王承芯，李 薇

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院 腫瘤中心，吉林 長春130021)

*通訊作者

CD117、CD13、CD33在鑒別診斷AML中的臨床價值

王承芯，李 薇*

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院 腫瘤中心，吉林 長春130021)

急性白血病是起源于造血干細胞克隆性疾病，屬于高度異質(zhì)性惡性血液病，疾病正確分型對疾病診斷、化療方案制定、預(yù)后評估均具有重要的臨床價值[1]。上世紀(jì)七十年代，法、英、美協(xié)作組提出關(guān)于急性白血病的FAB分型，八十年代MIC分型標(biāo)準(zhǔn)出現(xiàn)，之后世界衛(wèi)生組織(WTO)對白血病進行單獨分類，急性白血病的診斷準(zhǔn)確率不斷上升[2,3]。本研究以151例急性白血病患者為例，通過流式細胞術(shù)進行白血病免疫分型檢測，探討CD117、CD13、CD33在鑒別診斷AML(急性髓細胞白血病) 中的臨床價值，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

我院腫瘤中心2014年1月-2015年6月收治的151例急性白血病患者作為研究對象，所有患者均簽署知情同意書，患者經(jīng)檢查均符合急性白血病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，排除其它罹患器質(zhì)性疾病(包括：急性白血病之外的其他惡性腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能不全、嚴(yán)重心腦血管疾病)、自身免疫系統(tǒng)疾病等患者。其中男89例，女62例，年齡19-85歲，平均年齡(51.2±5.1)歲；其中AML105例，急性B淋巴細胞白血病(B-ALL)36例，急性T淋巴細胞白血病(T-ALL)10例。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 所有患者化療前均采集骨髓或外周靜脈血2-5 ml，經(jīng)肝素鈉抗凝處理。標(biāo)本涂片后采用瑞特-姬姆薩氏染色法進行混合染色，顯微鏡下進行觀察。

1.2.2 儀器與試劑 Cytomics FC 500流式細胞儀(BECKMAN COULTER公司生產(chǎn))；藻紅蛋白(PE)標(biāo)記物：CD2、CD8、CD10、CD13、CD22、CD33、CD42、CD64、CD117、GIy-A、CD79a；單克隆抗體異硫氰酸熒光素標(biāo)記：MPO、CD41、CD71、CD34、CD38、CD9、CD15、CD4、CD7、CD1a、CD3；藻紅蛋白偶聯(lián)物(PE-Gy5)標(biāo)記：TDT、CD123、CD20、HLA-DR、cCD3、CD14、CE19、CA11b 、CD56；藻紅蛋白偶聯(lián)物(PE-Gy7)標(biāo)記：CD45；破膜劑(BECKMAN COULTER公司生產(chǎn))、溶血素(BECKMAN COULTER公司生產(chǎn))、鞘液(BECKMAN COULTER公司生產(chǎn))。

1.2.3 檢測方法 在各種不同標(biāo)記物試管中分別加入經(jīng)肝素抗凝后骨髓或外周血標(biāo)本50 μl，同時根據(jù)檢測需求在各個試管中加入相應(yīng)的抗體50 μl，將試管內(nèi)液體充分搖勻置于正常室溫中進行孵育15 min，注意避光。然后在試管中分別添加500 μl溶血素，搖勻后將其置于正常室溫中10 min后添加磷酸鹽緩沖液 500 μl進行洗滌。隨后應(yīng)用胞漿內(nèi)抗原檢測方法進行檢測：在相應(yīng)試管中加入破膜劑，然后加入相應(yīng)抗體標(biāo)記物，之后采用磷酸鹽緩沖液進行洗滌。所有樣本中最后均加入 500 μl磷酸鹽緩沖液重懸上機檢測，并于每個試劑中獲取10 000個細胞采用CXP分析軟件進行檢測。

抗體組合包括：CD7/CD10/CD19、CD4/CD64/CD14、CD15/CD13/CD11b、CD3/CD33/CD56、CD38/CD22/CD20、CD9/CD2/CD123、cMPO/cCD79a/cTDT、CD34/CD117/HLA-DR。所有標(biāo)本經(jīng)上述試劑檢測后，質(zhì)疑為T-ALL標(biāo)本需加做CD4/CD8/cCD3、CDla/CD2/CD5抗體檢測；質(zhì)疑為M6、M7標(biāo)本需要加做CD71/Gly-A或者CD41/CD42。分析數(shù)據(jù)的過程中，要注意觀察CD45/SSC雙參數(shù)散點圖，進行淋巴細胞、幼稚細胞、粒細胞、單核細胞等細胞各群比率計算，分析篩選出異常細胞群，在此基礎(chǔ)上對幼稚細胞的免疫表型特點作進一步分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

根據(jù)SSPS19.0統(tǒng)計學(xué)應(yīng)用軟件對收集到的研究資料分析處理，計數(shù)資料(%、n)采用χ2檢驗。P<0.05表明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD117、CD13、CD33在急性白血病中的表達水平

CD117、CD13、CD33在AML中的表達水平分別為91.4%、89.5%、95.2%，均明顯高于B-ALL、T-ALL，結(jié)果具有顯著性差異(CD117組間相比，χ2值分別為10.341、8.296；CD13組間相比，χ2值分別為9.136、8.071；CD33組間相比，χ2值分別為9.875、8.547；P<0.05)。 CD117、CD13、CD33在B-ALL、T-ALL中的表達水平差異不顯著(χ2值分別為1.214、0.921、1.475；P>0.05)。見表1。

表1 CD117、CD13、CD33在急性白細胞中的表達水平(n,%)

2.2 CD117、CD13、CD33在不同急性髓細胞白血病亞型中的表達水平

CD117、CD13、CD33在急性髓細胞白血病中的共性表達率為47.6%(50/105),其中M0、M1、M2亞型中表達率較高，在M3、M4、M5、M6、M7亞型中表達率稍低。CD117、CD13、CD33在M0+M1+M2亞型中的表達率為66.7%(38/57),明顯高于M3+M4+M5+M6+M7亞型中的表達率25.0%(12/48)，結(jié)果具有顯著性差異(χ2值為7.653，P<0.05)。見表2。

表2 CD117、CD13、CD33在不同急性髓細胞白血病亞型中的表達水平(n,%)

3 討論

近年多項研究數(shù)據(jù)表明，白血病細胞細胞膜及細胞質(zhì)分子免疫標(biāo)志具有特征性異常改變，可通過細胞免疫表型分類實現(xiàn)血液系統(tǒng)惡性腫瘤疾病精確診斷。應(yīng)用流式細胞儀檢測技術(shù)，通過對白血病細胞多種抗原組合免疫表型分析，有助于顯著提高急性白血病診斷率[4]。本研究中以151例急性白血病患者為例，著重分析CD117、CD13、CD33在急性髓細胞白血病的表達情況，旨在為臨床疾病診斷提供參考。

CD117系髓系細胞分化抗原，主要表達于人類造血祖細胞及不成熟粒細胞。其屬于細胞膜跨膜受體，共由976個氨基酸分子組成，與配體干細胞因子(SCF)偶聯(lián)調(diào)節(jié)機體造血干/祖細胞增殖、分化及凋亡[5,6]。生理情況下，CD117僅表達于正常干/祖細胞、髓系細胞及內(nèi)皮細胞。發(fā)生急性髓系白血病時，骨髓中原始細胞也會表達較高水平的CD117[7]。本研究結(jié)果顯示：105例AML患者中，檢出CD117表達患者96例，表達率為91.4%，明顯高于B-ALL、T-ALL組并具有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，可見CD117抗原在AML白血病細胞中高表達，可用于與ALL鑒別診斷。

CD13屬于全粒細胞分子，可表達于不同發(fā)育階段的所有粒系細胞，包括粒細胞及其前體細胞，單核細胞也可檢測到該抗原，多數(shù)AML患者及15%的ALL患者均可見CD13表達，CD13表達敏感度較高[8]。本研究結(jié)果顯示CD13在AML中的表達水平為89.5%，明顯高于B-ALL、T-ALL且具有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，可見CD13在AML疾病診斷中具有較高臨床價值，也可作為AML與ALL鑒別標(biāo)準(zhǔn)。但因其在ALL疾病中存在較高陽性交叉表達，故特異度較低。楊川藝等[9]人就CD13在AML疾病中表達的靈敏度及特異度進行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其靈敏度及特異度分別為98.0%，53.3% ，特異度明顯低于靈敏度。

CD33在各種不同的AML亞型中均可表達，20%左右的ALL患者也伴有CD33表達。CD33由364個氨基酸殘基構(gòu)成，分子量為67KD的跨膜受體，屬于免疫球蛋白超家族成員，可通過免疫酪氨酸抑制基序(ITIM)途徑誘導(dǎo)白血病細胞發(fā)生凋亡[10]。本研究中，CD33在AML中的表達水平為95.2%，明顯高于B-ALL、T-ALL組，統(tǒng)計學(xué)差異顯著(P<0.05)，可見CD33也可用于為AML與ALL鑒別。從靈敏度與特異度方面來進行分析，CD33與CD13有一定的相似性，二者靈敏度均明顯高于CD117，但CD117更具有髓系特異性。

本研究中CD117、CD13、CD33在AML中共性表達率為47.6%(50/105),其中CD117、CD13、CD33在M0+M1+M2亞型中的表達率為66.7%,明顯高于M3+M4+M5+M6+M7亞型中的表達率25.0%，經(jīng)分析推測主要與原始細胞數(shù)量相關(guān)，三者聯(lián)合檢測，能夠提高檢測的靈敏度，有助于AML分型判斷。

綜上所述，CD117、CD13、CD33在鑒別診斷AML中的臨床價值較高，可作為AML患者診斷分型的重要髓系免疫表型指征，值得臨床推廣。

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1007-4287(2017)03-0514-03

2016-04-29)