紫杉醇緩釋微球?qū)β殉舶┞阈∈笤灰浦擦龅囊至鲂Ч?/h1>
2017-05-05 07:16:55饒子亮熊仁清張明浩鄺少松唐小江
饒子亮, 王 弋, 王 諾, 熊仁清, 張明浩, 鄺少松, 唐小江
(1. 廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心, 佛山528248; 2. 天大藥業(yè)(珠海)有限公司, 珠海519070)
紫杉醇緩釋微球?qū)β殉舶┞阈∈笤灰浦擦龅囊至鲂Ч?/p>
饒子亮1, 王 弋1, 王 諾1, 熊仁清2, 張明浩2, 鄺少松1, 唐小江1
(1. 廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心, 佛山528248; 2. 天大藥業(yè)(珠海)有限公司, 珠海519070)
目的 研究以新型聚乳酸磷酸酯聚合物(PLCE)為載體的紫杉醇緩釋微球體內(nèi)抑瘤效果。方法 采用HO8910人卵巢癌細(xì)胞株，手術(shù)接種于68只BALB/c裸小鼠卵巢包膜下。3周后，取腫塊大小相對(duì)均勻的42只裸小鼠隨機(jī)分成7組: 空白對(duì)照組、聚合物空白微球?qū)φ战M、紫杉醇注射液組，紫杉醇緩釋微球1中、低劑量組，紫杉醇緩釋微球2中、低劑量組，每組6只。分組當(dāng)日給藥1次，連續(xù)觀察一個(gè)月。結(jié)果 紫杉醇注射液抑瘤率57.0%; 紫杉醇緩釋微球2中劑量抑瘤率77.1%，低劑量抑瘤率58.7%。結(jié)論 以新型PLCE為載體的紫杉醇緩釋微球2(60 mg/kg)對(duì)卵巢癌裸小鼠原位移植瘤有良好的抑制效果，但是毒性仍然較大，需要進(jìn)一步改進(jìn)。
紫杉醇; 微球; 卵巢癌; 聚乳酸磷酸酯共聚物(PLCE)
紫杉醇是從紅豆杉樹(Taxaceae)的樹皮中分離出的一種化療藥物[1]，能誘導(dǎo)和促進(jìn)微管蛋白聚合和組裝, 從而阻止腫瘤細(xì)胞繁殖，是目前臨床治療公認(rèn)的有效一線化療藥物[2]。然而，其應(yīng)用的最大問題是不溶于水，臨床上常用的紫杉醇針劑靠表面活性劑聚氧乙烯蓖麻油與脫水乙醇以1∶1的混合液溶解，該溶劑副作用大[3], 易引起嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。同時(shí)由于靜脈給藥, 時(shí)程長(zhǎng)(連續(xù)24 h滴注)，患者用藥不便且使用受限。
以微型成球技術(shù)制備的微球作為藥物遞送系統(tǒng)具備了靶向給藥、多種途徑給藥和緩釋或控釋藥物等優(yōu)點(diǎn)。在制備微球所用的載體材料中，可生物降解的合成高分子材料受到普遍重視并得到廣泛應(yīng)用[4]。本實(shí)驗(yàn)采用新型聚乳酸磷酸酯共聚物(PLCE)緩釋微球, 并觀察其應(yīng)用于紫杉醇的體內(nèi)抑瘤效果。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)條件
6～7周齡雌性SPF級(jí)BALB/c裸小鼠76只, 由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[SCXK(粵)2013-0002]。飼養(yǎng)在廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室IVC系統(tǒng)內(nèi)[SYXK(粵)2013-0002], 室內(nèi)保持20～26 ℃,相對(duì)濕度40%～70%，自由飲食， 飼料由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心生產(chǎn)[SCXK(粵)2013-0002]。實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查通過。
1.2 細(xì)胞
HO8910人卵巢癌細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。
1.3 主要試劑和儀器
主要儀器: CKX41型倒置顯微鏡, 日本Olympus公司; 311型恒溫CO2孵箱，美國(guó)Thermo公司; SWCJ-2FD型超凈工作臺(tái), 蘇州凈化有限公司; HWS-28型恒溫水浴鍋，上海一恒科技有限公司; MS 3 digital型振蕩器，德國(guó)IKA公司; KDC-2046型低速冷凍離心機(jī)，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司。
主要試劑: DMEM培養(yǎng)液, 美國(guó)Gibco公司; 胎牛血清, 美國(guó)Hyclone公司; 青/鏈霉素雙抗, 杭州吉諾生物醫(yī)藥有限公司; 胰酶, 杭州吉諾生物醫(yī)藥有限公司; PBS, 杭州吉諾生物醫(yī)藥有限公司。
1.4 實(shí)驗(yàn)方法
1.4.1 微球制備 紫杉醇緩釋微球的制備工藝見圖1,白色粉末, 成球形良好(圖2)。紫杉醇緩釋微球1，批號(hào)T130717，收率88.4%, 包封率90.7%, 顆粒直徑14～76 μm; 紫杉醇緩釋微球2, 批號(hào)T130822, 收率80.3%, 包封率99.1%, 顆粒直徑14～76 μm。
1.4.2 接種 選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HO8910人卵巢癌細(xì)胞，經(jīng)胰酶消化后，用DMEM培養(yǎng)基配成1× 107個(gè)/mL濃度的細(xì)胞懸液, 取裸小鼠8只, 注射于裸小鼠皮下0.2 mL/只。待皮下腫瘤直徑達(dá)到1 cm時(shí)處死裸小鼠(約3周)，切下瘤塊除去壞死部分選用淡黃色或呈魚肉狀瘤組織置于生理鹽水中剪成直徑約為1 mm3的瘤塊備用。68只裸小鼠戊巴比妥(45 mg/kg)腹腔注射麻醉，待裸小鼠麻醉后固定于操作板上，背部皮膚酒精消毒備皮，從左側(cè)肋脊角下逐層切開背部皮膚、腹膜，進(jìn)入腹腔，將卵巢掏出腹腔，用縫合線將大小為 1 mm3的移植瘤組織縫合至卵巢包膜下，操作結(jié)束后將卵巢送回腹腔，無(wú)菌絲線縫合腹膜和皮膚。
圖 1 紫杉醇緩釋微球制備工藝圖
圖 2 紫杉醇緩釋微球形態(tài)電鏡圖
1.4.3 分組 3周后取腫塊大小相對(duì)均勻的42只裸小鼠隨機(jī)分成7組: 空白對(duì)照組、聚合物空白微球?qū)φ战M(劑量為3 g/kg)、紫杉醇注射液組(劑量為50 mg/kg), 紫杉醇緩釋微球1中、低劑量組(劑量分別為120 mg/kg、60 mg/kg), 紫杉醇緩釋微球2中、低劑量組(劑量分別為120 mg/kg、60 mg/kg)，每組6只。
1.4.4 給藥 聚合物空白微球?qū)φ战M裸小鼠腹腔注射150 mg/mL輔料微球注射液，紫杉醇注射液組裸小鼠腹腔注射2.5 mg/mL紫杉醇注射液，紫杉醇緩釋微球1、2中、低劑量組裸小鼠分別腹腔注射6 mg/mL、3 mg/mL紫杉醇緩釋微球注射液, 注射量為0.2 mL/10 g體質(zhì)量，分組當(dāng)日給藥1次，每日觀察1次，連續(xù)觀察一個(gè)月。
1.4.5 觀測(cè)指標(biāo) 每日 1次觀察裸小鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)力、反應(yīng)、大小便形態(tài)、有無(wú)腹水產(chǎn)生、有無(wú)腹瀉等；每周測(cè)量2次動(dòng)物體質(zhì)量; 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取出腫瘤完整剝離后測(cè)量腫瘤體積(V=1/ 2ab2，a、b分別為最長(zhǎng)和最短的兩個(gè)直徑)，并稱重腫瘤，計(jì)算腫瘤抑制率(%):
1.5 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果
2.1 一般情況觀察和體質(zhì)量
紫杉醇注射液組和紫杉醇緩釋微球組給藥初期動(dòng)物出現(xiàn)匍匐行走、精神萎靡、明顯消瘦等癥狀，大便無(wú)稀爛。紫杉醇緩釋微球組1、2中、低劑量組均有死亡。其他各組存活小鼠平均體質(zhì)量均有所增加, 但組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)(表1)。
2.2 腫瘤體積和瘤重
輔料微球組腫瘤體積、瘤重與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。與空白對(duì)照組比較，紫杉醇注射液組、紫杉醇緩釋微球2低劑量組、中劑量組的腫瘤體積、瘤重顯著降低(P＜0.05)(表1)。
2.3 抑瘤率
紫杉醇注射液抑瘤率57.0%; 紫杉醇緩釋微球2中劑量抑瘤率77.1%, 低劑量抑瘤率58.7%; 與空白對(duì)照組比較, 紫杉醇注射液組、紫杉醇緩釋微球2低劑量組、紫杉醇緩釋微球2中劑量組腫瘤重量顯著降低(P＜0.05); 與紫杉醇注射液組比較, 紫杉醇緩釋微球2中劑量組腫瘤重量顯著降低(P＜0.05)(表1)。
3 討論
紫杉醇是目前臨床公認(rèn)的卵巢癌一線化療藥物[5-9]。關(guān)于紫杉醇誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制，普遍認(rèn)為與其擾亂細(xì)胞微管系統(tǒng)有關(guān)。該藥物導(dǎo)致有絲分裂停滯在G2 /M期，且隨藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)而阻滯作用增強(qiáng)[10]，短時(shí)間內(nèi)藥物代謝完畢, 給藥期間不能對(duì)腫瘤進(jìn)行持續(xù)殺傷作用。另外, 紫杉醇在水中的溶解度約為0.25 μg/mL, 因而其體內(nèi)有效利用率較低, 因此紫杉醇的有效治療量(135 mg /m2) 相對(duì)較大，而高濃度的表面活性劑易引起患者過敏性反應(yīng)，同時(shí)靜脈滴注給藥，一過性給藥劑量過大，對(duì)機(jī)體的毒副作用過大。
抗腫瘤藥物多具有毒性, 而且溶解性較差, 體內(nèi)的生物利用度不高, 不適宜制成口服制劑，臨床上常用的劑型為注射用溶液劑和凍干粉針劑，給藥途徑也比較單一，一般為靜脈滴注, 給藥過程復(fù)雜漫長(zhǎng)。靜脈滴注給藥時(shí)，藥物一過性給藥劑量較大,對(duì)機(jī)體的整體傷害大，并且藥物在短時(shí)間內(nèi)代謝完畢，給藥間期不能對(duì)腫瘤起到持續(xù)殺傷作用。同時(shí)，為解決藥物的低溶解性, 所采用的溶劑往往也具有毒性，易引起多種不良反應(yīng)。緩釋給藥制劑除了能夠避免上述注射劑的不足之處，能夠在特定部位持續(xù)釋放藥物，使藥物的體內(nèi)水平始終維持在有效濃度, 對(duì)于腫瘤等頑固病灶具有強(qiáng)大殺傷力。
表 1 紫杉醇緩釋微球?qū)β殉舶┞阈∈笤灰浦擦龅挠绊慣able 1 Effect of PLCE on ovarian cancer orthotopic transplantation
本研究中的紫杉醇長(zhǎng)效緩釋微球, 是一種用生物可降解聚合物制成的緩釋微球制劑。制備的2個(gè)批次紫杉醇緩釋微球?yàn)榘咨勰? 成球形好, 收率均大于80%, 包封率均大于90%, 顆粒直徑14～76 μm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 2個(gè)批次的紫杉醇緩釋微球在60 mg/kg的劑量下動(dòng)物存活情況較好, 紫杉醇緩釋微球2的抑瘤率高于紫杉醇緩釋微球1, 可能與紫杉醇緩釋微球2的包封率更高有關(guān)。紫杉醇緩釋微球2(60 mg/kg)對(duì)卵巢癌裸小鼠原位移植瘤有良好抑制效果, 但毒性仍然較大, 需進(jìn)一步改進(jìn)。
[1] Vaughn DJ, Brown AW Jr, Harker WC, et al. Multicenter phase II study of estramustine phosphate plus weekly paclitaxel in patientes with androgen-independent prostate carcinoma[J]. Cancer, 2004, 100(4):746-750.
[2] 張爍, 郭文彬, 朱梅. 載紫杉醇緩釋微球的制備及其體外抑瘤效果的觀察[J]. 山東大學(xué)學(xué)報(bào): 醫(yī)學(xué)版, 2011, 49(12): 39-47.
[3] 王美清. 紫杉醇的臨床毒副作用分析及對(duì)策[J]. 中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué), 2007, 7(2):237-239.
[4] Ruan G, Feng SS. Preparation and characterization of poly (lactic acid)-poly(ethylene glycol)-poly(lactic acid) (PLAPEC-PLA) micro-spheres for controlled release of paclitaxel [J]. Biomaterials, 2003, 24(27):5037-5044.
[5] Liu Z, Zhu YY, Li ZY, et al. Evaluation of the efficacy of paclitaxel with curcumin combination in ovarian cancer cells [J]. Oncol Lett, 2016, 12(5):3944-3948.
[6] Tyulyandina A, Harrison D, Yin W, et al. Alofanib, an allosteric FGFR2 inhibitor, has potent effects on ovarian cancer growth in preclinical studies[J]. Invest New Drugs, 2016(3). [Epub ahead of print]
[7] Ai B, Bie Z, Zhang S, et al. Paclitaxel targets VEGF-mediated angiogenesis in ovarian cancer treatment[J]. Am J Cancer Res, 2016, 6(8):1624-1635.
[8] Osman MA, Elkady MS, Nasr KE. Weekly Paclitaxel versus three-weekly Paclitaxel in recurrent platinum-resistant epithelialovarian and peritoneal cancers: A phase iii study [J]. Clin Med Insights Oncol, 2016, 10:35-41.
[9] Ishiguro K, Zhu YL, Lin ZP, et al. Cataloging antineoplastic agents according to their effectiveness against platinumresistant and platinum-sensitive ovarian carcinoma cell lines [J]. J Transl Sci, 2016, 2(2):117-124.
[10] 余志英, 李麗文, 杜靜, 等. 紫杉醇誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期改變的研究[J]. 中國(guó)醫(yī)師雜志, 2006, 18(3):322-324.
Inhibition of Paclitaxel-Poly Lactic Acid Phosphate(PLCE) Microspheres on Growth of Ovarian Cancer Transplanted in Nude Mice
RAO Zi-liang1, WANG Yi1, WANG Nuo1, XIONG Ren-qing2, ZHANG MING-hao2, LOU Cai-xia1, KUANG Shao-song1, TANG Xiao-jiang1
(1. Guang Dong Medical Laboratory Animal Center, Foshan 528248, China; 2. Tianda Pharmaceuticals Limited, Zhuhai 519070, China)
ObjectiveTo observe the antitumor effect of paclitaxel- novel copolymer of poly lactic acid phosphate (PLCE) microspheres on proliferation of ovarian cancer.MethodsThe human overiam cancer (HO8910) were implanted into the ovarian capsule of 68 nude mice. Three weeks later, 42 tumor bearing nude mice were randomly divided into 7 groups as follow, blank control group, negative control group, paclitarel injection group, paclitaxel-PLCE microspheres 1 high and low dose group, and paclitaxel-PLCE microspheres 2 high and low dose group, with 6 nude mice in each group. The drug was administered 1 time a day, and the growth of the tumor were continuously observed for one month.ResultsThe tumor inhibition rate of paclitarel injection was 57.0%, and tumor inhibition rate of paclitaxel-PLCE microspheres 2 high and low dose group were 77.1% and 58.7% respectively.ConclusionPaclitaxel-PLCE microspheres have a strong inhibitory effect on HO8910 ovarian cancer transplanted in nude mice.
Paclitaxel; Microspheres; Ovarian cancer; Poly lactic acid phosphate (PLCE)
R965.1 Q95-33
A
1674-5817(2017)02-0136-04
10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.010
2016-11-14
廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2016A030303027、2013B060300033、2016A030303026)
饒子亮(1983-), 男, 副主任藥師, 從事抗腫瘤藥物篩選研究。E-mail: 343806059@qq.com
鄺少松(1973-), 女, 高級(jí)獸醫(yī)師, 主要從事比較醫(yī)學(xué)研究。E-mail: kuangss@126.com
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紫杉醇緩釋微球?qū)β殉舶┞阈∈笤灰浦擦龅囊至鲂Ч?/p>
饒子亮1, 王 弋1, 王 諾1, 熊仁清2, 張明浩2, 鄺少松1, 唐小江1
(1. 廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心, 佛山528248; 2. 天大藥業(yè)(珠海)有限公司, 珠海519070)
目的 研究以新型聚乳酸磷酸酯聚合物(PLCE)為載體的紫杉醇緩釋微球體內(nèi)抑瘤效果。方法 采用HO8910人卵巢癌細(xì)胞株，手術(shù)接種于68只BALB/c裸小鼠卵巢包膜下。3周后，取腫塊大小相對(duì)均勻的42只裸小鼠隨機(jī)分成7組: 空白對(duì)照組、聚合物空白微球?qū)φ战M、紫杉醇注射液組，紫杉醇緩釋微球1中、低劑量組，紫杉醇緩釋微球2中、低劑量組，每組6只。分組當(dāng)日給藥1次，連續(xù)觀察一個(gè)月。結(jié)果 紫杉醇注射液抑瘤率57.0%; 紫杉醇緩釋微球2中劑量抑瘤率77.1%，低劑量抑瘤率58.7%。結(jié)論 以新型PLCE為載體的紫杉醇緩釋微球2(60 mg/kg)對(duì)卵巢癌裸小鼠原位移植瘤有良好的抑制效果，但是毒性仍然較大，需要進(jìn)一步改進(jìn)。
紫杉醇; 微球; 卵巢癌; 聚乳酸磷酸酯共聚物(PLCE)
紫杉醇是從紅豆杉樹(Taxaceae)的樹皮中分離出的一種化療藥物[1]，能誘導(dǎo)和促進(jìn)微管蛋白聚合和組裝, 從而阻止腫瘤細(xì)胞繁殖，是目前臨床治療公認(rèn)的有效一線化療藥物[2]。然而，其應(yīng)用的最大問題是不溶于水，臨床上常用的紫杉醇針劑靠表面活性劑聚氧乙烯蓖麻油與脫水乙醇以1∶1的混合液溶解，該溶劑副作用大[3], 易引起嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。同時(shí)由于靜脈給藥, 時(shí)程長(zhǎng)(連續(xù)24 h滴注)，患者用藥不便且使用受限。
以微型成球技術(shù)制備的微球作為藥物遞送系統(tǒng)具備了靶向給藥、多種途徑給藥和緩釋或控釋藥物等優(yōu)點(diǎn)。在制備微球所用的載體材料中，可生物降解的合成高分子材料受到普遍重視并得到廣泛應(yīng)用[4]。本實(shí)驗(yàn)采用新型聚乳酸磷酸酯共聚物(PLCE)緩釋微球, 并觀察其應(yīng)用于紫杉醇的體內(nèi)抑瘤效果。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)條件
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1.2 細(xì)胞
HO8910人卵巢癌細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。
1.3 主要試劑和儀器
主要儀器: CKX41型倒置顯微鏡, 日本Olympus公司; 311型恒溫CO2孵箱，美國(guó)Thermo公司; SWCJ-2FD型超凈工作臺(tái), 蘇州凈化有限公司; HWS-28型恒溫水浴鍋，上海一恒科技有限公司; MS 3 digital型振蕩器，德國(guó)IKA公司; KDC-2046型低速冷凍離心機(jī)，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司。
主要試劑: DMEM培養(yǎng)液, 美國(guó)Gibco公司; 胎牛血清, 美國(guó)Hyclone公司; 青/鏈霉素雙抗, 杭州吉諾生物醫(yī)藥有限公司; 胰酶, 杭州吉諾生物醫(yī)藥有限公司; PBS, 杭州吉諾生物醫(yī)藥有限公司。
1.4 實(shí)驗(yàn)方法
1.4.1 微球制備 紫杉醇緩釋微球的制備工藝見圖1,白色粉末, 成球形良好(圖2)。紫杉醇緩釋微球1，批號(hào)T130717，收率88.4%, 包封率90.7%, 顆粒直徑14～76 μm; 紫杉醇緩釋微球2, 批號(hào)T130822, 收率80.3%, 包封率99.1%, 顆粒直徑14～76 μm。
1.4.2 接種 選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HO8910人卵巢癌細(xì)胞，經(jīng)胰酶消化后，用DMEM培養(yǎng)基配成1× 107個(gè)/mL濃度的細(xì)胞懸液, 取裸小鼠8只, 注射于裸小鼠皮下0.2 mL/只。待皮下腫瘤直徑達(dá)到1 cm時(shí)處死裸小鼠(約3周)，切下瘤塊除去壞死部分選用淡黃色或呈魚肉狀瘤組織置于生理鹽水中剪成直徑約為1 mm3的瘤塊備用。68只裸小鼠戊巴比妥(45 mg/kg)腹腔注射麻醉，待裸小鼠麻醉后固定于操作板上，背部皮膚酒精消毒備皮，從左側(cè)肋脊角下逐層切開背部皮膚、腹膜，進(jìn)入腹腔，將卵巢掏出腹腔，用縫合線將大小為 1 mm3的移植瘤組織縫合至卵巢包膜下，操作結(jié)束后將卵巢送回腹腔，無(wú)菌絲線縫合腹膜和皮膚。
圖 1 紫杉醇緩釋微球制備工藝圖
圖 2 紫杉醇緩釋微球形態(tài)電鏡圖
1.4.3 分組 3周后取腫塊大小相對(duì)均勻的42只裸小鼠隨機(jī)分成7組: 空白對(duì)照組、聚合物空白微球?qū)φ战M(劑量為3 g/kg)、紫杉醇注射液組(劑量為50 mg/kg), 紫杉醇緩釋微球1中、低劑量組(劑量分別為120 mg/kg、60 mg/kg), 紫杉醇緩釋微球2中、低劑量組(劑量分別為120 mg/kg、60 mg/kg)，每組6只。
1.4.4 給藥 聚合物空白微球?qū)φ战M裸小鼠腹腔注射150 mg/mL輔料微球注射液，紫杉醇注射液組裸小鼠腹腔注射2.5 mg/mL紫杉醇注射液，紫杉醇緩釋微球1、2中、低劑量組裸小鼠分別腹腔注射6 mg/mL、3 mg/mL紫杉醇緩釋微球注射液, 注射量為0.2 mL/10 g體質(zhì)量，分組當(dāng)日給藥1次，每日觀察1次，連續(xù)觀察一個(gè)月。
1.4.5 觀測(cè)指標(biāo) 每日 1次觀察裸小鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)力、反應(yīng)、大小便形態(tài)、有無(wú)腹水產(chǎn)生、有無(wú)腹瀉等；每周測(cè)量2次動(dòng)物體質(zhì)量; 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取出腫瘤完整剝離后測(cè)量腫瘤體積(V=1/ 2ab2，a、b分別為最長(zhǎng)和最短的兩個(gè)直徑)，并稱重腫瘤，計(jì)算腫瘤抑制率(%):
1.5 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果
2.1 一般情況觀察和體質(zhì)量
紫杉醇注射液組和紫杉醇緩釋微球組給藥初期動(dòng)物出現(xiàn)匍匐行走、精神萎靡、明顯消瘦等癥狀，大便無(wú)稀爛。紫杉醇緩釋微球組1、2中、低劑量組均有死亡。其他各組存活小鼠平均體質(zhì)量均有所增加, 但組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)(表1)。
2.2 腫瘤體積和瘤重
輔料微球組腫瘤體積、瘤重與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。與空白對(duì)照組比較，紫杉醇注射液組、紫杉醇緩釋微球2低劑量組、中劑量組的腫瘤體積、瘤重顯著降低(P＜0.05)(表1)。
2.3 抑瘤率
紫杉醇注射液抑瘤率57.0%; 紫杉醇緩釋微球2中劑量抑瘤率77.1%, 低劑量抑瘤率58.7%; 與空白對(duì)照組比較, 紫杉醇注射液組、紫杉醇緩釋微球2低劑量組、紫杉醇緩釋微球2中劑量組腫瘤重量顯著降低(P＜0.05); 與紫杉醇注射液組比較, 紫杉醇緩釋微球2中劑量組腫瘤重量顯著降低(P＜0.05)(表1)。
3 討論
紫杉醇是目前臨床公認(rèn)的卵巢癌一線化療藥物[5-9]。關(guān)于紫杉醇誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制，普遍認(rèn)為與其擾亂細(xì)胞微管系統(tǒng)有關(guān)。該藥物導(dǎo)致有絲分裂停滯在G2 /M期，且隨藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)而阻滯作用增強(qiáng)[10]，短時(shí)間內(nèi)藥物代謝完畢, 給藥期間不能對(duì)腫瘤進(jìn)行持續(xù)殺傷作用。另外, 紫杉醇在水中的溶解度約為0.25 μg/mL, 因而其體內(nèi)有效利用率較低, 因此紫杉醇的有效治療量(135 mg /m2) 相對(duì)較大，而高濃度的表面活性劑易引起患者過敏性反應(yīng)，同時(shí)靜脈滴注給藥，一過性給藥劑量過大，對(duì)機(jī)體的毒副作用過大。
抗腫瘤藥物多具有毒性, 而且溶解性較差, 體內(nèi)的生物利用度不高, 不適宜制成口服制劑，臨床上常用的劑型為注射用溶液劑和凍干粉針劑，給藥途徑也比較單一，一般為靜脈滴注, 給藥過程復(fù)雜漫長(zhǎng)。靜脈滴注給藥時(shí)，藥物一過性給藥劑量較大,對(duì)機(jī)體的整體傷害大，并且藥物在短時(shí)間內(nèi)代謝完畢，給藥間期不能對(duì)腫瘤起到持續(xù)殺傷作用。同時(shí)，為解決藥物的低溶解性, 所采用的溶劑往往也具有毒性，易引起多種不良反應(yīng)。緩釋給藥制劑除了能夠避免上述注射劑的不足之處，能夠在特定部位持續(xù)釋放藥物，使藥物的體內(nèi)水平始終維持在有效濃度, 對(duì)于腫瘤等頑固病灶具有強(qiáng)大殺傷力。
表 1 紫杉醇緩釋微球?qū)β殉舶┞阈∈笤灰浦擦龅挠绊慣able 1 Effect of PLCE on ovarian cancer orthotopic transplantation
本研究中的紫杉醇長(zhǎng)效緩釋微球, 是一種用生物可降解聚合物制成的緩釋微球制劑。制備的2個(gè)批次紫杉醇緩釋微球?yàn)榘咨勰? 成球形好, 收率均大于80%, 包封率均大于90%, 顆粒直徑14～76 μm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 2個(gè)批次的紫杉醇緩釋微球在60 mg/kg的劑量下動(dòng)物存活情況較好, 紫杉醇緩釋微球2的抑瘤率高于紫杉醇緩釋微球1, 可能與紫杉醇緩釋微球2的包封率更高有關(guān)。紫杉醇緩釋微球2(60 mg/kg)對(duì)卵巢癌裸小鼠原位移植瘤有良好抑制效果, 但毒性仍然較大, 需進(jìn)一步改進(jìn)。
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Inhibition of Paclitaxel-Poly Lactic Acid Phosphate(PLCE) Microspheres on Growth of Ovarian Cancer Transplanted in Nude Mice
RAO Zi-liang1, WANG Yi1, WANG Nuo1, XIONG Ren-qing2, ZHANG MING-hao2, LOU Cai-xia1, KUANG Shao-song1, TANG Xiao-jiang1
(1. Guang Dong Medical Laboratory Animal Center, Foshan 528248, China; 2. Tianda Pharmaceuticals Limited, Zhuhai 519070, China)
ObjectiveTo observe the antitumor effect of paclitaxel- novel copolymer of poly lactic acid phosphate (PLCE) microspheres on proliferation of ovarian cancer.MethodsThe human overiam cancer (HO8910) were implanted into the ovarian capsule of 68 nude mice. Three weeks later, 42 tumor bearing nude mice were randomly divided into 7 groups as follow, blank control group, negative control group, paclitarel injection group, paclitaxel-PLCE microspheres 1 high and low dose group, and paclitaxel-PLCE microspheres 2 high and low dose group, with 6 nude mice in each group. The drug was administered 1 time a day, and the growth of the tumor were continuously observed for one month.ResultsThe tumor inhibition rate of paclitarel injection was 57.0%, and tumor inhibition rate of paclitaxel-PLCE microspheres 2 high and low dose group were 77.1% and 58.7% respectively.ConclusionPaclitaxel-PLCE microspheres have a strong inhibitory effect on HO8910 ovarian cancer transplanted in nude mice.
Paclitaxel; Microspheres; Ovarian cancer; Poly lactic acid phosphate (PLCE)
R965.1 Q95-33
A
1674-5817(2017)02-0136-04
10.3969/j.issn.1674-5817.2017.02.010
2016-11-14
廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2016A030303027、2013B060300033、2016A030303026)
饒子亮(1983-), 男, 副主任藥師, 從事抗腫瘤藥物篩選研究。E-mail: 343806059@qq.com
鄺少松(1973-), 女, 高級(jí)獸醫(yī)師, 主要從事比較醫(yī)學(xué)研究。E-mail: kuangss@126.com
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