糖含量的影響。結(jié)果表明：納米銀能顯著抑制小麥赤霉病菌的生長，抑制作用隨著濃度的增加而不斷增大，10μg/mL的納米銀對病原菌的抑制率達(dá)90%以上，有效中濃度 (50) 為0.59 μg/mL。隨著納米銀處理時間 (2、4、6、8和10 h) 的增長，3種酶的活性均出現(xiàn)先增加后降低的變化。SOD、POD和CAT均在4 h出現(xiàn)最高值，10 h降至最低。納米銀使得菌體內(nèi)丙二醛含量增加，可溶性蛋白和可溶性糖含量降低。納米銀破壞了病原真菌體內(nèi)細(xì)胞的完整性，這可能是納米銀抑制病原菌生長的機(jī)理之一。

納米銀，小麥赤霉病菌，抗真菌活性，抑菌機(jī)理

小麥赤霉病，是由禾谷鐮孢菌引起的病害，主要發(fā)生在亞洲地區(qū)，是小麥生產(chǎn)的重要病害之一[1-2]。小麥感染赤霉病后，會產(chǎn)生單端孢霉烯真菌毒素，從而導(dǎo)致小麥減產(chǎn)以及品質(zhì)下降，不適合人類和動物的食用[3-4]。中國作為世界小麥生產(chǎn)大國，小麥赤霉病發(fā)生頻率非常高，受小麥赤霉病的影響也很大[5]。納米銀是一種無機(jī)抗菌材料，有研究表明，納米銀對細(xì)菌、真菌及支原體等致病微生物的生長具有抑制作用，對某些病毒和原生動物也具有很強(qiáng)的殺傷力，同時不產(chǎn)生耐藥性，可以作為一種長效且安全性高的抑菌劑[6-9]。Mishra和Singh[10]研究了納米銀對小麥根腐病菌的抗真菌活性，結(jié)果表明納米銀能顯著抑制的菌絲生長。0.05 mg/mL的納米銀能明顯抑制菌絲生長，0.1 mg/mL的納米銀能完全抑制病原體。Muthuramalingam等[11]研究了膽汁鹽修飾的納米銀對炭疽病有很好的抑制效果。此外，納米銀還能夠抑制黃瓜和南瓜白粉病 菌[12]、番茄丁香假單胞菌[13]、草莓灰霉病菌[14]、黑曲霉、溫特曲霉[15]等病原菌。盡管大量的實驗表明，納米銀對細(xì)菌和真菌均具有顯著的抑制作用，但是納米銀對真菌具體的殺菌過程及機(jī)理還不是十分清楚。

生物體內(nèi)3種重要的保護(hù)酶：超氧化物歧化酶 (SOD)、過氧化氫酶 (CAT) 和過氧化物酶 (POD)，可以防止體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生，清除超氧自由基、H2O2和過氧化物以及降低或抵制羥基自由基的生成等[16-18]。尹大川等[19]研究了木霉菌株T43及其抑菌活性物質(zhì)對4種林木病原菌的3種保護(hù)酶 (CAT、POD、SOD) 活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，菌株T43發(fā)酵液乙酸乙酯提取物對病原菌3種保護(hù)酶活性均有不同程度的影響，可導(dǎo)致病原菌3種保護(hù)酶活性降低，尤其是SOD活性下降得最為顯著，從而破壞了細(xì)胞的完整性。

可溶性蛋白和可溶性糖作為肌體內(nèi)的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)，當(dāng)肌體受到外界壓迫時，能夠降低這種傷害。研究表明，可溶性蛋白和可溶性糖的變化可以反映細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成、變性及降解等[19]。丙二醛 (MDA) 含量變化可以反映膜結(jié)構(gòu)的破壞程度，是反映細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化程度的重要指標(biāo)[16]。

因此，本試驗利用化學(xué)還原法制備納米銀，研究納米銀對小麥赤霉病菌的抗菌活性以及對菌體內(nèi)SOD、POD、CAT三種酶活性和對丙二醛、可溶性蛋白、可溶性糖含量的影響，以此來探討納米銀的抑菌機(jī)理，為納米銀抑菌應(yīng)用提供理論依據(jù)，為解決病原真菌入侵性感染和防治植物真菌病害提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試菌株：小麥赤霉病菌，由中北大學(xué)微生物實驗室提供。

1.2 納米銀的制備

首先將10 mL、0.02 mol/L硝酸銀 (AgNO3) 溶液和10 mL、3%聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 溶液混合，然后將該混合液攪拌2 h (室溫)，最后在攪拌的同時，逐滴滴加10 mL、0.01%硼氫化鈉 (NaBH4) 溶液，制備納米銀溶膠。納米銀溶膠經(jīng)過離心、去離子水和無水乙醇洗滌數(shù)遍、真空干燥得到納米銀粉末。在NaBH4溶液的滴加過程中，反應(yīng)溶液逐漸變?yōu)榱咙S色，說明納米銀的形成[20]。采用紫外可見分光光度計表征納米銀溶液的UV-vis吸收光譜，進(jìn)一步利用透射電子顯微鏡 (TEM) 表征納米銀的粒徑。

1.3 納米銀的抗菌活性

利用生長速率法[21]測定納米銀的抑菌活性。具體方法如下：用馬鈴薯葡萄糖(PDA)培養(yǎng)基將納米銀稀釋成終濃度為10、5、2.5、1.25 μg/mL。取培養(yǎng)5 d的5 mm直徑的菌餅，將其輕放于含上述已配制好的不同濃度納米銀的培養(yǎng)基平板中 (有菌絲的一面朝下)。以不添加任何物質(zhì)的PDA平板作為空白對照，放入28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每個處理重復(fù)3次。3 d后用十字交叉法測量病原菌的直徑，計算菌絲生長抑制率、納米銀濃度的毒力回歸方程以及50。

1.4 供試菌的處理

用打孔器取培養(yǎng)5 d、直徑5 mm的菌餅，接種到PDA液體培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)8 d，將菌絲體用蒸餾水洗滌3次，用吸水紙吸干，準(zhǔn)確稱取菌絲0.5 g，分別放入20 mL、10 μg/mL納米銀溶液浸泡2、4、6、8、10 h，過濾菌絲體，用蒸餾水洗滌3次[22]。實驗重復(fù)3次，測定納米銀對小麥赤霉病菌保護(hù)酶活性、MDA含量、可溶性蛋白含量和可溶性糖含量的影響，其中用DDS-11A型電導(dǎo)儀測定電導(dǎo)率，實驗以蒸餾水作為對照。

1.5 酶活性測定

SOD酶液制備：往已處理過的菌絲體中加入5 mL、0.05 mol/L磷酸緩沖液 (pH 7.8，含有1% PVP，0.5 mmol/L巰基乙醇和0.1 mmol/LEDTA)，冰浴研磨，于4 ℃、10 000 r/min冷凍離心15 min，得到上清液，置于4 ℃冰箱保存。SOD酶活性采用氮藍(lán)四唑法[23]測定。

POD和CAT酶液的制備：往已處理過的菌絲體中加入5 mL、0.05 mol/L的磷酸緩沖液 (pH 7.0，含0.1 mmol/LEDTA)，冰浴研磨，4 ℃、10 000 r/min冷凍離心15 min，得到上清液，置于4 ℃冰箱保存。POD酶活性利用愈創(chuàng)木酚法[23]測定。CAT酶活性采用紫外吸收法[24]測定。

1.6 丙二醛 (MDA) 含量的測定

采用硫代巴比妥酸比色法測定小麥赤霉病菌中MDA含量[23]。

1.7 可溶性蛋白含量的測定

可溶性蛋白提?。涸? g已處理過的菌絲體中加10 mL蒸餾水研磨，所得勻漿于12 000 r/min離心15 min，得上清液，定容至10 mL，得粗提液?？扇苄缘鞍缀坎捎每捡R斯亮藍(lán)G-250法測定[23]。

1.8 可溶性糖含量的測定

可溶性糖提取：在1 g已處理過的菌絲體中加入10 mL蒸餾水，沸水浴20 min，冷卻過濾定容至25 mL容量瓶中，得粗提液?？扇苄蕴呛坎捎幂焱壬y定[23]。

1.9 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 22.0和OriginProPorable 8.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 納米銀的制備與表征

利用化學(xué)還原法制備納米銀，納米銀溶液顏色呈亮黃色。納米銀在400 nm左右出現(xiàn)了很強(qiáng)的吸收峰 (圖1A)，這是典型的10?20 nm納米銀的紫外特征吸收峰[25-26]。進(jìn)一步通過TEM表征，納米銀為類似球形、粒徑為5?30 nm的顆粒 (圖1B)。

2.2 納米銀的抑菌活性

納米銀對小麥赤霉病菌的抑制效果見表1。結(jié)果表明，納米銀能抑制病原真菌的生長，抑制率隨著濃度的增加而增大。其中，10 μg/mL的納米銀對小麥赤霉病菌抑制率高達(dá)93.9%，說明病原真菌對納米銀的敏感性很強(qiáng)。對各處理間的不同濃度進(jìn)行方差分析和Duncan檢驗，結(jié)果表明，病原真菌的各處理間差異達(dá)到極顯著水平 (<0.01)。

納米銀對病原真菌的毒力回歸方程為=1.256+5.289 2，50為0.59 μg/mL，2為0.975 5?？梢?，納米銀對小麥赤霉病菌的抑制作用比較強(qiáng)。病原真菌的毒力回歸方程的相關(guān)系數(shù)2大于0.9，說明其曲線與實際擬合程度相當(dāng)好。

2.3 納米銀對菌體內(nèi)保護(hù)酶活性的影響

2.3.1 納米銀處理時間對超氧化物歧化酶 (SOD)活性的影響：隨著納米銀處理時間的延長，SOD酶活出現(xiàn)先升高后下降的變化趨勢。SOD酶活從2 h開始迅速上升，4 h的酶活達(dá)到最大，是對照組的5.20倍，隨著時間的推移，活性開始下降，10 h的酶活最低，為對照組的63.12% (圖2)。方差分析表明，SOD酶活性對納米銀相對敏感，隨著處理時間的不同，受納米銀的影響存在著顯著性差異。

圖1 納米銀粒子的UV-vis吸收光譜圖 (A) 及TEM圖 (B)

Values in each column with different lowercase letter are significantly different in inhibition rate (<0.05), values in each column with different capital letter are extremely significantly different in inhibition rate (<0.01).

圖2 納米銀處理時間對SOD活性的影響

2.3.2 納米銀處理時間對過氧化物酶 (POD) 活性的影響：POD對照組活性與SOD對照組表現(xiàn)出相似的變化情況，隨著處理時間的增加不斷升高。處理組的POD活性隨著時間的延長同樣呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢，在4 h達(dá)到最大值，為對照組的1.05倍，與SOD活性最高值出現(xiàn)在4 h相同，在10 h達(dá)到最小值，為對照組的14.85% (圖3)。2、4、6、8、10 h各處理組POD活性相比差異顯著。

2.3.3 納米銀處理時間對過氧化氫酶 (CAT) 活性的影響：對照組CAT酶活在試驗時間內(nèi)，呈上升趨勢，納米銀對小麥赤霉病菌的CAT酶活性出現(xiàn)先升高后下降的變化，與SOD、POD活性呈現(xiàn)出相似的變化趨勢，4 h的CAT酶活出現(xiàn)最大值，處理組的CAT活性一直低于對照組 (圖4)。與其他處理時間的活性相比差異顯著。

圖3 納米銀處理時間對POD活性的影響

圖4 納米銀處理時間對CAT活性的影響

2.4 納米銀對菌體內(nèi)MDA含量的影響

處理組MDA含量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，在6 h時，迅速上升至最高值1.40 nmol/g，為對照組的2.41倍，6 h后開始出現(xiàn)下降趨勢，10 h降至最低，為對照組的1.05倍。對照組在2?10 h，呈現(xiàn)平緩的上升趨勢，10 h出現(xiàn)最大值，但始終低于處理組 (圖5)。

圖5 納米銀處理時間對MDA含量的影響

2.5 納米銀對菌體內(nèi)電導(dǎo)率的影響

隨著處理時間的推移，納米銀處理后的小麥赤霉病菌溶液的導(dǎo)電率2?6 h之內(nèi)呈現(xiàn)上升趨勢，6 h出現(xiàn)最大值，為對照組的1.09倍，6 h之后，導(dǎo)電率開始下降，10 h出現(xiàn)最小值，為對照組的98.89%。細(xì)胞膜一旦受到破壞，膜透性就會增大，從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲。上述結(jié)果說明，經(jīng)納米銀處理后，小麥赤霉病菌的細(xì)胞膜受到破壞，隨著處理時間的增長，菌體膜的完整性喪失，電解質(zhì)出現(xiàn)外滲，電導(dǎo)率最終出現(xiàn)下降的現(xiàn)象 (圖6)。

2.6 納米銀對菌體內(nèi)可溶性蛋白含量的影響

納米銀處理組和對照組的可溶性蛋白含量均呈現(xiàn)降低的趨勢。處理組蛋白含量隨著時間的延長不斷降低，在10 h出現(xiàn)最低值，為1.27 mg/g，是對照組的56.69%。對照組蛋白含量在開始時也出現(xiàn)降低的情況，但始終高于處理組，且降低速率低于處理組 (圖7)。

2.7 納米銀對菌體內(nèi)可溶性糖含量的影響

納米銀各處理組和對照組的可溶性糖含量及可溶性蛋白含量呈現(xiàn)同樣的降低現(xiàn)象。處理組糖含量隨著時間的增加不斷降低，6 h到10 h下降緩慢，在10 h出現(xiàn)最低值，為0.40 mg/g，是對照組的92%。對照組在整個實驗過程中與處理組趨勢接近，但含量始終高于處理組 (圖8)。

圖6 納米銀處理時間對電導(dǎo)率含量的影響

圖7 納米銀處理時間對蛋白含量的影響

圖8 納米銀處理時間對糖含量的影響

3 討論

納米銀能顯著抑制小麥赤霉病菌的生長，50為0.59 μg/mL。納米銀的抑制作用與其濃度成正比，隨著濃度的增大而增大。10 μg/mL納米銀的抑菌率達(dá)到93.9%。Zhao等[27]合成了一種新型的10-Hydroxycanthin-6-one抗菌劑，表明其對小麥赤霉病菌有很強(qiáng)的抑制活性，50 μg/mL的10-Hydroxycanthin-6-one酯類衍生物7s (10-hydroxycanthin-6-one R=CH3CH3) 化合物能完全抑制病原菌的生長，10-meoxycanthin-6-one、10-Hydroxycanthin-6-one 酯類衍生物7s (10-Hydroxycanthin-6-one R=CH3) 和7t (10- Hydroxycanthin-6-one R=CH3CH2) 化合物的最小抑菌濃度在3.91 μg/mL到31.25 μg/mL之間。陸云等[28]研究了4種殺菌劑 (氟環(huán)唑、己唑醇、甲基硫菌靈和南寧霉素毒立) 對小麥赤霉病菌的抑制作用，發(fā)現(xiàn)氟環(huán)唑和己唑醇對病原真菌的抑制效果最好，其50分別是0.201 5 μg/mL和0.235 6 μg/mL；其次是甲基硫菌靈，50是5.115 7 μg/mL；南寧霉素毒力最弱，其50是389.313 24 μg/mL。因此，納米銀較一些殺菌劑有相當(dāng)或更好的抑菌效果，有望成為一種新型納米殺菌劑。

納米銀處理小麥赤霉病菌2?10 h，菌體內(nèi)SOD、POD和CAT的活性隨著處理時間的延長均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，在4 h達(dá)到最高值。結(jié)果表明，納米銀在抑菌過程中，影響了菌體內(nèi)3種酶的活性。原因可能是隨著脅迫程度的增強(qiáng)，氧自由基不斷積累，為了適應(yīng)環(huán)境，增強(qiáng)本身對脅迫的抵御能力，菌體的酶促系統(tǒng)中SOD、POD、CAT等活性也會相應(yīng)發(fā)生變化，這是正常生理性抗逆反應(yīng)。然而菌體細(xì)胞在抵御過程中受到了破壞，所以酶的活性出現(xiàn)下降，細(xì)胞瀕臨死亡，從而造成菌體的生長受到抑制。通過研究納米銀對3種保護(hù)酶活性的影響，得出破壞病原菌的膜保護(hù)系統(tǒng)是納米銀抑菌的機(jī)制之一。

有研究認(rèn)為，正常情況下細(xì)胞中SOD、POD和CAT 3種保護(hù)酶協(xié)調(diào)一致，可以防止過多自由基造成的細(xì)胞毒害，一旦細(xì)胞內(nèi)自由基所處動態(tài)平衡被破壞，細(xì)胞就有可能受到損傷[18]。當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激時，SOD能夠嵌入到線粒體基質(zhì)中，防止細(xì)胞中產(chǎn)生過量的活性氧[29]。CAT能夠防止體內(nèi)過多H2O2的產(chǎn)生，降低細(xì)胞發(fā)生氧化的可能性。POD能催化其他物質(zhì)的同時，將H2O2還原為H2O。SOD、POD和CAT作為生物體內(nèi)重要的抗氧化酶類，能夠降低對細(xì)胞膜起損傷作用的活性氧自由基，防止細(xì)胞受到破 壞[30-31]。由此可知，當(dāng)病原真菌受到納米銀的刺激時，會產(chǎn)生一系列的防御反應(yīng)，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)活性氧的生成能力超過其清除能力，導(dǎo)致3種保護(hù)酶的活性出現(xiàn)暫時升高的現(xiàn)象，但因活性氧自由基的不斷增多，導(dǎo)致細(xì)胞受到破壞，進(jìn)一步抑制菌體的生長，使3種酶的活力開始逐漸下降。高櫞等[32]研究了月腺大戟根總黃酮對尖孢鐮刀菌3種酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)了同樣的變化趨勢。魏立強(qiáng)等[33]研究了旱芹粗提物對棉花枯萎病菌保護(hù)酶活性的影響，結(jié)果表明，隨著納米銀處理時間的增加，菌體內(nèi)的SOD、POD和CAT活性同樣出現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢。因此，病原真菌體內(nèi)3種保護(hù)酶系統(tǒng)的活性被破壞，損害活性氧自由基清除系統(tǒng)，導(dǎo)致細(xì)胞膜系統(tǒng)的完整性嚴(yán)重?fù)p傷，從而使菌體受到一定程度的破壞。

小麥赤霉病菌經(jīng)納米銀處理后，病原菌的可溶性蛋白和糖含量降低，病原菌MDA含量和電導(dǎo)率出現(xiàn)先升高后下降的趨勢。計紅芳等[34]研究絨白乳菇發(fā)酵液提取物對楊樹葉枯病菌MDA含量的影響，發(fā)現(xiàn)同樣的變化趨勢。隨著納米銀處理時間的增加，小麥赤霉病菌細(xì)胞膜受到破壞，蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)出現(xiàn)水解和變性，膜結(jié)構(gòu)的破壞，使得MDA不斷積累，從而出現(xiàn)升高趨勢，電導(dǎo)率由于電解質(zhì)外滲，同樣出現(xiàn)升高的現(xiàn)象。電導(dǎo)率升高，表明菌絲體浸出液壓力增加，可能是浸出液中存在滲漏的內(nèi)含物，而滲漏是由于菌絲細(xì)胞膜透性遭到了破壞。隨著菌體脂質(zhì)過氧化程度的加劇，細(xì)胞膜的完整性喪失，進(jìn)一步使得MDA和電導(dǎo)率出現(xiàn)下降趨勢。納米銀可以顯著抑制病原菌的活性，說明該物質(zhì)可以嚴(yán)重破壞病原菌的抗氧化系統(tǒng)，使得蛋白質(zhì)和糖類水解，進(jìn)而使細(xì)胞膜系統(tǒng)受到損傷，細(xì)胞滲透性加強(qiáng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。通過研究納米銀對小麥赤霉病菌保護(hù)酶活性的影響，為納米銀抗真菌機(jī)理以及抑菌應(yīng)用提供理論依據(jù)，為防治植物真菌病害提供參考。為了進(jìn)一步了解納米銀對真菌的抑菌機(jī)理，仍需要進(jìn)行分子水平上的研究。

4 結(jié)論

納米銀能顯著抑制小麥赤霉病菌的生長，抑制作用隨著濃度的增加而不斷增大，10 μg/mL的納米銀對病原菌的抑制率達(dá)90%以上，50為0.59 μg/mL。

隨著納米銀處理時間的增長，3種酶的活性均出現(xiàn)先增加后降低的變化。SOD、POD、CAT均在4 h出現(xiàn)最高值，10 h降至最低。納米銀提高菌體內(nèi)丙二醛含量，降低可溶性蛋白和可溶性糖含量。

REFERENCES

[1] O’Donnell K, Ward TJ, Aberra D, et al. Multilocus genotyping and molecular phylogenetics resolve a novel head blight pathogen within thespecies complex from Ethiopia. Fungal Genet Biol, 2008, 45(11): 1514–1522.

[2] Dong F, Qiu JB, Xu JH, et al. Effect of environmental factors onpopulation and associated trichothecenes in wheat grain grown in Jiangsu province, China. Int J Food Microbiol, 2016, 230: 58–63.

[3] Liu YJ, Guo YL, Ma CY, et al. Transcriptome analysis of maize resistance to. BMC Genomics, 2016, 17: 477.

[4] Lionetti V, Giancaspro A, Fabri E, et al. Cell wall traits as potential resources to improve resistance of durum wheat against. BMC Plant Biol, 2015, 15: 6.

[5] Yang JZ, Wang JS, Gong GS, et al. Effect of differenton yield and its important components of wheat. J Henan Agric Sci, 2010, (9): 91–95 (in Chinese). 楊繼芝, 王繼師, 龔國淑, 等. 不同禾谷鐮刀菌對小麥產(chǎn)量及其主要性狀的影響. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010, (9): 91–95.

[6] Rajeshkumar S, Malarkodi C, Vanaja M, et al. Anticancer and enhanced antimicrobial activity of biosynthesizd silver nanoparticles against clinical pathogens. J Mol Struct, 2016, 1116: 165–173.

[7] Anisha BS, Biswas R, Chennazhi KP, et al. Chitosan-hyaluronic acid/nano silver composite sponges for drug resistant bacteria infected diabetic wounds. Int J Biol Macromol, 2013, 62: 310–320.

[8] Mishra S, Singh BR, Singh A, et al. Biofabricated silver nanoparticles act as a strong fungicide againstcausing spot blotch disease in wheat. PLoS ONE, 2014, 9(5): e97881.

[9] Sun RWY, Chen R, Chung NPY, et al. Silver nanoparticles fabricated in Hepes buffer exhibit cytoprotective activities toward HIV-1 infected cells. Chem Commun, 2005, (40): 5059–5061.

[10] Mishra S, Singh HB. Silver nanoparticles mediated altered gene expression of melanin biosynthesis genes in. Microbiol Res, 2015, 172: 16–18.

[11] Muthuramalingam TR, Shanmugam C, Gunasekaran D, et al. Bioactive bile salt-capped silver nanoparticles activity against destructive plant pathogenic fungi throughsystem. RSC Adv, 2015, 5(87): 71174–71182.

[12] Lamsal K, Kim SW, Jung JH, et al. Inhibition effects of silver nanoparticles against powdery mildews on cucumber and pumpkin. Mycobiology, 2011, 39(1): 26–32.

[13] Chu H, Kim HJ, Kim JS, et al. A nanosized Ag-silica hybrid complex prepared by γ-irradiation activates the defense response in. Radiat Phys Chem, 2012, 81(2): 180–184.

[14] Moussa SH, Tayel AA, Alsohim AS, et al. Botryticidal activity of nanosized silver-chitosan composite and its application for the control of gray mold in strawberry. J Food Sci, 2013, 78(10): M1589–M1594.

[15] Roy K, Sarkar CK, Ghosh CK. Apium graveolens leaf extract-mediated synthesis of silver nanoparticles and its activity on pathogenic fungi. Dig J Nanomater Bios, 2015, 10(2): 393–400.

[16] Devlin WS, Gustine DL. Involvement of the oxidative burst in phytoalexin accumulation and the hypersensitive reaction. Plant Physiol, 1992, 100(3): 1189–1195.

[17] Rinna A, Magdolenova Z, Hudecova A, et al. Effect of silver nanoparticles on mitogen-activated protein kinases activation: role of reactive oxygen species and implication in DNA damage. Mutagenesis, 2015, 30(1): 59–66.

[18] Chen XJ, Zhang H, Xu JY, et al. Cell wall degrading enzymes produced byand their pathogenicity to rice plants. Jiangsu J Agric Sci, 2006, 22(1): 24–28 (in Chinese). 陳夕軍, 張紅, 徐敬友, 等. 水稻紋枯病菌胞壁降解酶的產(chǎn)生及致病作用. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2006, 22(1): 24–28.

[19] Yin DC, Deng X, Chet I, et al. Inhibiting effect and mechanism ofT43 on four major species of forest pathogen. Chin J Ecol, 2014, 33(7): 1911–1919 (in Chinese). 尹大川, 鄧勛, Chet I, 等. 綠木霉() T43對四種重要林木病原菌的抑制效果及抑菌機(jī)理. 生態(tài)學(xué)雜志, 2014, 33(7): 1911–1919.

[20] Li JM. Preparation and catalytic activity of silver nanoparticles. J Ceramics, 2011, 32(3): 453–456 (in Chinese). 李菊梅. 納米銀粒子的制備及其催化性能的研究.陶瓷學(xué)報, 2011, 32(3): 453–456.

[21] Jin QD, Li FB, Li Y, et al. Synthesis and antifungal activity of novel α-alkoxyimino- (1-benzoimidazol- 2-yl) acetonitriles containing piperazine moiety. Res Chem Intermed, 2015, 41(10): 7695–7702.

[22] Sun DM, Lin ZW, Chi L, et al. Restrain ability of nanomenter silver on soybean. Soyb Sci, 2010, 29(4): 673–676 (in Chinese). 孫冬梅, 林志偉, 遲莉, 等. 納米銀對大豆菌核病核盤菌的抑制作用研究. 大豆科學(xué), 2010, 29(4): 673–676.

[23] Li HS. Principles and Techniques of Plant Physiological Biochemical Experiment. Beijing: Higher Education Press, 2000: 164–169 (in Chinese). 李合生. 植物生理生化實驗原理和技術(shù). 北京: 高等教育出版社, 2000: 164–169.

[24] Gao JF. Experimental Guidance for Plant Physiology. Beijing: Higher Education Press, 2006: 214–215 (in Chinese). 高俊鳳. 植物生理學(xué)實驗指導(dǎo). 北京: 高等教育出版社, 2006: 214–215.

[25] Mulfinger L, Solomon SD, Bahadory M, et al. Synthesis and study of silver nanoparticles. J Chem Educ, 2007, 84(2): 322.

[26] Mayer ABR, Grebner W, Wannemacher R. Preparation of silver-latex composites. J Phys Chem B, 2000, 104(31): 7278–7285.

[27] Zhao F, Dai JK, Liu D, et al. Synthesis and evaluation of ester derivatives of 10-hydroxycanthin- 6-one as potential antimicrobial agents. Molecules, 2016, 21(3): 390.

[28] Lu Y, Nie XP, Yao AQ. Toxicity determination of four kinds of fungicides on wheat scab virulence. J Yangtze Univ: Nat Sci Edit, 2013, 10(5): 22–23 (in Chinese). 陸云, 聶曉培, 姚安慶. 4種殺菌劑對小麥赤霉病菌的室內(nèi)毒力測定. 長江大學(xué)學(xué)報: 自然科學(xué)版, 2013, 10(5): 22–23.

[29] Oberley LW, Clair DST, Autor AP, et al. Increase in manganese superoxide dismutase activity in the mouse heart after X-irradiation. Arch Biochem Biophys, 1987, 254(1): 69–80.

[30] Wang JL, Qiu YX, Chen HW, et al. Inhibitive action of tea-polyphenol on some plant pathogenic Fungi. Nat Prod Res Dev, 2008, 20(4): 690–694 (in Chinese). 汪金蓮, 邱業(yè)先, 陳宏偉, 等. 茶多酚對幾種植物病原真菌的抑制作用及機(jī)理研究. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2008, 20(4): 690–694.

[31] ?ay S, K?se M, Tümer F, et al. SOD activity and DNA binding properties of a new symmetric porphyrin Schiff base ligand and its metal complexes. Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc, 2015, 151: 821–838.

[32] Gao Y, Wan SL, Cai YP, et al. The inhibitory effects of total flavones extracted from the roots ofhayata. on. Acta Laser Biol Sin, 2008, 17(2): 213–219 (in Chinese). 高櫞, 萬賽羅, 蔡永萍, 等. 月腺大戟根總黃酮對尖孢鐮刀菌抑制作用的研究. 激光生物學(xué)報, 2008, 17(2): 213–219.

[33] Wei LQ, Xie HQ, Yang DS, et al. Effects ofextracts on the content of MDA, conductivity ratio and activity of protective enzymes inf. sp.. Plant Protect, 2012, 38(3): 28–31 (in Chinese). 魏立強(qiáng), 謝慧琴, 楊德松, 等. 旱芹粗提物對棉花枯萎病菌丙二醛含量、電導(dǎo)率及保護(hù)酶活性的影響. 植物保護(hù), 2012, 38(3): 28–31.

[34] Ji HF, Song RQ, Yang Q. Effects of extraction fromfermenting liquor on the activity of protective enzymes, content of MDA and conductivity ratio in(Fr.) Keissler. J Beijing Fore Univ, 2007, 29(6): 156–160 (in Chinese). 計紅芳, 宋瑞清, 楊謙. 絨白乳菇發(fā)酵液提取物對楊樹葉枯病菌保護(hù)酶活性、丙二醛含量及電導(dǎo)率的影響. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2007, 29(6): 156–160.

(本文責(zé)編 陳宏宇)

Inhibition ofby silver nanoparticles

Qinqin Li1, Yinghu Zhao1, Li Gao1, QianqianHou1, Fang Wang1, WanliJia1, and YingyongWang2

1,,030051,,State Key Laboratory of Coal ConversionInstitute of Coal ChemistryChinese Academy of SciencesTaiyuanShanxiChina

Silver nanoparticles were prepared by chemical reduction.was used as the test strain. To study the inhibition ofby silver nanoparticles, we studied the activities of protective enzymes superoxide dismutase (SOD), peroxidase (POD) and catalase (CAT), and the contents of osmotic adjustment substances soluble protein, soluble sugar and malonaldehyde (MDA) in. Silver nanoparticles inhibitedand the inhibitory effect was increased with the concentration of silver nanoparticles. The inhibition rate of 10 μg/mL silver nanoparticles was more than 90% and50was 0.59 μg/mL. When the treating time prolonged (2, 4, 6, 8 and 10 h), the activity of SOD, CAT and POD increased firstly and then declined. SOD, POD and CAT reached the maximum at 4 hours, and decreased to minimum at 10 hours. Silver nanoparticles also increased the MDA content and reduced the soluble sugar and protein contents in pathogens. These results indicated that cell integrity was destroyed in the presence of silver. This may be one of the inhibiting mechanisms of silver nanoparticles on the growth of.

silver nanoparticles,, antifungal activity, inhibiting mechanism

Supported by: Shanxi Provincial Projects for Science and Technology Development (No. 20140311008-7), the Foundation of Shanxi Province Key Laboratory of Functional Nanocomposites, North University of China (No. NFCM201603), Research for Shanxi Natural Science Foundation (Nos. 2012021027-3, 2014021027-3)

山西省科技攻關(guān)項目 (No. 20140311008-7)，納米功能復(fù)合材料山西省重點實驗室開放基金項目 (No. NFCM201603)，山西省青年科技研究基金 (Nos. 2012021027-3, 2014021027-3) 資助。

October 10, 2016; Accepted:November 30, 2016

Li Gao. Tel: +86-351-3922297; E-mail: gaoli@nuc.edu.cn

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2017-02-13

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.1998.Q.20170213.1455.003.html