王志強(qiáng) （遼寧省本溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 117000）

遼寧本溪部分地區(qū)犬狂犬病免疫情況的調(diào)查

王志強(qiáng) （遼寧省本溪市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 117000）

狂犬病是一種嚴(yán)重的人獸共患傳染病，被感染的人或動(dòng)物一旦發(fā)病，死亡率100%。被攜帶狂犬病病毒的動(dòng)物咬傷、抓傷是感染該病的主要途徑，特別是近年來寵物養(yǎng)殖量增加，人感染狂犬病的發(fā)病數(shù)量有所上升，據(jù)中國疾控中心統(tǒng)計(jì)，2013年、2014年和2015年全國狂犬病發(fā)病分別為1172人、924人和801人，2016年截至8月份，全國報(bào)告發(fā)病63人[1]?？刂迫烁腥究袢〉陌l(fā)生，大規(guī)模的犬類接種疫苗是控制犬狂犬病的最有效措施，只要某一地區(qū)超過70%的犬進(jìn)行持續(xù)和有效的免疫，就可以切斷狂犬病的傳播[2]，能有效預(yù)防人感染狂犬病。

本次針對(duì)遼寧本溪部分地區(qū)城市寵物犬和農(nóng)村家養(yǎng)犬的狂犬病疫苗免疫開展情況進(jìn)行調(diào)查，目的是為全市開展狂犬病強(qiáng)制免疫提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 采集血清 在本溪市選取市區(qū)3家動(dòng)物門診收集全血，收集78份，在本溪市某區(qū)選擇2個(gè)村采集犬全血，采集50份。此次調(diào)查共采集128份犬血清。血清采回后在室溫靜置2～3h，以2000轉(zhuǎn)/min離心3min，用單道移液器吸出血清置于EP管中，-20℃冷凍保存。檢測(cè)前在室溫下解凍。

1.2 檢測(cè)試劑 犬狂犬病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒(北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司生產(chǎn))，洗板用洗滌液按試劑盒說明書配制，單道移液器、多道移液器，酶標(biāo)儀。

1.3 檢測(cè)方法與步驟 （1）試劑盒放置室溫平衡20～30min，將濃縮洗滌液用蒸餾水配制10倍稀釋備用；（2）將已分離好的血清用樣品稀釋液做1∶100稀釋，即取10μl血清加入到1ml樣品稀釋液中，混勻；（3）在包被好的微孔板內(nèi)加入稀釋好的樣品，100μl/孔，將陽性、陰性對(duì)照各加1孔，臨界對(duì)照加3孔，100μl/孔，留一孔不加樣品作為空白對(duì)照；（4）加樣后，輕微震蕩，置37℃恒溫箱孵育30min；（5）孵育結(jié)束后，甩干孔中液體，拍干，用稀釋好的洗滌液加滿每孔，停留1min后甩凈、拍干，反復(fù)洗板3次；（6）洗板后加酶，除空白對(duì)照外，其余各孔加入酶標(biāo)記物50μl，置37℃恒溫箱孵育30min；（7）顯色，按1.3.5操作方法洗板3次，拍干后每孔加入顯色液A、B各50μl，置避光顯色15min；（8）終止，每孔加入終止液50μl，混勻后用酶標(biāo)儀450nm波長測(cè)定A值。

1.4 結(jié)果判定 陰性對(duì)照A值≤0.15，臨界對(duì)照A值平均值大于等于0.20小于等于0.80，臨界對(duì)照A值平均值/陰性對(duì)照A值平均值≥2.0，陰性對(duì)照A值＞臨界對(duì)照A值平均值，則實(shí)驗(yàn)成立。樣品孔A值≥臨界對(duì)照A值平均值判定為陽性，否則為陰性。

2 結(jié)果

2.1 全部樣品抗體 試驗(yàn)結(jié)果表明，128份犬血清試驗(yàn)全部成立，其中59份樣品檢測(cè)結(jié)果為陽性，69份檢測(cè)結(jié)果為陰性，陽性率46.1%。在陽性樣品中，57份樣品來自城區(qū)動(dòng)物門診，陽性率73.1%(57/78)，只有2份樣品來自農(nóng)村犬，陽性率4%；陰性樣品中有48份來自農(nóng)村犬，21份樣品來自城區(qū)動(dòng)物門診(見表1)。

表1 全部樣品抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果 (%)

2.2 城區(qū)和農(nóng)村犬的抗體 （1）從城區(qū)動(dòng)物門診收集到的樣品分布情況看，中心城區(qū)動(dòng)物門診的樣品陽性率較高，即DM、PS動(dòng)物門診，陽性率分別為78.6%和87.1%，說明中心城區(qū)動(dòng)物門診對(duì)狂犬病免疫推廣的較好，寵物養(yǎng)殖者也對(duì)狂犬病免疫認(rèn)識(shí)比較到位，都能主動(dòng)為犬注射疫苗。而CT動(dòng)物門診位置較偏，采集到的樣品抗體陽性率不高，可能與寵物養(yǎng)殖者的防疫意識(shí)不高有關(guān)。（2）農(nóng)村家養(yǎng)犬的情況更能說明問題，在兩個(gè)遠(yuǎn)離市區(qū)的行政村抽取了50只犬，只有2只犬抗體陽性，這2只犬還都是當(dāng)?shù)卮鍎?dòng)物防疫員家養(yǎng)的犬，村防疫員為其注射了狂犬病疫苗，其他農(nóng)民從來沒有給犬注射狂犬病疫苗的意識(shí)(見表2、表3)。

表2 城區(qū)動(dòng)物門診抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果 (%)

表3 農(nóng)村家養(yǎng)犬抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果 (%)

2.3 養(yǎng)犬者年齡與免疫率關(guān)系 通過在城區(qū)動(dòng)物醫(yī)院收集全血時(shí)的簡單調(diào)查，發(fā)現(xiàn)寵物養(yǎng)殖者的年齡因素對(duì)狂犬病免疫情況有一定影響，20～30歲是飼養(yǎng)寵物的主力人群，為犬注射疫苗也較為主動(dòng)，并且一般都是選擇進(jìn)口疫苗，在經(jīng)濟(jì)上沒有太多考慮。一般都是通過微博、微信等渠道了解的防疫知識(shí)，對(duì)前沿的防疫、飼養(yǎng)、訓(xùn)練等知識(shí)都能快速接受，這說明新媒體對(duì)宣傳推廣動(dòng)物防疫和養(yǎng)殖知識(shí)非常有效。而50歲以上的人群也是寵物養(yǎng)殖的主要群體，但對(duì)防疫知識(shí)了解的不多，動(dòng)物醫(yī)生反復(fù)講解也往往不能接受，選擇注射疫苗的不多，特別是對(duì)進(jìn)口疫苗的價(jià)格較為敏感，一般注射疫苗也選擇國產(chǎn)疫苗(見表4)。

2.4 不同疫苗的應(yīng)用 在選擇疫苗上，選擇進(jìn)口滅活苗的較多，選擇國產(chǎn)活疫苗的其次，國產(chǎn)滅活疫苗因?yàn)橥茝V原因，本地動(dòng)物醫(yī)院都沒有引進(jìn)，農(nóng)村2個(gè)村防疫員注射的國產(chǎn)滅活疫苗是當(dāng)?shù)貏?dòng)物防疫機(jī)構(gòu)用來推廣試驗(yàn)的。目前本溪?jiǎng)游镝t(yī)院用的狂犬疫苗只有進(jìn)口滅活苗和國產(chǎn)五聯(lián)活疫苗，從對(duì)動(dòng)物醫(yī)院調(diào)查了解來看，選擇用進(jìn)口苗的較多，價(jià)格也能接受，免疫效果好，免疫副反應(yīng)較少，寵物養(yǎng)殖者已經(jīng)普遍接受。而國產(chǎn)苗價(jià)格較便宜，一般狗場(chǎng)選擇較多，但時(shí)常有免疫副反應(yīng)發(fā)生(見表5)。

一些寵物養(yǎng)殖者到動(dòng)物醫(yī)院都說自己的犬在買回家之前進(jìn)行了狂犬病的免疫，但通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，一些狗場(chǎng)根本沒有做免疫，卻告訴購買者已經(jīng)免疫了，這也是造成本來沒免疫，但寵物養(yǎng)殖者認(rèn)為已經(jīng)免疫了，給疫情傳播埋下了隱患。

表5 應(yīng)用疫苗情況統(tǒng)計(jì)表 (%)

3 討論

（1）從抗體監(jiān)測(cè)情況看，本溪市市區(qū)動(dòng)物門診采集的犬血清抗體較高，陽性率在70%以上，而農(nóng)村抗體陽性率極低，基本沒有注射狂犬病疫苗的意識(shí)，這種情況說明開展犬的狂犬病強(qiáng)制免疫迫在眉睫，國內(nèi)大部分城市都已經(jīng)開展了狂犬病的強(qiáng)制免疫工作，都取得了很好的效果[3,4]。建議在本市立即開展家養(yǎng)動(dòng)物狂犬病免疫工作，并將免疫、注冊(cè)、健康檢查等納入犬的綜合管理措施當(dāng)中，使全市養(yǎng)犬活動(dòng)在規(guī)范的框架下運(yùn)轉(zhuǎn)，保障公共衛(wèi)生安全。（2）關(guān)于疫苗使用：WHO建議進(jìn)行大面積犬免疫接種時(shí)應(yīng)使用滅活苗，因?yàn)闇缁蠲绺踩淮嬖诙玖Ψ祻?qiáng)的現(xiàn)象，而且滅活苗對(duì)溫度的變化不敏感，更易于保存。進(jìn)口滅活苗在免疫效果上也比活疫苗好，周桂蘭等[5]研究發(fā)現(xiàn)，獸用狂犬病活疫苗免疫犬，連續(xù)免疫3次(每次間隔1個(gè)月)，3免2個(gè)月后血清抗體滴度達(dá)標(biāo)率100%，7個(gè)月后血清抗體滴度達(dá)標(biāo)率下降至25%，而進(jìn)口狂犬病滅活疫苗連續(xù)免疫3次(免疫間隔1年)，3免后1～3年血清抗體滴度達(dá)標(biāo)率100%。相對(duì)而言，獸用狂犬病活疫苗免疫犬血清抗體滴度下降快，持久力差。目前國內(nèi)生產(chǎn)的滅活疫苗的免疫效果和安全性也得到了印證，如遼寧成大生產(chǎn)的維瑞成狂犬病滅活苗免疫效果都得到了印證[6]，并且價(jià)格還比進(jìn)口滅活苗便宜。因此，建議開展狂犬病免疫時(shí)應(yīng)引進(jìn)國產(chǎn)滅活苗。（3）對(duì)于狂犬病的防治，應(yīng)著重加強(qiáng)對(duì)犬的免疫，只有做好了犬的免疫，才能從源頭上控制人感染狂犬病。各級(jí)政府應(yīng)將狂犬病的免疫納入本級(jí)財(cái)政預(yù)算，對(duì)該工作給予高度重視，才能切實(shí)防控好狂犬病，維護(hù)公共衛(wèi)生安全。

[1] 全國法定傳染病疫情概況. 中國疾控中心網(wǎng)站. http∶//www. hinacdc. cn/. 2016. 2. 18

[2] 夏咸柱. 加強(qiáng)動(dòng)物狂犬病防控研究從源頭上防控人類狂犬病[C]. 2010.

[3] 北京市動(dòng)物狂犬病的防控. 2012年中國狂犬病年會(huì)論文集[C]. 2012∶ 101-104.

[4] 劉佩紅, 屠益平, 趙洪進(jìn). 上海市犬類狂犬病防控現(xiàn)狀、問題及對(duì)策[J]. 上海畜牧獸醫(yī)通訊, 2014, 4∶ 85-87.

[5] 周桂蘭, 趙德明, ?？〗艿? 獸用狂犬病疫苗免疫犬的效果評(píng)價(jià)[J]. 中國獸醫(yī)雜志, 2007, 4∶ 50-53.

[6] 張曉華, 楊琪, 王慶波等. 狂犬病滅活疫苗PV2061株的免疫原性試驗(yàn)[J]. 中國獸醫(yī)雜志, 2014, 2∶ 30-31.

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2016–12–23）