劉艷，晏亮

(江西省第三人民醫(yī)院，1、腫瘤二科，2、檢驗科，江西南昌330000)

液體培養(yǎng)分枝桿菌及藥敏實驗診斷HIV/TB雙重感染患者臨床價值的研究

劉艷1，晏亮1

(江西省第三人民醫(yī)院，1、腫瘤二科，2、檢驗科，江西南昌330000)

目的分析江西省南昌市HIV/TB雙重感染患者分枝桿菌特征、菌株特性及耐藥情況，為流行病學分析、臨床確診及治療預后提供依據(jù)。方法收取HIV/AIDS疑似感染分枝桿菌患者標本139例（痰標本130例，局部組織等9例，去除重復），采取抗酸染色和菌株分離。將分離出的抗酸菌株傳代培養(yǎng)，行菌種鑒定同時做一線藥敏試驗分析。結果139份標本分枝桿菌抗酸染色的陽性率為6.5%（9/139）。分離培養(yǎng)出分枝桿菌40株陽性率達28.8%（40/139），經過鑒定顯示其中含結核分枝桿菌(MTB)38株，占95.0%，非結核分枝桿菌(NTM)2株占5%。38株MTB對4種一線抗結核藥物的耐藥率為：異煙肼(INH) 7.89%、利福平(RFP)10.52%、鏈霉素(SM)2.63%、乙胺丁醇(EMB)0.0%，總耐藥率為10.52%。結論MTB感染在南昌HIV/TB雙重感染的患者中占主要比例，情況不容忽視；臨床應對HIV/TB雙重感染患者抗結核一線藥物耐藥情況重視，合理用藥。

HIV/TB雙重感染；分枝桿菌；菌種鑒定；藥物敏感性

結核(TB)是艾滋病(Acquired immune deficiency Syndrome，AIDS)患者最常見的威脅生命的機會性感染之一，艾滋病患者感染結核病的發(fā)病率高于普通人群，隨著艾滋病的進展，結核病呈加重趨勢，而該結核病的流行特征是由于艾滋病的傳播特點導致，兩種病之間彼此影響[1-3]。所以如何早期、精準地發(fā)現(xiàn)艾滋病患者是否同時感染結核病且快速報告耐藥情況有著十分重要的臨床意義[4-6]。本文通過監(jiān)測分析江西省南昌市HIV/TB雙重感染患者感染分枝桿菌情況、菌株特征及耐藥特性，為臨床明確診斷、治療評估及預后、流行病學特點提供理論依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 對象采集2013年6月－2015年12月之間，江西省胸科醫(yī)院（江西省艾滋病診治定點醫(yī)院）住院及門診HIV/AIDS患者疑似合并分枝桿菌標本139例，其中痰130例，胸腹水、穿刺液、腦脊液、肺泡灌洗液、尿液等標本9例，進行分枝桿菌培養(yǎng)。將分離出的40株做菌種鑒定和一線藥物敏感性實驗分析。

1.2 儀器試劑美國BD公司BACTEC MGIT-960操作系統(tǒng)及其配套試劑BACTEC MGIT-960 SIRE試劑盒含SIRE添加劑和4種一線藥物INH RFP SM EMB均為BD公司產品。L-J固體培養(yǎng)基：根據(jù)結核病診斷實驗室檢驗規(guī)程檢驗科自制L-J固體培養(yǎng)基。標本前處理液用2%NaOH和NALC(N-乙酰-L半胱氨酸)配置、pH6.8 PBS緩沖液；抗酸染液為本院實驗室自制。

1.3 方法

1.3.1 涂片及培養(yǎng)抗酸染色涂片：萋尼氏法。分離培養(yǎng)：取經處理的標本按BACTEC MGIT-960系統(tǒng)快速培養(yǎng)法進行。

1.3.2 藥敏試驗及菌種的鑒定BACTEC MGIT-960快速培養(yǎng)儀報警陽性后直接涂片抗酸染色，抗酸染色陽性的分枝桿菌立即第二次接種行菌種鑒定和MGIT-960液體快速藥物敏感實驗。利用對硝基苯甲酸(PNB)/噻吩-2-羧酸肼(TCH)鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)法，將分枝桿菌分為3種：人結核分枝桿菌復合群(MTB)、牛分枝桿菌和非結核分枝桿菌(NTB)。

2 結果

2.1 涂片及培養(yǎng)139份標本抗酸染色涂片陽性率為6.5%（9/139）。分離培養(yǎng)分枝桿菌40株陽性率達28.8%（40/139），涂陰培陽率22.3%，涂陽培陰率為零。

2.2 菌種鑒定經PNBTCH鑒定在40株分離出的分枝桿菌菌株中，結核分枝桿菌(MTB)38株，占95.0%，非結核分枝桿菌(NTB)2株占5%。

2.3 一線藥敏試驗38株MTB對4種一線抗結核藥物的耐藥率為：異煙肼（INH）7.89%、利福平（RFP）10.52%、鏈霉素（SM）2.63%、乙胺丁醇（EMB）0.0%，總耐藥率為10.52%.

3 討論

HIV/TB雙重感染患者中胸部X線診斷結核病占據(jù)了很高的比例[7]，但極易出現(xiàn)誤診漏診情況。簡便、經濟、快捷的痰涂片抗酸染色法是結核分枝桿菌檢測的常規(guī)手段，但對HIV/TB雙重感染患者的分枝桿菌檢出率較低，且無法區(qū)分其他少見的抗酸菌，如非結核分枝桿菌、奴卡氏菌，也無法區(qū)分死菌與活菌。本研究對139人份標本進行直接涂片抗酸染色鏡檢到的抗酸分枝桿菌僅9株，而經過快速培養(yǎng)分離出抗酸分枝桿菌達到40株，陽性率大大提高[8]，因此分枝桿菌的培養(yǎng)及菌種鑒定仍是確定診斷和評定的金標準[9]。

BACTEC MGIT-960快速培養(yǎng)儀檢測原理：MGIT培養(yǎng)管底部包埋有熒光物質，熒光物質將隨著管內氧含量的變化而發(fā)生反應。若分枝桿菌在MGIT培養(yǎng)管內生長消耗氧，管內熒光物質被激活，在特定光源的激發(fā)下釋放熒光。儀器將每隔60min連續(xù)檢測MGIT培養(yǎng)管內熒光強度，從而判斷MGIT管內分枝桿菌長情況。

本結果表明，BACTEC MGIT-960法對分枝桿菌的初代分離率明顯高于痰涂片法，兩者具有顯著差異。其涂陰培陽率22.3%而涂陽培陰率為零。表明涂片陰性患者中仍有較高比例的培養(yǎng)陽性，體現(xiàn)了960快培法具有快速及高的敏感性和特異性[10-12]。

目前沒有統(tǒng)一標準對HIV/TB雙重感染患者菌株進行分離，本結果顯示，通過聯(lián)合應用BACTEC MGIT-960液體快速培養(yǎng)法和改良羅氏固體培養(yǎng)基法，培養(yǎng)出陽性后再采用抗酸染色鏡檢，明顯提高了HIV/TB雙重感染患者分枝桿菌的陽性檢出率，而且更能快速分離出分枝桿菌，有利于指導臨床早期用藥[13，14]。

通過菌種初步鑒定及藥物敏感性實驗分析，在本市入院的HIV/TB雙重感染患者中，95.0%為MTB感染，另外NTB感染率也達到了5.0%，說明感染情況也比較嚴重，應引起臨床重視。另HIV/TB雙重感染患者對一線抗結核藥物耐藥情況低于普通感染分枝桿菌患者[15]，結果依舊不容輕忽。

綜上，目前要加強對南昌市就醫(yī)的HIV/TB雙重感染患者的監(jiān)測，規(guī)范治療和用藥方案。

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The Clinical Value of Liquid Culture and Susceptibility Testing of Mycobacterium from HIV-positive Individuals Suspected of Mycobacteria Infection

LIU Yan，YAN Liang.The third people's Hospital of Jiangxi Province，Nanchang 330000，China.

Objective To investigate the characterizations and drug resistance of clinically isolated mycobacteria from human immunodeficiency virus(HIV)patients of Nanchang city，it is intended to provide the theoretical basis for epidemiological assessment，clinical diagnosis and treatment.Methods 139 mycobacteria specimens were recruited from HIV-positive individuals suspected of mycobacteria infection(130 sputum cases and nine local organizations，one single specimen per patient).All specimens were detected by Acid-fast staining and isolated for culture.Drug susceptibility testing and strain identification were subsequently performed on all isolates.Results The percentage of the smear-and culture-positive specimens were 6.5%(9/139)and 28.8%(40/ 139)，respectively.The strain identification showed that 38 isolates of Mycobacterium tuberculosis(MTB)and two isolates of Nontuberculosis Mycobacteria(NTM)were accounted for 95%and 5%，respectively.The total resistance rate to four first-line drugs was 10.52%in 38 strains of MTB，while 7.89%，10.52%，2.63%and 0%of 38 strains were Isoniazid-resistant(INH)，Rifampicin-resistant(RFP)，Streptomycin-resistant(SM)and Ethambutol-resistant(EMB)，respectively.Conclusions MTB infection played the major role in HIV-positive patients suspected of mycobacteria from Nanchang city.Specifically，the current situation of MTB-resistance to first-line drugs must be emphasized in HIV-positive patients infected Mycobacterium tuberculosis to clinically guide rational administration.

∶Human immunodeficiency virus infection；Acquired immune deficiency syndrome；Mycobacterium；Strain identification；Drug susceptibility

R446.5，Q939.92，R378.91，R512.91

A

1674-1129(2017)04-0464-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.004

2016-12-06；

2017-06-03)

江西省衛(wèi)計委科技計劃，項目編號20151149

劉艷，女，1983年生，本科，主治醫(yī)師。主要研究方向：肺部腫瘤，耐多藥肺結核診斷。E-mail：20988261@qq.com

晏亮，男，1981年生，本科，主管技師。主要研究方向：HIV/TB雙重感染診斷，耐多藥肺結核診斷。E-mail：8569629@qq. com