孫汀，繆云萍，程敏，董文彬，葉小弟，陳愛(ài)瑛，鄭高利

（1.杭州佛蓮生物技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310000；2.浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，浙江 杭州 310013）

·實(shí)驗(yàn)研究·

葛陳膠囊對(duì)大鼠前列腺增生的防治作用

孫汀1，繆云萍2*，程敏2，董文彬2，葉小弟2，陳愛(ài)瑛2，鄭高利2

（1.杭州佛蓮生物技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310000；2.浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，浙江 杭州 310013）

目的探討葛陳膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠前列腺增生的防治作用。方法應(yīng)用尿生殖竇植入誘導(dǎo)雄性SD大鼠前列腺增生模型，隨機(jī)分為三組：BPH模型組，葛陳膠囊高、低劑量組，另設(shè)假手術(shù)組。假手術(shù)組和BPH模型組灌胃去離子水，葛陳膠囊組按體質(zhì)量灌胃葛陳膠囊混懸液高劑量1400mg/kg、低劑量700mg/kg，連續(xù)給藥28天，給藥后每周稱(chēng)大鼠體質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)結(jié)束取大鼠血清，檢測(cè)血清酸性磷酸酶活性；測(cè)定前列腺體質(zhì)量及體積；光鏡下觀察前列腺液卵磷脂小體密度和前列腺組織形態(tài)，同時(shí)結(jié)合圖像分析軟件進(jìn)行前列腺組織形態(tài)計(jì)量學(xué)分析。結(jié)果BPH模型組大鼠前列腺體積、體積指數(shù)、體質(zhì)量和體質(zhì)量指數(shù)顯著增加，卵磷脂小體密度明顯減少、前列腺組織間質(zhì)面積比例明顯增加（P＜0.01）；葛陳膠囊顯著降低大鼠前列腺體質(zhì)量和體質(zhì)量指數(shù)、體積和體積指數(shù)，部分恢復(fù)前列腺液卵磷脂小體密度（P＜0.01），并能降低前列腺組織間質(zhì)面積和比例、間質(zhì)面積/腺體面積比例（P＜0.05）；各組血清酸性磷酸酶活性無(wú)明顯變化（P＞0.05）。結(jié)論葛陳膠囊對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠前列腺增生具有防治作用。

葛陳膠囊；尿生殖竇；前列腺增生；形態(tài)計(jì)量學(xué)

良性前列腺增生（Benign Prostatic Hyperlasia，BPH）是老年男性的常見(jiàn)病，隨著我國(guó)人口的老齡化，患者人數(shù)逐年增加，其臨床表現(xiàn)為排尿費(fèi)力、尿線(xiàn)變細(xì)、尿頻、尿急等，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。臨床主要采用手術(shù)和藥物等方法，手術(shù)治療有很大的風(fēng)險(xiǎn)性，藥物療效不穩(wěn)定、有不良反應(yīng)等，使藥物治療常受到諸多限制。目前BPH的復(fù)方制劑日益受到關(guān)注，本研究以尿生殖竇植入誘導(dǎo)雄性SD大鼠前列腺增生模型，探討葛陳膠囊對(duì)大鼠前列腺增生的防治作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雄性SD大鼠43只，6個(gè)月齡，體質(zhì)量420～470g；清潔級(jí)SD孕鼠10只，懷孕19～20天，體質(zhì)量400～450g，動(dòng)物由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證：SCXK（浙）2009-0039，使用許可證：SYXK（浙）2011-0166；在浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心屏障環(huán)境飼養(yǎng)，環(huán)境溫度（23±2）℃，相對(duì)濕度60%～65%，攝食、飲水自由。

1.1.2 試劑與儀器 葛陳膠囊（杭州佛蓮生物技術(shù)有限公司），臨用時(shí)葛陳膠囊高劑量用去離子水配成14000mg/100mL，低劑量用去離子水對(duì)半稀釋?zhuān)蛔⑸溆们嗝顾剽c （華北制藥股份有限公司），批號(hào)01108101；戊巴比妥鈉（西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司），批號(hào)027K0752；酸性磷酸酶檢測(cè)試劑盒（上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司），批號(hào) P1202021。LIBRORAEL-200電子分析天平（日本imadzu公司）；Motic生物顯微圖像攝影系統(tǒng)和MoticAdverse3.2形態(tài)分析軟件（廈門(mén)麥克奧迪公司）；HM355S組織切片機(jī)（德國(guó)MICRO公司）；Mindray BA-88A型半自動(dòng)生化分析儀（深圳邁瑞公司）。

1.2 方法 前列腺增生大鼠模型的制備及分組。麻醉已孕大鼠，無(wú)菌操作取出胎鼠，在體視顯微鏡下打開(kāi)腹腔，取固有尿生殖竇，冷藏于4℃含抗生素及小牛血清的無(wú)菌RPMI 1640培養(yǎng)液中，3小時(shí)內(nèi)備用。另取雄性SD大鼠43只，隨機(jī)分為假手術(shù)組10只和造模組33只，大鼠麻醉后打開(kāi)腹腔，造模大鼠在膀胱腹側(cè)的前列腺組織內(nèi)植入完整尿生殖竇組織2個(gè)，假手術(shù)組僅用針頭探刺前列腺2次。大鼠常規(guī)飼養(yǎng)3天，造模組隨機(jī)分為三組，每組11只，即BPH模型組、葛陳膠囊高、低劑量組。葛陳膠囊高、低劑量組分別按1400、700mg/kg體質(zhì)量給藥，假手術(shù)組和BPH模型組灌胃等體積去離子水，灌胃1次/d，連續(xù)28天。

1.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè) 觀察各組大鼠的活動(dòng)狀況、精神狀態(tài)、毛色、食飲量、排便、體質(zhì)量等情況。大鼠末次給藥后24小時(shí)，麻醉大鼠，眼眶取全血分離血清，按試劑盒說(shuō)明檢測(cè)酸性磷酸酶活性。剝離前列腺組織，取前列腺液隨機(jī)選4個(gè)視野，100倍光鏡下計(jì)數(shù)卵磷脂小體個(gè)數(shù)，取平均值。用濾紙吸干前列腺表面血液后稱(chēng)其重量；參照文獻(xiàn)方法[1]，用排水法測(cè)量前列腺體積的變化。前列腺重量指數(shù)=前列腺重量（mg）/體質(zhì)量（g），前列腺體積指數(shù)=前列腺體積（μL）/體質(zhì)量（g）。前列腺用甲醛固定，石蠟切片，常規(guī)HE染色，鏡下觀察各組前列腺組織結(jié)構(gòu)，每張切片隨機(jī)捕獲2個(gè)視野（每個(gè)視野面積1480μm2），用Motic Adverse 3.2圖像處理分析系統(tǒng)，畫(huà)出前列腺腺管輪廓，系統(tǒng)則自動(dòng)產(chǎn)生此腺管（上皮外周）的面積和周長(zhǎng)，計(jì)數(shù)視野內(nèi)的腺管數(shù)量（在視野周邊有部分腺管不完整，則統(tǒng)一作為0.5個(gè)腺管計(jì)）。計(jì)算其它指標(biāo)：（1）腺管面積比例=腺管面積/視野面積 （1480μm2）×100%；（2）間質(zhì)面積（μm2）=視野面積（1480μm2）-腺管面積；間質(zhì)面積比例=間質(zhì)面積/視野面積 （1480μm2）× 100%；每個(gè)腺管平均面積（μm2）=腺管面積/腺管數(shù)量。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況 各組大鼠手術(shù)后1～2天，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，毛發(fā)泛黃且光澤減弱。經(jīng)過(guò)后期給藥和常規(guī)飼養(yǎng)，假手術(shù)組和葛陳膠囊組大鼠精神狀況較好，毛色有光澤，行動(dòng)敏捷，大、小便正常；BPH模型組大鼠反應(yīng)較遲鈍，毛色光澤較暗。各組大鼠體質(zhì)量持續(xù)增長(zhǎng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 葛陳膠囊對(duì)BPH模型大鼠體質(zhì)量的影響（s，g）

表1 葛陳膠囊對(duì)BPH模型大鼠體質(zhì)量的影響（s，g）

組別 n 0d 7d 14d 21d 28d假手術(shù)組 10 449±16 463±20 499±21 512±23 520±22 BPH模型組葛陳膠囊組高劑量低劑量11448±23481±27506±26518±30527±30 11 11 447±16 447±20 461±20 462±25 488±25 496±30 497±28 502±31 507±26 515±28

2.2 對(duì)大鼠血清ACP活性和前列腺液卵磷脂密度的影響 各組大鼠血清ACP活性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與假手術(shù)組比較，BPH模型組前列腺液卵磷脂密度明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與BPH模型組比較，葛陳膠囊組卵磷脂密度增加，高劑量組尤為明顯，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），詳見(jiàn)表2。

2.3 大鼠前列腺重量和重量指數(shù)、體積和體積指數(shù)的比較 與假手術(shù)組相比，BPH模型組大鼠的前列腺重量和重量指數(shù)、體積和體積指數(shù)均顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），說(shuō)明模型制備成功；經(jīng)藥物干預(yù)后，葛陳膠囊能顯著降低BPH模型組大鼠前列腺組織的上述指標(biāo)。見(jiàn)表3。

表2 葛陳膠囊對(duì)BPH模型大鼠血清ACP活性和卵磷脂小體密度的影響（s）

表2 葛陳膠囊對(duì)BPH模型大鼠血清ACP活性和卵磷脂小體密度的影響（s）

與BPH模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與假手術(shù)組比較△△P＜0.01

組別 n 血清ACP（U/L）卵磷脂小體密度（個(gè)）假手術(shù)組 10 4.36±2.25 10.80±2.35 BPH模型組 11 6.01±1.48 4.87±1.46△△葛陳膠囊組高劑量低劑量11 6.27±4.38 6.64±1.60**11 5.69±3.26 6.20±1.70*

表3 葛陳膠囊對(duì)BPH模型大鼠前列腺重量和重量指數(shù)、體積和體積指數(shù)的影響（s）

表3 葛陳膠囊對(duì)BPH模型大鼠前列腺重量和重量指數(shù)、體積和體積指數(shù)的影響（s）

與BPH模型組比較**P＜0.01；與假手術(shù)組比較△△P＜0.01

組別 n 重量（mg） 重量指數(shù)（mg/g） 體積（μL） 體積指數(shù)（μL/g）假手術(shù)組 10 1260±117 2.47±0.29 1154±92 2.26±0.24 BPH模型組 11 1528±202△△2.96±0.46△△1380±165△△2.72±0.38△△葛陳膠囊組高劑量低劑量11 11 1203±115**1245±182**2.43±0.24**2.49±0.39**1089±110**1165±178**2.21±0.22**2.33±0.38**

2.4 對(duì)大鼠前列腺形態(tài)結(jié)構(gòu)和形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響

假手術(shù)組腺體排列緊密，間質(zhì)纖維不明顯，腺上皮細(xì)胞呈單層立方柱狀，部分有較小乳頭狀內(nèi)突；BPH模型組出現(xiàn)非常明顯的間質(zhì)增生，腺上皮較多乳頭狀內(nèi)突，腺腔形狀不規(guī)則；葛陳膠囊高劑量組間質(zhì)增生明顯減少，部分腺體腺上皮細(xì)胞乳頭狀內(nèi)突；葛陳膠囊低劑量組間質(zhì)增生減少，腺體大小不勻。見(jiàn)圖1。由表4顯示，各組前列腺腺管的平均面積和每視野的腺管總數(shù)未見(jiàn)明顯差異，說(shuō)明前列腺腺管無(wú)明顯擴(kuò)張。與假手術(shù)組比較，BPH模型組大鼠前列腺組織間質(zhì)面積比例明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與BPH模型組比較，葛陳膠囊組明顯降低間質(zhì)面積和比例及間質(zhì)面積/腺管面積比例，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 葛陳膠囊對(duì)BPH模型大鼠前列腺形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響（1A：假手術(shù)組；1B：BPH模型組；1C：葛陳膠囊高劑量組；1D：葛陳膠囊低劑量組）（HE×100）

表4 葛陳膠囊對(duì)BPH模型大鼠前列腺形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響（s）

表4 葛陳膠囊對(duì)BPH模型大鼠前列腺形態(tài)計(jì)量學(xué)的影響（s）

與BPH模型組比較*P＜0.05；與假手術(shù)組比較△△P＜0.01

組別 n 間質(zhì)面積（μm2） 間質(zhì)面積比例（%） 腺管面積（μm2）假手術(shù)組 10 568±93 38.4±6.3 912±93 BPH模型組 11 699±108△△47.3±7.3△△781±108△△葛陳膠囊組高劑量低劑量11 11 598±119*615±100*40.4±8.0*41.6±6.8*882±119*865±100*

續(xù)表4

3 討論

良性前列腺增生癥（又稱(chēng)前列腺肥大），是引起中老年男性排尿障礙中最為常見(jiàn)的一種慢性進(jìn)展性疾病。其主要表現(xiàn)在組織學(xué)上的前列腺間質(zhì)和腺體成分的增生[2]。中醫(yī)認(rèn)為BPH主要是濕熱蘊(yùn)結(jié)、脾腎氣虛、氣滯血瘀，肺、脾、腎三臟功能失調(diào)引起，而補(bǔ)氣助氣、行瘀散結(jié)、通利水道為本病的治療原則[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，補(bǔ)腎益氣、活血化瘀、除濕清熱和通利水道藥物能改善人體血液循環(huán)，解除粘連，消除組織增生。

葛陳膠囊，由葛根、陳皮 、黃芩、枳 子、牡蠣、滑石組成。葛根擴(kuò)張血管和改善微循環(huán)；陳皮理氣健脾、燥濕化痰[4]；黃芩益氣健脾、利尿[5]，臨床有不少報(bào)道將黃芩作為主藥入復(fù)方治療前列腺增生，臨床療效良好[6-7]；枳 子味甘性平，降壓利尿、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜[8]；牡蠣軟堅(jiān)散結(jié)、化瘀散結(jié)[9]、滑石清熱利濕。葛陳膠囊具有行瘀散結(jié)，清熱利濕，通利小便的功效，通過(guò)調(diào)節(jié)整體防治和改善前列腺增生，毒副作用小。

人類(lèi)BPH主要表現(xiàn)為前列腺間質(zhì)增生，包括平滑肌、結(jié)締組織及膠原纖維等基質(zhì)主要組成成分的良性擴(kuò)張，同時(shí)還伴隨著腺腔比例的下降[10]。申青等[11]通過(guò)對(duì)未分化胎鼠尿生殖竇植入誘導(dǎo)大鼠BPH發(fā)生，應(yīng)用形態(tài)計(jì)量學(xué)及免疫組化染色分析前列腺其組織成分變化，結(jié)果顯示該模型與人類(lèi)BPH的病理特點(diǎn)相似度較高。

本文實(shí)驗(yàn)研究通過(guò)復(fù)制生殖竇植入誘導(dǎo)大鼠BPH模型，結(jié)果表明各組體質(zhì)量無(wú)明顯變化。與假手術(shù)組比較，前列腺增生模型組大鼠前列腺體質(zhì)量和體質(zhì)量指數(shù)、體積和體積指數(shù)顯著增加，卵磷脂小體密度明顯減少，鏡下觀察和圖像分析軟件檢測(cè)顯示前列腺組織間質(zhì)面積比例明顯增加，腺管增生不明顯，模型以間質(zhì)增生為主。模型大鼠經(jīng)藥物干預(yù)后，葛陳膠囊（1400mg/kg、700mg/kg）可顯著降低模型大鼠前列腺體質(zhì)量和體質(zhì)量指數(shù)、體積和體積指數(shù)，卵磷脂小體密度部分恢復(fù)，明顯降低前列腺間質(zhì)的面積和比例及間質(zhì)面積/腺管面積比例，但對(duì)大鼠前列腺腺管的平均面積和每視野的腺管總數(shù)無(wú)明顯影響。

前列腺增生以前列腺組織體積增大為關(guān)鍵特征，前列腺體質(zhì)量和體積直接反應(yīng)前列腺增生程度，是最客觀的指標(biāo)。本文實(shí)驗(yàn)研究顯示葛陳膠囊對(duì)尿生殖竇植入致大鼠前列腺增生模型的體質(zhì)量、體積、間質(zhì)增生有較好的抑制作用。綜上所述，葛陳膠囊對(duì)前列腺增生大鼠前列腺具有一定的防治作用，為葛陳膠囊治療人類(lèi)前列腺增生提供了理論依據(jù)。

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*為通訊作者，E-mail:miaoyp70@163.com