孫 磊 （山東省龍口市畜牧管理辦公室 265701）

李祥林 （山東省龍口市下丁家鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站）

蛋雞馬立克氏病的診治

孫 磊 （山東省龍口市畜牧管理辦公室 265701）

李祥林 （山東省龍口市下丁家鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站）

馬立克氏病(MD)是由馬立克氏病病毒(MDV)引起的以淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的病毒性疾病[1]，主要表現(xiàn)為外周神經(jīng)以及其它器官與組織的單核細(xì)胞浸潤(rùn)，包括虹膜與皮膚，主要引起神經(jīng)癥狀以及內(nèi)臟腫瘤[2]。該病能損傷雞體的免疫器官，導(dǎo)致免疫抑制，易并發(fā)其它疾病[3]。該病不能從雞只傳染給人，但是雞只之間可以相互傳播 。因此保持環(huán)境清潔尤為重要。目前該病毒分為強(qiáng)毒，超強(qiáng)毒，特超強(qiáng)毒。 特超強(qiáng)毒可導(dǎo)致雞群100%的死亡率。目前，全球每年因該病造成的損失高達(dá)9.4億美元,引起養(yǎng)禽業(yè)的高度重視[4]。2016年6月，山東省煙臺(tái)市某雞場(chǎng)爆發(fā)疫情，筆者對(duì)送檢極度消瘦的病雞進(jìn)行剖檢觀察到各臟器出現(xiàn)大小不等的灰白色、油脂樣腫瘤結(jié)節(jié)，法氏囊萎縮，部分雞出現(xiàn)“劈叉”的經(jīng)典癥狀；經(jīng)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，證實(shí)引起該雞群大量死亡的直接原因是馬立克氏病毒感染，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。現(xiàn)將診斷情況報(bào)告如下。

1 臨床表現(xiàn)

該雞場(chǎng)共飼養(yǎng)5000只蛋雞，在1日齡時(shí)，接種火雞皰疹病毒疫苗。45日齡時(shí)，部分雞只出現(xiàn)精神沉郁，昏昏欲睡，羽毛松亂，采食困難，消瘦。皮膚表面出現(xiàn)鼓包，隨后結(jié)痂。隨著病情的增加，由于病毒侵害神經(jīng)系統(tǒng)，雞只出現(xiàn)馬立克氏病的經(jīng)典癥狀，腿一前一后呈“劈叉”狀。最終由于采食困難，死亡。截止送檢(4日齡)，已有15%的雞只死亡。

2 剖檢變化

剖檢了6只送檢的即將死亡的病雞。6只雞均有不同程度的內(nèi)臟淋巴瘤，分別分布在肝臟，脾臟，腎臟，心臟等器管且均伴有胸腺及法氏囊嚴(yán)重萎縮。其中4只雞坐骨神經(jīng)，臂神經(jīng)以及迷走神經(jīng)腫大，暗黃，橫紋消失，且此4只雞在剖檢前有跛行行為。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 病毒分離 在進(jìn)行病雞剖檢前，無(wú)菌翅靜脈抗凝采血1ml，混勻后200rpm離心15min，小心吸取淋巴細(xì)胞層，棄去紅細(xì)胞，顯微鏡下計(jì)數(shù)。接種1萬(wàn)個(gè)淋巴細(xì)胞于原代雞胚成纖維細(xì)胞上。次日換液。于5%CO2，37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

2 顯微鏡觀測(cè)

1周左右，顯微鏡下可看到類(lèi)似于葡萄串狀的突起且細(xì)胞變圓變亮。該細(xì)胞病變?yōu)轳R立克氏病病毒體外培養(yǎng)引起的嗜斑。

3 間接免疫熒光試驗(yàn)

為了進(jìn)一步確證該病毒為馬立克氏病病毒，進(jìn)行了間接免疫熒光試驗(yàn)。用固定液(丙酮:乙醇)將出現(xiàn)細(xì)胞病變的雞胚成纖維細(xì)胞固定。PBS洗三遍后加入一抗室溫孵育1h，一抗為H19(馬立克氏病病毒PP38特異性單抗)。再次PBS洗3次，加入二抗孵育，二抗為羊抗鼠IgG。1h后，PBS清洗3次，加入15%甘油進(jìn)行鏡檢。顯微鏡下可看到明顯的一簇一簇綠色熒光，背景為黑色。證實(shí)該病毒為馬立克氏病病毒。

4 提取組織DNA及PCR驗(yàn)證

分別取6只雞的肝臟，脾臟。標(biāo)號(hào)，研磨后加入裂解液及蛋白酶K消化過(guò)夜。次日，加入等量的苯酚氯仿抽提組織DNA。同時(shí)設(shè)計(jì)引物, PCR擴(kuò)增馬立克氏病病毒特異性腫瘤基因Meq, 模板為6只雞的內(nèi)臟組織DNA。瓊脂糖電泳顯示均擴(kuò)增出1000bp的陽(yáng)性條帶。將條帶回收后，測(cè)序分析，結(jié)果表明為馬立克氏病病毒。

5 防治方法

（1）馬立克氏病是可以用疫苗進(jìn)行預(yù)防的疾病，但是不能阻止病毒感染和后續(xù)的傳播。雞群一旦感染該病，沒(méi)有任何有效的治療方法。應(yīng)立即淘汰病雞，更換飼料飲用水。同時(shí)，徹底清掃排泄物，進(jìn)行雞舍消毒。（2）免疫失敗是導(dǎo)致該病發(fā)生的因素之一。本病沒(méi)有特效的藥物治療，唯一高效的方法是在雞只1日齡時(shí)，免疫接種疫苗。預(yù)防該病的疫苗多為細(xì)胞結(jié)合性疫苗，要液氮保存，要確保疫苗在運(yùn)輸過(guò)程中的實(shí)效性。疫苗從接種到發(fā)揮效力需要1周左右。因此，育雛室要嚴(yán)格消毒，確保飼養(yǎng)環(huán)境清潔。育雛室應(yīng)遠(yuǎn)離雞群飼養(yǎng)場(chǎng)，育雛前及雛雞出殼后應(yīng)嚴(yán)格清掃及消毒，嚴(yán)禁閑散人初入育雛室。（3）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理以及預(yù)防其它疾病尤其是免疫抑制性病毒的感染，也是預(yù)防該病及提高疫苗免疫力的有效方法之一。（4）該病毒為水平傳播，傳播源主要是病死雞的羽毛碎屑，不同批次的雞群要隔離飼養(yǎng)，以防發(fā)病雞群的排泄物傳染，雞場(chǎng)最好采取全進(jìn)全出制。

[1] 馮元璋, 古飛霞. 雞馬立克氏病的流行特點(diǎn)與防制對(duì)策[J]. 中國(guó)家禽, 2006, 28(23): 43-45.

[2] 陳世亮. 雞馬立克氏病的防治[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫, 2006, 23(7): 45.

[3] 姜景才, 牛艷. 蛋雞馬立克氏病的診斷與防治[J]. 中國(guó)畜禽種業(yè), 2009(1): 91-92.

[4] 韋平. 馬立克氏病研究的最新動(dòng)態(tài)—第八屆國(guó)際馬立克氏病研討會(huì)概況[J]. 中國(guó)家禽, 2008, 30(17): 6-14.

[5] 王守鷹. 一例內(nèi)臟型雞馬立克氏病的診療報(bào)告[J]. 獸醫(yī)臨診, 2010, 11(12): 46.

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