黃妍，宗玉，簡娟,馬懷安

(1.北京世紀沃德生物科技有限公司研發(fā)部，北京 102200；2.中國中醫(yī)科學院眼科醫(yī)院檢驗科，北京 100040)

·質(zhì)量管理研究·

血清α-淀粉酶常規(guī)系統(tǒng)校準品的篩選與評價

黃妍1，宗玉1，簡娟1,馬懷安2

(1.北京世紀沃德生物科技有限公司研發(fā)部，北京 102200；2.中國中醫(yī)科學院眼科醫(yī)院檢驗科，北京 100040)

目的 選擇α-淀粉酶(Amy)常規(guī)測量系統(tǒng)的校準品。方法 IFCC Amy參考方法作為參考系統(tǒng)，用世紀沃德公司Amy試劑盒和Randox多項校準品分別做成常規(guī)系統(tǒng)A(用Roche PNPG7定標)、B(用Randox Liquid stable PNPG7定標)，分別檢測40份新鮮冰凍血清樣本，驗證常規(guī)系統(tǒng)的檢測結(jié)果是否可接受。結(jié)果 IFCC Amy參考系統(tǒng)，與常規(guī)系統(tǒng)A和常規(guī)系統(tǒng)B相關方程分別為：Y=0.964X+0.376、Y=1.095X+3.131，其中X和Y分別代表IFCC參考方法和常規(guī)系統(tǒng)的測量結(jié)果。以IFCC參考方法為比較方法，常規(guī)系統(tǒng)A測量結(jié)果可接受。結(jié)論 通過IFCC Amy參考方法，國內(nèi)生化試劑選擇合適校準品定標，可解決測量結(jié)果檢測結(jié)果是否可接受問題。

淀粉酶；參考方法；常規(guī)方法；校準品

血清α-淀粉酶(Amy)常規(guī)方法很多，市場上各廠家試劑盒使用底物主要有2-氯-4-硝基苯-麥芽三糖苷(CNP-G3)、4-硝基酚-6-O-苯基α-麥芽戊糖苷(BG5P)、4,6-亞乙基-對硝基酚-α-D-麥芽七糖苷(E-G7-PNP)。2006年，國際臨床化學與檢驗醫(yī)學聯(lián)合會(IFCC)公布了血清淀粉酶參考方法[1]，其測量底物為E-G7-PNP。國內(nèi)習慣采用Randox多項校準品校準。Randox多項校準品根據(jù)不同方法提供不同的值，大約有20個不同方法的值，分別對應國外不同廠家試劑系統(tǒng)，其中，選用底物與IFCC相同的系統(tǒng)有5個，但定值不同。對于國內(nèi)生化試劑生產(chǎn)廠家，校準品的選擇及依據(jù)是個難題。利用IFCC參考方法溯源自己的校準品，同時用新鮮冰凍血清樣本比對第三方校準品Randox多項校準品，可保證臨床樣本結(jié)果的檢測結(jié)果是否可接受。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 參考方法試劑 N-2-羥基乙基哌嗪-N′-乙基磺酸(批號：1825C183)、牛血清清蛋白(批號：1022C394)均購于美國Amresco公司；4,6-亞乙基-4-硝基酚-α-D-麥芽七糖(批號：10698466)、α-葡萄糖苷酶(批號：11786437)均購于瑞士Roche公司；氯化鈉(批號：20150831)、氯化鈣二水化合物(批號：20150916)均購于國藥公司；島津UV2550紫外可見分光光度計(水浴控溫)。

1.1.2 常規(guī)方法試劑 Amy試劑盒(批號：B036101，北京世紀沃德公司)；Olympus AU400全自動生化分析儀；Amy試劑盒和Randox多項校準品(定值選用Roche PNPG7:274 U/L)組成常規(guī)系統(tǒng)A，Amy試劑盒和Randox多項校準品(定值選用Randox Liquid stable PNPG7: 308 U/L定標)組成常規(guī)系統(tǒng)B。

1.2 樣品 (1)Amy有證參考物質(zhì)JCCLS CRM001c，購于日本標準物質(zhì)中心，認定值為(348±9) U/L。(2)Randox多項質(zhì)控品，貨號/批號：HN1530/1027UN，HE1532/791UE。(3) Randox多項校準品，貨號/批號：CAL2351/753UE。(4)40份不同Amy濃度的新鮮冰凍血清樣本。

1.3 實驗方法

1.3.1 參考方法 按照IFCC參考測量程序，用JCCLS CRM001c驗證參考方法的正確度，3次測量結(jié)果要求在“認定值±不確定度”范圍內(nèi)。用Randox多項質(zhì)控驗證參考方法的精密度，每日測量5次，連續(xù)測量2 d，10次測量變異系數(shù)(CV)<1%。正確度和精密度達到要求后，測定40份不同Amy濃度的新鮮冰凍血清樣本。

1.3.2 常規(guī)方法 按使用說明書設定參數(shù)，以Randox多項校準品為校準物質(zhì)。常規(guī)系統(tǒng)A校準值選用Roche PNPG7方法，定值為274 U/L；常規(guī)系統(tǒng)B選用Randox Liquid stable PNPG7方法，定值為308 U/L。用JCCLS CRM001c評價常規(guī)方法的正確度。用Randox多項質(zhì)控品驗證常規(guī)方法的精密度，每日測量5次，連續(xù)測量2 d，10次測量CV<1.5%。精密度達到要求后，測定40份不同Amy濃度新鮮冰凍血清樣本。

1.4 統(tǒng)計學分析 根據(jù)EP9-A3文件[2]要求，判斷各測量數(shù)據(jù)的有效性。用SPSS 19.0軟件進行回歸和偏移分析，比較回歸方程的95%偏移預測區(qū)間與預期偏移值。根據(jù)2012年原衛(wèi)生部頒布的臨床生物化學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量標準[3]行業(yè)標準，可接受預期偏移值設定為1/2總誤差：±7.5%。

2 結(jié)果

2.1 Amy國際參考物質(zhì)JCCLS CRM001c在3個系統(tǒng)的檢測結(jié)果 參考方法系統(tǒng)的測量結(jié)果為349.9 U/L，與認定值偏移0.55%；常規(guī)系統(tǒng)A和B的測量結(jié)果分別為341.2 U/L、396.7 U/L，與認定值偏移分別為-1.95%、13.99%。

2.2 精密度結(jié)果 IFCC參考測量程序用Randox多項質(zhì)控品驗證參考方法的精密度，CV<1%；常規(guī)系統(tǒng)的檢測性能用Randox多項質(zhì)控品驗證方法的精密度，CV<1.5%，結(jié)果見表1。

表1 3個系統(tǒng)精密度測量結(jié)果

2.3 離群值檢驗結(jié)果

2.3.1 目測法 以IFCC參考測量方法作為比對方法，世紀沃德的常規(guī)系統(tǒng)為待評方法，40份樣本結(jié)果繪制散點圖，未發(fā)現(xiàn)離群值。

2.3.2 ESD法(extreme studentized deviate) 根據(jù)EP9-A3離群值ESD檢驗方法計算ESD1、λ1，ESD1<λ1，未發(fā)現(xiàn)離群值點。

2.4 偏移初步估算 繪制IFCC參考系統(tǒng)和常規(guī)系統(tǒng)A和B間差值頻數(shù)柱狀圖，圖形均未呈經(jīng)典鐘形曲線，非正態(tài)分布，利用中位數(shù)作為方法間估算的偏移，經(jīng)計算40份樣本差值的中位數(shù)分別為-2.9%和14.2%，常規(guī)系統(tǒng)A小于可接受標準，常規(guī)系統(tǒng)B超過可接受標準。

2.5 回歸分析 根據(jù)EP9-A3[2]進行OLR回歸分析，常規(guī)系統(tǒng)A和B回歸方程分別為Y=0.964X+0.376、Y=1.095X+3.131，其中X和Y分別代表IFCC參考方法和常規(guī)系統(tǒng)的測量結(jié)果，斜率的95%CI分別為0.959～0.968、1.091～1.100，偏移分別為-3.6%、9.5%，常規(guī)系統(tǒng)A小于可接受標準，常規(guī)系統(tǒng)B超過可接受標準。淀粉酶的醫(yī)學決定水平是200 U/L，代入回歸方程，偏移分別為-3.4%、11.1%，常規(guī)系統(tǒng)A小于可接受標準，常規(guī)系統(tǒng)B超過可接受標準。

3 討論

根據(jù)2016年國家衛(wèi)生計生委臨床檢驗中心室間質(zhì)量評價數(shù)據(jù)[4]，參加Amy檢測的臨床實驗室有1 742家，其中有1 274家(73.13%)臨床實驗室選用了與IFCC參考方法相同底物的常規(guī)方法，測量最大值幾乎是最小值的2倍。陳寶榮等[5]用IFCC參考方法評價了11個常規(guī)系統(tǒng)測量Amy的檢測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)常規(guī)系統(tǒng)中校準品是影響檢測結(jié)果的重要原因。

Randox多項校準品提供了多個系統(tǒng)的值，單純從理論上很難判斷和選擇合適的定值。本研究首先篩選出與IFCC方法使用相同底物的方法，以批號753UE的Randox多項校準品CAL235為例，共有5個方法：Siemes，265 U/L；Biotrol，267 U/L；Randox-Ethylidene PNP G7，219 U/L；Randox Liquid stable PNPG7，301 U/L；Roche PNPG7，259 U/L。Randox兩種方法差異24.35%，Roche和Randox liquid兩種方法差異16.22%。本研究選取了市場上比較常用的兩種定值：Roche定值和Randox liquid定值，分別與世紀沃德試劑組成常規(guī)系統(tǒng)A和常規(guī)系統(tǒng)B，按照EP9-A3[2]的要求，與IFCC參考方法比較。研究發(fā)現(xiàn)選擇Roche定值即常規(guī)系統(tǒng)A結(jié)果可接受，常規(guī)系統(tǒng)B結(jié)果偏移大于預期偏移，結(jié)果不可接受。通過本研究，明確了世紀沃德Amy試劑盒可選用Randox多項校準品為校準品，定值選擇Roche PNPG7。

國外生化試劑廠家不僅提供試劑，同時提供配套校準品和質(zhì)控品，理論上已經(jīng)實現(xiàn)了溯源。隨著國內(nèi)生化試劑研發(fā)、生產(chǎn)的發(fā)展，國產(chǎn)試劑的質(zhì)量性能已經(jīng)完全可以滿足臨床需要，國產(chǎn)試劑逐漸被臨床實驗室接受，臨床實驗室在選擇國產(chǎn)試劑時，通常出于經(jīng)濟及質(zhì)量控制等原因的考慮，會選擇國外知名品牌的校準品和質(zhì)控品，構成開放系統(tǒng)。ISO 15189[6]規(guī)定實驗室應對常規(guī)試劑檢測系統(tǒng)驗證檢測結(jié)果是否可接受。陳寶榮等[5]報道用自建的準二級標準物質(zhì)為校準品對4個自建常規(guī)系統(tǒng)進行校正，3個系統(tǒng)可得到與IFCC參考方法一致的結(jié)果，該研究的準二級標準物質(zhì)為新鮮冰凍血清樣本，由參考實驗室使用參考方法定值，定值技術要求高，成本花費大。國內(nèi)大量的臨床常規(guī)實驗室不具備參考實驗室條件，使用準確可靠的商品化校準品、質(zhì)控品進行常規(guī)檢測是臨床實驗室經(jīng)濟可行的首選方法。

對于開放系統(tǒng)，國內(nèi)各試劑生產(chǎn)廠家應建立參考方法，使用參考物質(zhì)做好溯源性研究，從而保證常規(guī)試劑臨床檢測結(jié)果的可靠性和一致性。

[1]Schumann G, Aoki R, Ferrero CA,etal. IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37 ℃. Part 8. Reference procedure for the measurement of catalytic concentration of α-Amylase[J]. Clin Chem Lab Med, 2006,44(9):1146-1155.

[2]CLSI EP9-A3. Measurement procedure comparison and bias estimation using patient samples, approved guideline-third edition[S]. Wayne, PA:CLSI,2013.

[3]WS/T 403-2012.臨床生物化學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量指標[S].衛(wèi)生行業(yè)標準, 2012.

[4]衛(wèi)生部臨檢中心常規(guī)化學回報結(jié)果[EB/OL].(2016). http://www.clinet.com.cn/.

[5]陳寶榮，孫慧穎，邵燕，等. 用IFCC參考方法評價11個常規(guī)系統(tǒng)測量血清α-淀粉酶結(jié)果的正確性[J]. 臨床檢驗雜志, 2011,29(4):309-313.

[6]ISO 15189.Medical laboratories-particular requirements for quality and competence[S]. ISO, 2003.

(本文編輯：王海燕)

Selection and evaluation of calibrators for the conventional measurement system of serum α-Amylase

HUANGYan1,ZONGYu1,JIANJuan1,MaHuai-an2

(1.Research&DevelopmentDepartment,BeijingBioassayTechnologiesCo.,LTD,Beijing102200; 2.DepartmentofClinicalLaboratory,EyeHospital,ChinaAcademyandChineseMedicalSciences,Beijing100040,China)

Objective To select the calibrator for the conventional measurement system of serum α-Amylase (Amy). Methods The Amy levels of forty frozen serum samples were detected by the IFCC reference method (reference system), the conventional system A which used the Bioassay routine reagent and Randox calibrator, and was calibrated by the Roche PNPG7 method, and the conventional system B which used the Bioassay routine reagent and Randox calibrator, and was calibrated by the Rondox liquid stable PNPG7 method, respectively, and the acceptability of the two conventional systems was evaluated. Results The regression equations of the measurement values between the IFCC reference method and the conventional systems A and B wereY=0.964X+0.376 andY=1.095X+3.131, respectively. Among them,XandYrepresented the results of the IFCC reference method and the conventional system, respectively. Compared with the IFCC reference method, the results of the conventional system A was reliable. Conclusion With the guidance of the IFCC reference method, the domestic biochemical reagents matched with the suitable calibrators may provide the acceptable results.

α-Amylase; reference method; routine method; calibrator

10.13602/j.cnki.jcls.2017.02.19

黃妍，1972年生，女，碩士，研究方向為臨床生化診斷試劑研發(fā)、產(chǎn)品溯源及質(zhì)量管理。

馬懷安，副研究員，碩士，E-mail:mha001@163.com。

R446

A

2016-11-02)