劉曉云 （山東省鄒平縣畜牧獸醫(yī)局 256200）

基層獸醫(yī)檢測實驗室血凝與血凝抑制試驗的一些經(jīng)驗

劉曉云 （山東省鄒平縣畜牧獸醫(yī)局 256200）

近年來，基層獸醫(yī)實驗室作為動物疫病預防與控制工作的重要技術(shù)支撐，在動物疫病預防控制，特別是重大動物疫情預防控制工作中發(fā)揮著重要作用。血凝和血凝抑制試驗是目前基層獸醫(yī)檢測實驗室開展疫病診斷、流行病學調(diào)查、免疫程序制定及免疫效果監(jiān)測等的主要試驗方法之一。在工作中常用于檢測禽流感，新城疫的免疫和非免疫抗體水平。

筆者根據(jù)自己在基層獸醫(yī)實驗室開展血凝與血凝抑制試驗時遇到的問題，總結(jié)了以下幾點經(jīng)驗。

1 雞紅細胞的采集制取工作

受條件所限，基層實驗室中往往缺乏spf雞，在采集雞全血時可選擇健康公雞。翅靜脈采血及心臟采血皆可。洗紅細胞時，應使用生理鹽水或pH為7.4的PBS液多洗滌幾次。每次洗滌離心完成后，應用吸管吸取壓積紅細胞上層的白細胞和上清洗滌液。更換洗滌液后應搖勻沉淀在底部的紅細胞，防止多次離心后結(jié)塊。在離心及吸取液體時應注意輕拿輕放，防止紅細胞破裂。制取完畢的1%紅細胞懸濁液應放在4℃冰箱中保存，用時搖勻。保存時間不宜超過48h，防止溶血，干擾實驗結(jié)果。

2 實驗過程中的振蕩搖勻

血凝與血凝抑制試驗中需要三次對血凝板微量振蕩。第1次，血凝試驗中加入紅細胞后振蕩，振蕩必須完全。第2次，待檢血清與4HAU病毒抗原混合，振蕩必須完全。第3次，是抗原抗體反應完成后加入紅細胞，此時振蕩不可時間過長，容易導致抗原抗體結(jié)合物分離。在使用一次性塑料血凝板的時候，由于一次性塑料血凝板比較脆弱難以固定，振蕩過程中液滴容易飛濺出來。可使用手托住一次性塑料血凝板，手背接觸微量振蕩器進行振蕩搖勻。

3 實驗結(jié)果的判定

根據(jù)國標判定標準，在血凝試驗中完全凝集1%紅細胞(無淚滴狀流淌)的最高抗原稀釋倍數(shù)作為終點。在實際試驗中把握住完全凝集四個字非常重要。實驗人員經(jīng)常有出現(xiàn)錯讀實驗結(jié)果的情況。觀察凝集孔時候應注意完全凝集的紅細胞均勻的平鋪在凝集孔底部。凝集孔中央無滑落的紅血球。45°角傾斜血凝板，無紅細胞淚滴狀流淌。

同樣在血凝抑制試驗中完全抑制4HAU病毒抗原的最高血清稀釋倍數(shù)作為。觀察時應對照未加入抗原的對照孔。45°傾斜96孔板，當未加抗原對照孔紅細胞淚滴狀流淌觸及凝集孔的側(cè)壁時，觀察其他孔內(nèi)紅細胞淚滴狀流淌是否觸及側(cè)壁。只有同未加入抗原的對照孔流淌程度相同才可以判定為完全抑制4HAU病毒抗原。

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1007-1733(2017)06-0090-02

2017–02–21）