莊桂婧，李鐵成，邱 明

(1.佳木斯大學(xué)附屬第二醫(yī)院 ，黑龍江 佳木斯 154002 ；2.大慶油田總醫(yī)院口腔科，黑龍江 大慶 163001 )

趨化因子I-TAC及其受體3對腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移影響的研究①

莊桂婧1，李鐵成2，邱 明2

(1.佳木斯大學(xué)附屬第二醫(yī)院 ，黑龍江 佳木斯 154002 ；2.大慶油田總醫(yī)院口腔科，黑龍江 大慶 163001 )

目的:初步研究趨化因子(I-TAC)及其受體(CXCR3)誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)形成在腺樣囊性癌中的作用和意義。方法:實驗選用唾液腺樣囊性癌病理蠟塊24塊，綜合臨床癥狀和鏡下觀察應(yīng)用免疫組織化學(xué)法，檢測唾液腺腺樣囊性癌及正常唾液腺組織旁組織中I-TAC-CXCR3的表達并采用PAS、CD31雙重染色法檢測各組組織中血管生成擬態(tài)的形成狀況。結(jié)果:I-TAC和CXCR3在腺樣囊性癌組織中的表達量高于瘤旁組織(P<0.05)。在有神經(jīng)轉(zhuǎn)移的腺樣囊性癌組織中高于無神經(jīng)轉(zhuǎn)移的腺樣囊性癌組織(P<0.05)。有神經(jīng)轉(zhuǎn)移和無神經(jīng)轉(zhuǎn)移組織都存在血管生成擬態(tài)，然而在有神經(jīng)轉(zhuǎn)移的腺樣囊性癌中血管生成擬態(tài)的表達數(shù)量明顯高于無神經(jīng)侵襲組和正常組織。結(jié)論:I-TAC和CXCR3在腺樣囊性癌組織中高表達提示二者可能在腺樣囊性癌的發(fā)病機制中發(fā)揮作用血管生成擬態(tài)在有神經(jīng)轉(zhuǎn)移的腺樣囊性癌中高表達且CXCR3與組織陽性表達的血管生成擬態(tài)呈正相關(guān) (相關(guān)系數(shù)r=0.718,P<0.01)。初步得出趨化因子及其受體可能與腺樣囊性癌的神經(jīng)轉(zhuǎn)移相關(guān)。

腺樣囊性癌;趨化因子及其受體;血管生成擬態(tài);免疫組織化學(xué)

I一TAC為干擾素誘導(dǎo)的T細胞趨化因子(分子標記CXCLll)被稱為1型趨化因子(或Thl趨化因子),其受體是CXCR3[9]。I-TAC強有力的趨化現(xiàn)象和代理激活T細胞的這兩種活動依賴在CXCR3激活[1]。腺樣囊性癌具有嗜神經(jīng)侵襲的特性，因此我們推測I-TAC-CXCR3這對生物軸誘導(dǎo)血管擬態(tài)形成為腺樣囊性癌發(fā)生嗜神經(jīng)侵襲的機制之一[2]，本實通過檢測腺樣囊性癌及其癌旁組織中I-TAC-CXCR3 表達的差異及其與血管生成擬態(tài)[3]多少的關(guān)系來分析其與對腺樣囊性癌神經(jīng)轉(zhuǎn)移的趨化性和對血管擬態(tài)形成的誘導(dǎo)關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標本來源

取大慶油田總醫(yī)院病理科2014～2015年間的唾液腺腺樣囊性癌病理蠟塊27例，其中男15例，女12例；年齡25～73歲。分別取腺樣囊性癌組織和腫瘤外1.0cm正常腮腺組織，標本轉(zhuǎn)至液氮罐中，后置于-80℃低溫冰箱中保存待用,其余標本送病理科石蠟包埋，常規(guī)病理檢查,病理診斷均由兩位病理醫(yī)生確診，神經(jīng)侵襲腺樣囊性癌18例，無神經(jīng)侵襲9例。每例腫瘤標本連續(xù)切片，厚度約 4～6μm，選取完整均勻的切片HE染色后光鏡下觀察，如發(fā)現(xiàn)1處及以上在神經(jīng)周圍和(或)神經(jīng)內(nèi)有腫瘤細胞的存在，即將該例組織劃為侵襲神經(jīng)現(xiàn)象組。共計侵襲神經(jīng)現(xiàn)象標本 18例,未侵襲現(xiàn)象標本9例。

1.2 免疫組化SP法檢測I-TAC和CXCR3的表達

I-TAC和CXCR3的檢測采用SP免疫組化法，染色程序按SP試劑盒說明書進行。

1.3CD31與PAS雙重染色方法

首先進行CD31免疫組化染色(染色步驟如上),DAB顯色后。顯微鏡下觀察,血管內(nèi)皮細胞著色后,水流沖洗1min終止顯色反應(yīng)。將切片置于0.5%的過碘酸溶液中氧化8～15min。水流沖洗3min后置于Schiff液中,閉光環(huán)境在Schiff液中反應(yīng)15～30min,一般15min為宜。蒸流水洗3次,每次1min,流水沖洗3～5min。蘇木精淺染胞核l2min(蘇木精為實驗開始時配置),自來水沖洗2min。鹽酸酒精分化,氨水返藍。常規(guī)酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析，各計量資料以均數(shù) ± 標準誤表示，表達水平分析采用四格表資料的Fisher確切概率法，P<0.05表明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。兩組變量間的相關(guān)性分析采用Pearson等級相關(guān)分析,以P<0.01為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組織化學(xué)法檢測I-TAC和CXCR3 的表達結(jié)果顯示:27對腺樣囊性癌組織及其瘤旁組織均測得I-TAC和CXCR3的表達，腺樣囊性癌組織及其瘤旁組織I-TAC和CXCR3平均表達量見表1，I-TAC和CXCR3 在有神經(jīng)侵襲組織的腺樣囊性癌中的表達高于無神經(jīng)侵襲的腺樣囊性癌組織和正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 在腺樣囊性癌組織中觀察到血管擬態(tài)的存在并且有神經(jīng)侵襲組明顯多于無神經(jīng)侵襲及正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 CXCR3,I-TAC,VM在腺樣囊性癌和正常組織免疫組化染色結(jié)果

圖1I-TAC在有神經(jīng)侵襲的SACC的表達(×400)

圖2 CXCR3 在有神經(jīng)侵襲的SACC的表達(×400)

圖3 VM在神經(jīng)侵襲的SACC的表達(×400)

3 討論

腫瘤細胞常常表現(xiàn)出特定的轉(zhuǎn)移方式，并且不同的腫瘤細胞具有各自的特異性侵襲器官，這提示受侵襲器官周圍的微環(huán)境對腫瘤細胞的誘導(dǎo)、侵襲和增殖效應(yīng)有著一定的影響作用。腺樣囊性癌有嗜神經(jīng)的特性，因此有必要對其特征性的嗜神經(jīng)特性進行相關(guān)的研究。趨化因子是一類可誘導(dǎo)的、分子質(zhì)量為7～8kD的促炎細胞因子，具有激活和趨化白細胞的作用[4]。根據(jù)其末端半膚氨酸保守序列位置的不同可分為四大類，其中CXC類趨化因子的近氨基端存在CXC(半膚氨酸一其它氨基酸一半眺氨酸)基序，這類趨化因子—可趨化中性粒細胞，刺激血管形成[10]。VM是具有侵襲性腫瘤細胞為滿足自身的侵襲發(fā)展提供路徑和營養(yǎng)，而通過自身變形和細胞外基質(zhì)重塑形成的一種類似血管樣的通道[5]。VM在鏡下觀察的情況是腫瘤細胞形成瘤細胞條索并圍成管道，管道內(nèi)沒有血管內(nèi)皮細胞襯覆，管道外是一層厚薄不一的PAS陽性物質(zhì)構(gòu)成的基底膜。血液則在這無內(nèi)皮細胞的管道中流動。因為VM缺乏內(nèi)皮細胞，所以腫瘤細胞可直接進入血液，發(fā)生血行播散,不同于經(jīng)典的內(nèi)皮細胞依賴的腫瘤微血管結(jié)構(gòu)[6]。為了驗證趨化因子和血管擬態(tài)的關(guān)系，本實驗設(shè)計應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測I-TAC和CXCR3在有無神經(jīng)侵襲的腺樣囊性癌中的表達程度與周圍的正常組織做照，PAS、CD33雙重染色觀察血管擬態(tài)的形成狀況。實驗結(jié)果顯示在有神經(jīng)侵襲的腺樣囊性癌中I-TAC和CXCR3 的表達明顯高于無神經(jīng)轉(zhuǎn)移和正常組織(P<0.05)。在表達CXCR3的有神經(jīng)轉(zhuǎn)移的腺樣囊性中均能觀察到血管生成擬態(tài)。統(tǒng)計結(jié)果進行配對資料的相關(guān)性分析，表明CXCR3主要表達與腺樣囊性癌組織臨床病理特征的關(guān)系：CXCR3與I-TAC兩者陽性表達呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.652,P<0.01),血管生成擬態(tài)(VM)與CXCR3兩者的陽性表達呈正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.718,P<0.01)。通過以上實驗現(xiàn)象和數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)CXCR3，I-TAC和VM的表達與腺樣囊性癌的病理分型有關(guān)，均為神經(jīng)侵襲較無神經(jīng)侵襲偏高(P<0.05)，初步分析CXCR3和I-TAC對腺樣囊性癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移有促進作用，CXCR3與血管生成擬態(tài)陽性表達呈正相關(guān)提示CXCR3和I-TAC可以誘導(dǎo)血管生成擬態(tài)生成，為腺樣囊性癌的神經(jīng)轉(zhuǎn)移提供信號，實驗也證實了腺樣囊性癌存在VM,神經(jīng)轉(zhuǎn)移組陽性表達率明顯增高,說明血管生成擬態(tài)與神經(jīng)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。依據(jù)實驗和以往的研究結(jié)果可以初步判定CXCR3/I-TA/C受體配體對口腔腺樣囊性癌細胞轉(zhuǎn)移提供了信號[7]，誘導(dǎo)形成血管擬態(tài)為口腔腺樣囊性癌侵襲轉(zhuǎn)移提供血液供應(yīng)促進它的嗜神經(jīng)侵襲。因此,在臨床上可通過CXCR3，I-TAC及血管生成擬態(tài)對腺樣囊性癌患者檢測,從而對腺樣囊性癌神經(jīng)轉(zhuǎn)移進行早期預(yù)測,早期治療[8]?？紤]到治療的安全和可靠性,還需要今后更多的體內(nèi)、體外實驗研究，為進一步降低腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移率提供依據(jù)。

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The effect of I-TAC and its receptor 3 on the metastasis of adenoid cystic carcinoma

ZHUANGGui-jing1，LITie-cheng2，QIUMing2

(1. Department of Stomatology, the Affiliated Stomatology Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154002,China; 2, Daqing Oilfield General Hospital，Daqing163004,China)

Objective: To study the role and significance of chemotactic factor (I-TAC) and its receptor (CXCR3) on inducing the formation of vasculogenic mimicry in adenoid cystic carcinoma. Methods：24 blocks of salivary adenoid cystic carcinoma pathological were observed by immunohistochemical method combined with clinical symptoms and endoscopic. The expression of I-TAC-CXCR3 in salivary adenoid cystic carcinoma and normal salivary gland tissues were detected. Vascular PAS and CD31 double staining methods were used to detect the formation of tissue mimicry.Results:The expression of I-TAC and CXCR3 in adenoid cystic carcinoma tissues was higher than that nearby tumor tissues (P<0.05).Neuroinvasive-nessofadenoidcysticcarcinoma(P< 0.05)ishigherthanthatofthenonmetastaticadenoidcysticcarcinoma.Vasculogenicmimicryexistsinneuroi-nvasivenessandnonmetastaticofadenoidcysticcarcinoma.Tissueswithandwithoutnervetransferexistangiogenesismimicry.However,inadenoidcysticcarcinomawithnervetransferinangiogenesis,theexpressionquantityofmimicrywasobviouslyhigherthanthatofnonerveinvasiongroupandnormalgroup. Conclusion: The high expressions of I - TAC and CXCR3 in adenoid cystic carcinoma tissue indicate that they might play a role in the pathogenesis of adenoid cystic carcinoma. The expressions of angiogenesis mimicry in adenoid cystic carcinoma with nerve transfer are high. Angiogenesis mimicry CXCR3 and the positive expressions of tissues were positively correlated (correlation coefficientr=0.718,P<0.01).Itispreliminarilyconcludedthatchemokinesandtheirreceptorsmaybeassociatedwiththenervetransferofadenoidcysticcarcinoma.

adenoid cystic carcinoma；the chemotactic factor and its receptor；vasculogenic mimicry; immunohistochemistry

莊桂婧(1989～)女，黑龍江綏化人，在讀碩士研究生。

邱明(1964～)男，黑龍江大慶人，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:zhuang.guimi@163.com。

R

A

1008-0104(2017)01-0082-03

2016-01-05)