白孟麟，李勝，夏梅

(1南昌大學(xué)江西醫(yī)學(xué)院瑪麗女王學(xué)院，南昌330006；2山東大學(xué)附屬山東省腫瘤醫(yī)院；3山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院；4山東省藥物研究院)

腎癌循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)及其臨床意義的研究現(xiàn)狀

白孟麟1，李勝2,3，夏梅4

(1南昌大學(xué)江西醫(yī)學(xué)院瑪麗女王學(xué)院，南昌330006；2山東大學(xué)附屬山東省腫瘤醫(yī)院；3山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院；4山東省藥物研究院)

腎癌是臨床上較為常見的惡性腫瘤。由于早期癥狀不明顯，約30%的腎癌患者在確診時(shí)已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)是腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的重要步驟，循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)是指脫離原發(fā)病灶并進(jìn)入外周血循環(huán)系統(tǒng)的一類細(xì)胞。目前已經(jīng)報(bào)道的CTCs檢測(cè)技術(shù)有50余種，其中應(yīng)用較為廣泛的方法為RT-PCR法及CellSearch法，近年新開展的微流體芯片法和eTumorType法表現(xiàn)出了較高的檢出率，具有較好的應(yīng)用前景。研究提示，外周血CTCs水平可以用于判斷腎癌患者的臨床分期和評(píng)估預(yù)后，在腫瘤的早期微轉(zhuǎn)移中具有重要作用。

腎細(xì)胞癌；循環(huán)腫瘤細(xì)胞；腫瘤轉(zhuǎn)移；檢測(cè)方法；預(yù)后

腎細(xì)胞癌(RCC)是一種較常見的惡性腫瘤，2015年，中國(guó)共有6.68萬例新增腎癌患者，約2.34萬人因腎癌死亡[1]。轉(zhuǎn)移是腎癌患者死亡的主要原因，Ⅳ期RCC患者的5年生存率僅為11.7%，顯著低于Ⅰ期患者的92.6%[2]。但由于腎癌的早期癥狀不明顯，30%左右的患者在被確診腎癌時(shí)都已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此，找到一種能反映腫瘤細(xì)胞早期轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)記物一直是近年來RCC研究的熱點(diǎn)。經(jīng)血液循環(huán)進(jìn)行轉(zhuǎn)移是腎癌轉(zhuǎn)移灶形成的重要途徑。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)是指人體中脫離原發(fā)病灶并進(jìn)入外周血循環(huán)系統(tǒng)的一類細(xì)胞，這些細(xì)胞在人體血液系統(tǒng)中伴隨血液進(jìn)行循環(huán)，可以在脫離血液循環(huán)后形成新的轉(zhuǎn)移灶。由于CTCs在腫瘤的早期微轉(zhuǎn)移中具有重要作用，CTCs的檢測(cè)和分析對(duì)腫瘤微轉(zhuǎn)移的發(fā)現(xiàn)、療效評(píng)價(jià)及預(yù)后評(píng)估等方面有重要意義[3]。本文對(duì)CTCs檢測(cè)技術(shù)在腎癌領(lǐng)域中應(yīng)用及其臨床意義的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 CTCs概述

1867年，澳大利亞醫(yī)學(xué)家Ashworth首次在1例死亡腫瘤患者的外周血中發(fā)現(xiàn)了與腫瘤細(xì)胞類似的血細(xì)胞，由此提出了CTCs的概念。CTCs是人體中脫離最初病灶進(jìn)入外周血的腫瘤細(xì)胞，一般認(rèn)為腫瘤細(xì)胞在經(jīng)歷過上皮間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)換(EMT)的過程后，獲得了脫離原發(fā)病灶并進(jìn)行轉(zhuǎn)移入侵的能力。在進(jìn)入血液循環(huán)后，只有極少部分CTCs能夠逃過機(jī)體免疫監(jiān)視，并最終穿越內(nèi)皮細(xì)胞層脫離外周血管，來到其他臟器的微環(huán)境中。小部分脫離血液循環(huán)的CTCs可以安全度過靜止期，并最終在多種細(xì)胞因子的作用下形成新的轉(zhuǎn)移病灶。CTCs可以來自于腫瘤的原發(fā)病灶或轉(zhuǎn)移病灶，作為一種腫瘤生物標(biāo)記物具有較為豐富的應(yīng)用價(jià)值，包括腫瘤微轉(zhuǎn)移的早期發(fā)現(xiàn)、判斷疾病分期、預(yù)后評(píng)估以及指導(dǎo)治療等。在臨床實(shí)踐中，在外周血中發(fā)現(xiàn)CTCs并不一定反映患者一定發(fā)生了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，但卻可提示發(fā)生轉(zhuǎn)移的可能性大大增加，從而可以對(duì)患者采取更為積極的治療策略。外周血CTCs具有較強(qiáng)的特異性且含量極少，一般每106～107個(gè)血細(xì)胞中才含有一個(gè)CTCs。這對(duì)外周血CTCs檢測(cè)技術(shù)的敏感度提出了較高的要求，一直到20世紀(jì)末期，外周血CTCs檢測(cè)才逐漸被應(yīng)用在臨床中[4]。

2 腎癌患者外周血CTCs檢測(cè)方法

在一些惡性腫瘤(如乳腺癌、膀胱癌等)中，外周血CTCs的檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)相對(duì)成熟，但關(guān)于腎癌患者外周血CTCs檢測(cè)的研究則相對(duì)較少。目前報(bào)道的對(duì)腎癌患者外周血CTCs的檢測(cè)方法包括RT-PCR法、CellSearch法、免疫磁珠分選法(MACS)、尺寸排除法、流式細(xì)胞法、丫啶橙熒光染色法(AO-F)、微流體芯片法以及結(jié)合計(jì)算機(jī)算法的eTumorType等，其中應(yīng)用較為廣泛的方法為RT-PCR法及CellSearch法。

2.1 RT-PCR法 RT-PCR技術(shù)是一種通過檢測(cè)腫瘤特異性標(biāo)記物mRNA的表達(dá)情況來推斷CTCs水平的方法。RT-PCR法是第一批用于檢測(cè)腎癌患者外周血CTCs的方法之一，在1999年，McKiernan等[5]以一種在透明細(xì)胞癌中廣泛表達(dá)的基因碳酸酐酶9(CAIX)的 mRNA作為檢測(cè)標(biāo)志物，發(fā)現(xiàn)該方法對(duì)腎透明細(xì)胞癌診斷的敏感度和特異度分別為50%、98.2%。除CAIX mRNA外，鈣黏蛋白6(CDH6)的mRNA也可以作為外周血CTCs的檢測(cè)標(biāo)志物。Shimazui等[6]報(bào)道，在87例各分期的腎癌患者中，外周血CDH6 mRNA的檢出率為52.9%。RT-PCR法在檢測(cè)外周血CTCs方面表現(xiàn)出一定的敏感度和特異度，但是該方法目前尚無統(tǒng)一的標(biāo)志物，且除早期文獻(xiàn)外并無新的文獻(xiàn)報(bào)道。除此之外，該方法在應(yīng)用時(shí)需要破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)來提取mRNA，限制了對(duì)檢出的CTCs進(jìn)行進(jìn)一步計(jì)數(shù)和形態(tài)學(xué)分析的可能性，因此盡管RT-PCR法起步較早，但其一直未被批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床。

2.2 CellSearch法 CellSearch檢測(cè)系統(tǒng)(CSS)是惟一經(jīng)FDA批準(zhǔn)，可以用于對(duì)乳腺癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤進(jìn)行療效監(jiān)測(cè)和預(yù)后評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法。在檢測(cè)過程中，患者血樣中的CTCs和白細(xì)胞首先被含有抗上皮細(xì)胞黏質(zhì)因子(EpCAM)抗體的磁鐵流體富集，富集的CTCs和白細(xì)胞進(jìn)而分別被CK8/18/19抗體及CD45抗體標(biāo)記，并使用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)進(jìn)行核染，最后篩選出的EpCAM+/CK+/DAPI+/CD45-細(xì)胞被標(biāo)記為CTCs。Allard等[7]在對(duì)CellSearch法進(jìn)行評(píng)估時(shí)發(fā)現(xiàn)，盡管在乳腺癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤中，CSS表現(xiàn)出較高的檢出率，但RCC患者的外周血CTCs檢出率僅為25%。而在漢族人群中，腎癌患者的外周血CTCs檢出率同樣偏低，僅為12.5%[8]。

CellSearch法的低CTCs檢出率與腎癌細(xì)胞較低的EpCAM表達(dá)水平有關(guān)。作為一種上皮細(xì)胞癌，腎癌細(xì)胞在經(jīng)歷EMT過程后，表面的EpCAM抗原含量急劇減少，在透明細(xì)胞癌患者中，EpCAM的檢出率僅為20%～40%[9]。而Gradilone等[10]使用RT-PCR法對(duì)腎癌患者外周血的CK8/18/19及CD44水平進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)腎癌患者的腫瘤細(xì)胞具有較低的CK8/18/19表達(dá)水平及較高的CD44表達(dá)水平，但具體原因尚不明確，需要進(jìn)一步研究。

2.3 其他方法 腎癌細(xì)胞較低的EpCAM表達(dá)推動(dòng)了一系列替代方法的研究，如免疫磁珠負(fù)性分選法[11,12]、尺寸排除法[13]、微流體芯片法[14]、丫啶橙染色法[15,16]、eTumorType法[17]和流式細(xì)胞法[18]等。在這些方法中，微流體芯片法和eTumorType法表現(xiàn)出了較高的檢出率，具有較好的應(yīng)用前景。

微流芯片法是Liu等[14]于2016年提出的一套基于腎癌細(xì)胞的特異性標(biāo)志物CAIX和CD147的正性分選法。該法的裝置包含了一個(gè)混沌混合裝置以及覆蓋了抗CAIX及CD147抗體的納米線基板。在對(duì)CTC進(jìn)行分選之前，Liu等對(duì)透明細(xì)胞癌中CAIX和CD147的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)97.1%的透明腎細(xì)胞腫瘤都呈CAIX/CD147陽(yáng)性，而僅有18.6%呈EpCAM陽(yáng)性；之后對(duì)76例腎癌患者和15例健康志愿者的外周血樣的分析提示，該系統(tǒng)的檢出率和特異性分別為94.7%和86.7%。

在2017年由Zou等[17]提出的eTumorType算法是另一個(gè)具有廣泛前景的CTCs檢測(cè)方法。該算法根據(jù)400余例腎癌患者的SNP數(shù)據(jù)，通過對(duì)細(xì)胞基因復(fù)制數(shù)變異(CNV)的分析來對(duì)外周血CTCs的含量進(jìn)行檢測(cè)。在腎癌CTCs的分析中，該方法表現(xiàn)出90%左右的檢出率，具有較高的檢出率，但仍缺乏后續(xù)研究。

但CTCs檢測(cè)技術(shù)仍需面對(duì)很多問題。如各項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)并無統(tǒng)一的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，致使不同方法之間CTCs的檢出結(jié)果相差巨大；目前尚缺乏對(duì)CTCs檢測(cè)與其臨床應(yīng)用價(jià)值的大樣本實(shí)驗(yàn)，CTCs檢測(cè)技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值不能得到有效的證實(shí)；除此之外還需注意的是，CTCs與腎癌患者發(fā)生進(jìn)展或轉(zhuǎn)移的機(jī)制原理尚不清晰，還亟待進(jìn)一步的細(xì)胞學(xué)研究進(jìn)行分析。

3 腎癌CTCs檢測(cè)的臨床意義

3.1 CTCs在臨床分期與輔助診斷中的應(yīng)用價(jià)值 研究發(fā)現(xiàn)，腎癌患者的5年生存率與臨床分期存在較強(qiáng)的相關(guān)性，Ⅰ期患者的生存率高達(dá)90%以上，而發(fā)生轉(zhuǎn)移的Ⅳ期患者的5年生存率僅為11.7%?？梢娕R床分期是影響腎癌患者預(yù)后的重要因素，準(zhǔn)確判斷腎癌患者的臨床分期對(duì)提高患者的生存率具有關(guān)鍵作用。在臨床上，相較于傳統(tǒng)的檢測(cè)方法如影像學(xué)檢查等，CTCs檢測(cè)具有對(duì)早期腫瘤微轉(zhuǎn)移檢出率高、無創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)[19,20]。大量研究已經(jīng)證實(shí)了CTCs檢測(cè)可用于協(xié)助判斷腫瘤患者臨床分期。Shimazui等于2003年使用RT-PCR法對(duì)87名腎癌患者的外周血CTCs檢測(cè)標(biāo)記物CDH6 mRNA表達(dá)情況進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)M1期患者的檢出率顯著高于M0期。Bluemke等在使用免疫磁珠分選法對(duì)154例腎癌患者的外周血CTCs水平進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，患者的CTCs檢出率與淋巴結(jié)狀態(tài)(N分期)和轉(zhuǎn)移(M分期)情況具有顯著相關(guān)性。劉敏等[15]和張濤等[18]分別應(yīng)用丫啶橙熒光染色法和流式細(xì)胞法對(duì)27例健康對(duì)照和50例腎癌患者的外周血CTCs水平進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)患者的T分期與CTCs檢出率顯著正相關(guān)。

以上研究雖然表明腎癌患者的CTCs檢出情況與患者的臨床分期存在相關(guān)性，但由于其檢測(cè)方法的檢出率普遍較低，在臨床上應(yīng)用價(jià)值有限。Liu等[14]于2016年提出的微流芯片法是一種具有廣泛適用性的方法，除了具有較高的CTCs檢出率(94.7%)外，還發(fā)現(xiàn)當(dāng)結(jié)合腫瘤標(biāo)記物CK8/18/19與Vimentin進(jìn)行陽(yáng)性篩選時(shí)，Ⅲ、Ⅳ期腎癌患者的CTCs檢出量較Ⅰ、Ⅱ期患者高1.2倍，且Ⅳ期患者的CTCs檢出量顯著高于Ⅲ期患者，表明患者的外周血CTCs計(jì)數(shù)與其臨床分期明顯相關(guān)?？梢娫谀I癌診療中，患者的CTCs檢出情況可以反映患者疾病的發(fā)展趨勢(shì)，作為臨床診斷的有益補(bǔ)充，對(duì)腫瘤早期轉(zhuǎn)移的發(fā)現(xiàn)具有重要意義。

3.2 CTCs與腎癌患者的預(yù)后評(píng)估 預(yù)后評(píng)估是目前CTCs應(yīng)用最為廣泛的領(lǐng)域之一。研究指出，CTCs可以被作為腫瘤治療領(lǐng)域的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)。目前關(guān)于CTCs檢測(cè)技術(shù)對(duì)腫瘤患者進(jìn)行預(yù)后評(píng)估的報(bào)道[21,22]較為多見，但在腎癌領(lǐng)域仍缺乏相關(guān)報(bào)道。Gilbert等[23]應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對(duì)41例進(jìn)行腎臟切除術(shù)前的患者外周血CTCs標(biāo)記物CAIX mRNA表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，檢出率為31.7%，隨訪調(diào)查發(fā)現(xiàn)，CAIX mRNA陽(yáng)性的腎癌患者相較于陰性患者表現(xiàn)出了更低的5年無病生存率。Shimazui等[24]使用RT-PCR法檢測(cè)了55例腎癌患者的外周血CTCs標(biāo)記物CDH6 mRNA表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在CDH6 mRNA陽(yáng)性的腎癌患者中，33.33%出現(xiàn)了疾病復(fù)發(fā)，而陰性患者的復(fù)發(fā)率僅為7.14%，陰性患者表現(xiàn)出了更長(zhǎng)的無復(fù)發(fā)存活時(shí)間。Bluemke等[12]對(duì)154例腎癌患者通過免疫磁珠分選法分別篩選出CD45陰性和CK陽(yáng)性的細(xì)胞，隨訪發(fā)現(xiàn)CK陽(yáng)性的CTC檢出率與患者的預(yù)后情況存在正相關(guān)性，CK陽(yáng)性的CTCs是腎癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。結(jié)合之前所論述的關(guān)于CTCs檢測(cè)在判斷患者病理分期中的應(yīng)用價(jià)值，CTCs的檢出情況可以作為判斷腎癌患者預(yù)后的輔助信息，比傳統(tǒng)的影像學(xué)檢查更加快速、及時(shí)的評(píng)估患者預(yù)后。

3.3 CTCs與個(gè)性化治療的指導(dǎo) 在乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌等腫瘤中，CTCs被廣泛應(yīng)用于指導(dǎo)個(gè)體化治療[25,26]。由于CTCs來自腫瘤組織，因此可以較為完整地反映機(jī)體腫瘤的形態(tài)學(xué)和遺傳學(xué)特征，包括其分化程度及組織學(xué)亞型等。相較于傳統(tǒng)的穿刺取樣，對(duì)外周血CTCs的分離和檢測(cè)可以在無創(chuàng)的情況下實(shí)現(xiàn)對(duì)患者腫瘤細(xì)胞的分析。除此之外，由于CTCs可以來自原發(fā)灶和繼發(fā)灶，因此CTCs檢測(cè)可以更全面反映患者體內(nèi)腫瘤的生物學(xué)特性，可以用于協(xié)助對(duì)患者制定更為全面的治療方案[27]。

CTCs檢測(cè)水平的改變亦可以反映腫瘤對(duì)不同治療措施的敏感程度。陳業(yè)剛等[28]研究發(fā)現(xiàn)，一部分被判斷為早期分期的腎癌患者在進(jìn)行腎切除術(shù)后仍然出現(xiàn)了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，而這部分患者的術(shù)前CTCs水平一般明顯高于未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者，且其CTCs水平在經(jīng)過抗血管生成的靶向治療后會(huì)出現(xiàn)明顯下降，由此認(rèn)為早期腎癌患者中較高的CTCs水平可以作為是否需要在術(shù)前進(jìn)行抗血管生成靶向治療的選擇標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，近年來CTCs檢測(cè)在腎癌的檢測(cè)和治療領(lǐng)域取得了一系列進(jìn)步。CTCs檢測(cè)技術(shù)在腎癌患者的分期評(píng)估、預(yù)后判斷以及個(gè)性化治療指導(dǎo)等領(lǐng)域表現(xiàn)出了較強(qiáng)的指導(dǎo)作用，提供了一種特異性強(qiáng)、檢出率高的CTCs檢測(cè)方法。

[1] Chen W, Zheng R, Baade PD, et al. Cancer statistics in China, 2015[J]. CA Cancer J Clin, 2016,66(2):115-132.

[2] Siegel R, Miller K, Jemal A. Cancer statistics, 2015[J]. CA Cancer J Clin, 2015,65(1):29.

[3] Joosse SA, Gorges TM, Pantel K. Biology, detection, and clinical implications of circulating tumor cells[J]. EMBO Mol Med, 2015, 7(1):1-11.

[4] Stevens GL, Scheer WD, Levine EA. Detection of tyrosinase mRNA from the blood of melanoma patient′s mRNA the Blood Patients[J]. Cancer Epide Prevent Bio, 1996,5(4):293-296.

[5] McKiernan JM, Buttyan R, Bander NH, et al. The detection of renal carcinoma cells in the peripheral blood with an enhanced reverse transcriptase-polymerase chain reaction assay for MN/CA9[J]. Cancer, 1999,68(3):492-497.

[6] Shimazui T, Yoshikawa K, Uemura H, et al. Detection of cadherin-6 mRNA by nested RT-PCR as a potential marker for circulating cancer cells in renal cell carcinoma[J]. Inter J Oncology, 2003,23(4):1049-1054.

[7] Allard WJ, Matera J, Miller MC, et al. Tumor cells circulate in the peripheral blood of all major carcinomas but not in healthy subjects or patients with nonmalignant diseases tumor cells circulate in the peripheral blood of all major carcinomas but not in healthy subjects or patients with non[J]. Clin Cancer Res, 2005,10(10):6897-6904.

[8] 周春.應(yīng)用Cell-search System檢測(cè)腎癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞的方法探索[D]. 北京:協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院,2012.

[9] Zimpfer A, Maruschke M, Rehn S, et al. Prognostic and diagnostic implications of epithelial cell adhesion/activating molecule (EpCAM) expression in renal tumours: a retrospective clinicopathological study of 948 cases using tissue microarrays[J]. BJU Int, 2014,114(2):296-302.

[10] Gradilone A, Iacovelli R, Cortesi E, et al. Circulating tumor cells and suspicious objects evaluated through CellSearch in metastatic renal cell carcinoma[J]. Antican Res, 2011,31(12):4219-4221.

[11] Blümke K, Bilkenroth U, Schmidt U, et al. Detection of circulating tumor cells from renal carcinoma patients: experiences of a two-center study[J]. Oncol Reports, 2005,14(4):895-899.

[12] Bluemke K, Bilkenroth U, Meye A, et al. Detection of circulating tumor cells in peripheral blood of patients with renal cell carcinoma correlates with prognosis[J]. Cancer Epidem Biomark Prev, 2009,18(8):2190-2194.

[13] El-Heliebi A, Kroneis T, Zhrer E, et al. Are morphological criteria sufficient for the identification of circulating tumor cells in renal cancer[J]. J Transl Med, 2013,11:214.

[14] Liu S, Tian Z, Zhang L, et al. Combined cell surface carbonic anhydrase 9 and CD147 antigens enable high-efficiency capture of circulating tumor cells in clear cell renal cell carcinoma patients[J]. Oncotarget, 2016,7(37):1-15.

[15] 劉敏，馬富玲. 吖啶橙熒光染色法在循環(huán)腫瘤細(xì)胞篩查中的應(yīng)用[J].天津醫(yī)藥,2015,43(7):792-795.

[16] Liu M, Li R, Tang Y, et al. New applications of the acridine orange fluorescence staining method: Screening for circulating tumor cells[J]. Oncology Lett, 2017,13(4):2221-2229.

[17] Zou J, Wang E. Etumortype, an algorithm of discriminating cancer types for circulating tumor cells or cell-free dnas in blood[J]. Geno Proteo Bioinfor, 2017,15(2):130-140.

[18] 張濤，阿力木·熱合曼，侯軍麗. 腎癌外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的篩查研究[J].山西醫(yī)藥雜志,2014,43(12):1347-1349.

[19] Budd GT, Cristofanilli M, Ellis MJ, et al. Circulating tumor cells versus imaging predicting overall survival in metastatic breast cancer[J]. Clin Can Res, 2006,12(21):6403-6409.

[20] Wiedswang G, Borgen E, Schirmer C, et al. Comparison of the clinical significance of occult tumor cells in blood and bone marrow in breast cancer[J]. Int J Cancer, 2006,118(8):2013-2019.

[21] Zhang Y, Lv Y, Niu Y, et al. Role of circulating tumor cell (ctc) monitoring in evaluating prognosis of triple-negative breast cancer patients in china[J]. Med Sci Monit, 2017,23:3071-3079.

[22] Onstenk W, de Klaver W, de Wit R, et al. The use of circulating tumor cells in guiding treatment decisions for patients with metastatic castration-resistant prostate cancer[J]. Can Treat Revi, 2016,46:42-50.

[23] Gilbert SM, Whitson JM, Mansukhani M, et al. Detection of carbonic anhydrase-9 gene expression in peripheral blood cells predicts risk of disease recurrence in patients with renal cortical tumors[J]. Urology, 2006,67(5):942-945.

[24] Shimazui T, Yoshikawa K, Uemura H, et al. The level of cadherin-6 mRNA in peripheral blood is associated with the site of metastasis and with the subsequent occurrence of metastases in renal cell carcinoma[J]. Cancer, 2004,101(5): 963-968.

[25] Meng S, Tripathy D, Shete S, et al. HER-2 gene amplification can be acquired as breast cancer progresses[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2004,101(25):9393-9398.

[26] Marchetti A, Del Grammastro M, Felicioni L, et al. Assessment of EGFR mutations in circulating tumor cell preparations from NSCLC patients by next generation sequencing: Toward a real-time liquid biopsy for treatment[J]. PLoS One, 2014,9(8):e103883.

[27] Comen E, Norton L, Massagué J. Clinical implications of cancer self-seeding[J]. Nat Rev Clin Oncol, 2011,8(6):369-377.

[28] 陳業(yè)剛，劉曉強(qiáng).腎癌患者循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究進(jìn)展[J].中國(guó)腫瘤臨床,2011,38(3):175-178.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.46.033

R737.11

A

1002-266X(2017)46-0103-04

山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥衛(wèi)生科技創(chuàng)新工程。

夏梅(E-mail： 1005790425@qq.com)

2017-08-07)