衛(wèi) 昊，劉 清，沈 甜，武 璞，王 斌

陜西中醫(yī)藥大學(xué)(咸陽 712046)

·實驗研究·

開竅醒腦滴丸對大鼠腦缺血損傷保護作用的研究*

衛(wèi) 昊，劉 清，沈 甜，武 璞，王 斌Δ

陜西中醫(yī)藥大學(xué)(咸陽 712046)

目的：探討開竅醒腦滴丸對大鼠腦缺血性損傷的影響。方法：將SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、開竅醒腦滴丸組(0.9 g/kg)、開竅醒腦滴丸組(1.8 g/kg)及血塞通組(0.3 g/kg)，連續(xù)灌胃給藥10 d，末次給藥1 h后，采用兩側(cè)頸總動脈結(jié)扎復(fù)制大鼠腦缺血模型，手術(shù)24 h 后，觀察各組大鼠的行為學(xué)和腦組織含水量變化。對各組大鼠行為學(xué)評分，腦片TTC 染色計算腦缺血面積，HE染色觀察病理學(xué)變化，比較腦缺血嚴(yán)重程度。結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組及各給藥組左右腦含水量均有一定升高；與模型組比較，各給藥組腦梗塞面積均呈現(xiàn)一定下降趨勢。病理結(jié)果表明，與模型組比較各給藥組腦水腫癥狀均有所減輕。結(jié)論：開竅醒腦滴丸對大鼠腦缺血模型有一定的保護作用。

+腦卒中按性質(zhì)分為出血性和缺血性腦卒中，其中缺血性腦卒中患者占卒中病人總數(shù)的75%～85%。缺血性腦卒中(Ischemic stroke,IS)指由于腦供血動脈(頸動脈和椎動脈)狹窄或閉塞、腦供血不足，缺血缺氧導(dǎo)致腦組織病變、壞死、軟化，進而出現(xiàn)的神經(jīng)功能缺損癥狀[1]。腦卒中在目前各種疾病死因中排列第3位，具有高發(fā)病率、高致殘率、高病死率的特點，是危害人類健康的重要疾病之一[2]。開竅醒腦滴丸是以中醫(yī)理論為指導(dǎo)結(jié)合現(xiàn)代最新研究成果研制而成的中藥復(fù)方制劑，主要由黃芩、薯蕷、梔子、冰片等中藥組成，黃芩[3]清熱燥濕、凉血解毒；梔子[4]、薯蕷[5]清熱解毒，可瀉心包之火；冰片[6]辛香走竄、通竅醒神，臨床上擬用于治療缺血性腦血管病。缺血性腦卒中的發(fā)作是頸動脈或椎-基底動脈系統(tǒng)發(fā)生的血液供應(yīng)不足，本實驗通過雙側(cè)頸總結(jié)扎法建立大鼠腦缺血模型，觀察開竅醒腦滴丸對腦缺血的治療作用，為開竅醒腦滴丸在臨床上的應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

材料與方法

1 材 料

1.1 試驗藥物:開竅醒腦滴丸(自制)；血塞通分散片(國藥準(zhǔn)字Z20050467)；青霉素(國藥準(zhǔn)字：H23021439)。

1.2 動 物:SD大鼠，雌雄各半，體重 180～200 g，西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實驗中心提供，許可證號:0011740。飼養(yǎng)環(huán)境: 陜西中醫(yī)藥大學(xué)動物房溫度維持在 18℃～25℃，相對濕度40%～70%，實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d。

1.3 試 劑:紅四氮唑( TTC ，美國Sigma公司)；水合氯醛(上海山浦化工有限公司，批號：20110209)。

1.4 儀 器:電子天平為賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司，京制00000246號；正置顯微鏡Olympus BX51；水浴鍋為北京科偉永興儀器有限公司，型號 HH-1型；眼科手術(shù)剪；眼科手術(shù)鑷等。

2 方 法 將SD大鼠，雌雄各半，體重 180～200 g，實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后隨機分為5組，即假手術(shù)組、腦缺血模型組、開竅醒腦滴丸組(0.9 g/kg)、開竅醒腦滴丸組(1.8 g/kg)，血塞通組(0.3 g/kg)。開竅醒腦滴丸組分別按照0.9 g/kg和1.8 g/kg(分別相當(dāng)人用量的18倍、9倍)，血塞通組按照30 mg/kg(相當(dāng)人用量的6倍)灌胃給藥，模型組灌服同體積生理鹽水，每天給藥1 次。于第10天 給藥后1 h ，10%水合氯醛0.35 ml/100g 腹腔注射麻醉，作頸部正中切口，鈍性分離雙側(cè)頸總動脈并結(jié)扎，造模后24 h 再給藥1次。

2.1 神經(jīng)癥狀評分:根據(jù)Zea Longa 5級評分法加以改進，于術(shù)后24 h進行評定，昏迷者剔除。評分標(biāo)準(zhǔn)：無明顯神經(jīng)癥狀，0分；不能完全伸展左側(cè)前爪，1分；向左側(cè)旋轉(zhuǎn)，2分；行走時向左側(cè)傾倒，3分；不能自行行走，4分。

2.2 腦梗塞面積:術(shù)后 24 h 動物深度麻醉，斷頭取腦，將腦組織置于0℃的冰生理鹽水中10 min，由前極向后每隔2 mm 作冠狀切片，置于配置好的 0.2%TTC 溶液中，37 ℃孵育 30 min，正常組織染成紅色，梗死組織染成白色。染色后10%甲醛溶液固定 24 h，將白色組織仔細挖下稱重，以梗塞組織重量占全腦重量及患側(cè)腦重量的百分比作為腦梗塞范圍(%)。計算梗塞體積百分比。

2.3 腦含水量測定:術(shù)后 24 h 快速斷頭取腦，除去嗅球、腦干及小腦，用濾紙吸干表面水分，分別稱量左右腦濕重。再置于烘箱中，105℃ 烘烤48 h至恒重，精確稱量干重，計算含水量。腦含水量= [ (濕重- 干重) / 濕重]×100%。

2.4 大鼠皮層組織病理形態(tài)檢查:于術(shù)后24 h，每組隨機取3只大鼠，經(jīng)腹腔注射10%水合氯醛麻醉(0.35 ml/100g體重)，斷頭取腦，10%甲醛溶液固定，取材，按常規(guī)制作切片，用中性樹脂密封，在Olympus光學(xué)顯微鏡下觀察HE染色切片，

LEICA數(shù)字顯微照相機采集圖像，在各組動物缺血側(cè)(右側(cè))皮層部位各選取2個視野，拍照進行形態(tài)學(xué)觀察。

結(jié) 果

1 行為學(xué)評分 結(jié)果顯示，缺血2 h再灌22 h后，大鼠出現(xiàn)一定程度的神經(jīng)功能缺損癥狀，表現(xiàn)為前肢屈曲，側(cè)推動時阻力下降，前肢肌張力下降及不停向一側(cè)轉(zhuǎn)圈，行為學(xué)評分明顯升高，與假手術(shù)組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)；與模型組比較，開竅醒腦組(0.9 g/kg)和血塞通組神經(jīng)缺損癥狀也有不同程度改善，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 開竅醒腦滴丸對大鼠腦缺血模型腦損傷行為學(xué)評分的影響

2 梗塞面積測定 模型組梗塞百分比最大，與各給藥組比較，其余各給藥組梗塞面積均呈現(xiàn)一定下降趨勢，表明所給藥物對腦缺血模型均有一定的治療作用，見表2。

3 腦腫脹率 與假手術(shù)組比較，模型組及各給藥組左右腦含水量均有一定升高，表明腦缺血手術(shù)對模型的大鼠產(chǎn)生一定的腦水腫作用，見表2。

表2 開竅醒腦滴丸對大鼠腦缺血模型腦損傷腦梗死面積和腦含水量的影響

4 病理學(xué)觀察 假手術(shù)組可見局部輕度水腫。模型組腦組織細胞性水腫、血管源性水腫，局部可見小膠質(zhì)細胞增生，成空網(wǎng)狀，可見少量壞死。1.8 g/kg組見腦組織輕度細胞性水腫、血管源性水腫，小膠質(zhì)細胞增生。0.9 g/kg組見水腫，局部可見成空網(wǎng)狀，小面積壞死，部分區(qū)域小膠質(zhì)細胞增生。血塞通局部可見水腫，小膠質(zhì)細胞增生(圖1)。

A.對照組,B.模型組,C.開竅醒腦滴丸(1.8g/kg)組,D.開竅醒腦滴丸(0.9g/kg)組,E.血塞通(0.3g/kg)組

討 論

我國每年有200多萬的腦卒中新發(fā)病例，腦卒中死亡者約100 萬人，預(yù)計未來10年，腦卒中的醫(yī)療支出會占到醫(yī)療總支出的6.2%[7-9]。開竅醒腦滴丸由梔子、黃芩、冰片、薯蕷等組成，功效為開竅醒神、清熱解毒，文獻研究表明黃芩苷配伍梔子苷可以從多種途徑防治腦缺血損傷[10]。冰片辛香走竄、通竅醒神，極易通過血腦屏障，可促進水溶性大分子藥物進入腦內(nèi)。

薯蕷皂苷具有抗溶血、祛痰、抑制血小板凝集、降血脂等藥理作用，廣泛用于心血管疾病，近年也有不少學(xué)者用于研究缺血性腦病。

腦是體內(nèi)代謝最為旺盛的器官，腦缺血損傷后，缺血中心區(qū)血流很快便終止，神經(jīng)組織隨之進入不可逆的缺血性壞死過程。腦缺血損傷后，最明顯的組織學(xué)變化是神經(jīng)細胞壞死和腦水腫。胞內(nèi)鈣超載，導(dǎo)致線粒體功能障礙。微血管損傷和白細胞浸潤的加重，都是引起腦缺血損傷后腦細胞壞死的原因。同時腦組織缺血缺氧后誘發(fā)無氧糖酵解，導(dǎo)致腦組織內(nèi)能量代謝障礙， Na+-K+-ATP酶活性受到抑制，細胞內(nèi) K+離子外流， Na+、Cl-離子內(nèi)流，使細胞內(nèi)H2O明顯增加，誘發(fā)細胞毒性腦水腫。另一方面， 因酸性產(chǎn)物大量堆積，細胞內(nèi)H十含量增加，促使Na+-H+置換，也會加重腦部水腫。本實驗結(jié)果顯示，與模型組比較，開竅醒腦滴丸能降低腦組織含水量，減輕腦水腫。

由本病理結(jié)果可以看出與模型組比較，各給藥組模型動物腦損傷均有一定減輕，表明開竅醒腦滴丸可改善大鼠腦缺血，而行為學(xué)和梗塞面積及腦腫脹率的結(jié)果也表明在缺血大腦保護上存在一定趨勢，其作用機制可能與梔子、黃芩配伍后降低體內(nèi)炎癥反應(yīng)及冰片降低血腦屏障的通透性有關(guān)。

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(收稿：2016-11-07)

Protective effects of Kaiqiao Xingnao dropping pill for cerebral ischemic injury in rats

Wei Hao，Liu Qing，Shen Tian，et al.

Shaanxi University of Chinese Medicine(Xianyang 712046)

Objective: To investigate the effects of Kaiqiao Xingnao dropping pill(KQXNDP) for ischemic brain injury. Methods: SD rats were randomly divided into sham group， model group，KQXNDP group(0.9g/kg)，KQXNDP group(1.8g/kg)and the xuesaitong group(0.3g/kg)，continuous gavage for 10 days and after the last administration 1h ， using ligation to bilateral common carotid artery model of focal cerebral ischemia，after surgery 24 h，observe the behavior，brain water content and behavior score of rats in each group; calculated area of brain slices ischemic with TTC staining，pathological changes with HE staining. Results: Compared with the sham group，group the brain water content had some elevated in model and the treatment groups. Compared with the model group，the treatment group showed a certain decrease infarct size. Pathology results showed that treatment group had mitigated the symptoms of cerebral edema. Conclusion: KQXNDP has a protective effect on cerebral ischemia .

Brain ischemia/traditional Chinese medicine therapy Chinese materia medica preparation @ Kaiqiao Xingnao dropping pill Animal experimentation

*陜西省科學(xué)技術(shù)發(fā)展計劃項目(2010K01-150)

腦缺血/中醫(yī)藥療法 中藥藥理 @開竅醒腦滴丸 動物，實驗

R258.5

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.03.059

陜西省教育廳項目(13JS029)

陜西省中醫(yī)藥管理局項目(13-ZY016)

△通訊作者