徐敏嫦+陳轉(zhuǎn)艮+梁淑貞+林維茂

【摘要】 目的 探討超高效合相色譜技術(shù)測(cè)定中藥黃芪中黃酮類化合物成分的效果。方法 采用超高效合相色譜技術(shù)對(duì)中藥黃芪中黃酮類化合物的成分進(jìn)行測(cè)定， 選擇色譜柱：Agilent Cu（250.0 mm×4.6 mm， 5 μm）；流速：1 ml/min；流動(dòng)相：甲醛-水梯度洗脫；檢測(cè)波長為254 mm；并選擇適宜的溫度。分析結(jié)果。結(jié)果 精密度實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果良好， 且供試品溶液的穩(wěn)定性和重復(fù)性良好， 其中算出對(duì)照品面積的RSD分別為2.5%、1.7%、1.5%、2.2%、1.8%、1.6%。結(jié)論 應(yīng)用超高效合相色譜技術(shù)測(cè)定中藥黃芪中黃酮類化合物的成分效果顯著， 操作簡便， 精確度高， 具有較強(qiáng)的可靠性， 是理想的測(cè)定中藥黃芪中黃酮類化合物的成分方式， 值得推廣。

【關(guān)鍵詞】 超高效合相色譜技術(shù)；中藥黃芪中黃酮類；化合物；成分

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.04.095

中藥黃芪中黃酮類化合物的成分主要包括防風(fēng)、黃氏、白術(shù)， 這些中藥均為臨床上治療反復(fù)上呼吸道感染的經(jīng)典藥方， 其具有很好是免疫調(diào)節(jié)作用。目前， 有研究表明藥理學(xué)中的黃芪中黃酮類化合物成分可大大降低患者大腦動(dòng)脈栓塞率， 而且還能有效增加缺血組織抗癢化酶的水平。本文作者經(jīng)過建立一組超高效合相色譜技術(shù)對(duì)中藥黃芪中黃酮類化合物的成分進(jìn)行檢測(cè)定， 現(xiàn)將具體內(nèi)容報(bào)告如下。

1 儀器與材料

1. 1 儀器 采用Agilent1200高效的液相儀， 系列四元梯度汞、自動(dòng)進(jìn)樣器， 并選擇二極管陣列檢測(cè)器， 便于檢測(cè)DAD， 然后選擇天津四友化學(xué)試劑公司生產(chǎn)的甲醇試劑；中國藥品生物制品檢定所制造的黃氏甲苷對(duì)照品試劑；雙蒸水；超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司， KQ-400KDE）；電子分析天平（Mettler公司， AB135-S）。

1. 2 材料 色譜純包括甲醇、乙腈、異丙醇， 而水為超純水， 對(duì)照品槲皮素、芒柄花素、山奈酚、芒柄花苷都是來自于中國藥品生物制品檢定所。甘肅和陜西產(chǎn)的膜莢黃氏的干燥根， 還有中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所教授鑒定內(nèi)蒙古產(chǎn)為豆科植物蒙古黃氏的干燥根， 毛蕊異黃酮苷是購自于北京恒元啟天化工技術(shù)研究院， 而且純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)一般>98%。

2 方法與結(jié)果

2. 1 精密度實(shí)驗(yàn) 選取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液， 根據(jù)色譜的條件進(jìn)行重復(fù)性是進(jìn)樣約6次， 然后分別計(jì)算毛蕊異黃酮苷、槲皮素、山奈酚、毛蕊異黃酮、芒柄花苷、芒柄花峰的面積， 且每次進(jìn)樣2 μl測(cè)定， 結(jié)果表明此方法的精密度檢驗(yàn)較好， 毛蕊異黃酮苷、槲皮素、山奈酚、毛蕊異黃酮、芒柄花苷、芒柄花峰的面積分別為1.63%、1.74%、1.45%、1.50%、0.98%、1.26%。

2. 2 色譜的條件 色譜柱Agilent Cu（250.0 mm×4.6 mm， 5 μm）；流速為1 ml/min， 進(jìn)樣量為2 μl；流動(dòng)相A為甲醛水0.1%， 流動(dòng)相B為7∶3的甲酸乙腈-異丙醇梯度洗脫0.1%；檢測(cè)波長為254 mm；柱溫約為30℃。

2. 3 對(duì)照組品溶液與供試品溶液的制備 分別給予對(duì)照品毛蕊異黃酮苷、槲皮素、山奈酚、毛蕊異黃酮、芒柄花苷、芒柄花峰精密稱取1.3、1.5、1.4、1.5、1.4、1.4 mg， 然后放置于1 ml的量瓶中， 再加入甲醛到刻度尺寸高度， 且搖勻使其混合， 接著配制成混合性的對(duì)照品儲(chǔ)備液。對(duì)于供試品溶液的制備， 首先選取大約2.0 g的藥材粉末， 同樣精密稱定， 然后放置于具塞錐形瓶里， 再加入25 ml的甲醇， 并冷制溫室中保存， 超聲40 min。當(dāng)過濾到25 ml量的瓶子中時(shí)， 可適當(dāng)加入甲醇到規(guī)定的刻度， 經(jīng)過0.22 μm的微孔慮膜過濾， 隨后搖勻， 最后再次取續(xù)濾液， 即可完成供試品溶液的制備。

2. 4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 在操作穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的過程中， 應(yīng)按照供試品溶液的制備， 在溫室下測(cè)定0、2、4、6、8、12、24 h供試品溶液的穩(wěn)定性情況。然后以峰面積為指標(biāo)對(duì)毛蕊異黃酮苷、槲皮素、山奈酚、毛蕊異黃酮、芒柄花苷、芒柄花素的RSD進(jìn)行測(cè)定， 結(jié)果測(cè)得出以上對(duì)照品的RSD分別為2.3%、1.7%、1.6%、1.5%、1.9%、2.1%， 以上數(shù)據(jù)充分說明了供試品溶液在24 h內(nèi)的穩(wěn)定性較好。

2. 5 重復(fù)性考察 針對(duì)供試品溶液的制備進(jìn)行考察， 首先選取2.0 g的黃氏粉末， 同樣按照供試品溶液的制備然后平行制備6份的供試品溶液， 并在色譜條件下分析其考察效果。然后計(jì)算出毛蕊異黃酮苷、槲皮素、山奈酚、毛蕊異黃酮、芒柄花苷、芒柄花峰面積的RSD， 結(jié)果計(jì)算出其面積RSD分別為2.5%、1.7%、1.5%、2.2%、1.8%、1.6%， 以上數(shù)據(jù)表明了供試品溶液的重復(fù)性良好。

3 討論

近年來， 對(duì)于黃酮類成分含量測(cè)定方面的報(bào)道相對(duì)較多， 一般常見的為高效液相色譜法、薄層色譜法以及液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法等， 而液相色譜質(zhì)譜法， 采用的儀器價(jià)格比較昂貴[1-6]， 一般在國內(nèi)還沒有被普遍使用；層析色譜與高效液相色譜法的特異性基本一樣， 其干擾物質(zhì)比較多， 而且定量不準(zhǔn)確， 分析的時(shí)間液比較長， 不能夠同時(shí)測(cè)定多種物質(zhì)[2， 7]。高效液相色譜法能夠通過精確調(diào)節(jié)流動(dòng)相強(qiáng)度、壓力和溫度， 并且在整個(gè)分離過程中具有較好的重復(fù)性[3]。不僅如此， 高效液相色譜法還具有較高的線速度和較低的密度， 其在分離過程中具有很高的柱效， 分析速度快， 靈敏度高， 有機(jī)溶劑使用量極少[4]。與氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法相比， 其具有較高的溶解能力， 比較適用于分離難揮發(fā)和熱不穩(wěn)定性物質(zhì)， 但是并不適合于難揮發(fā)及熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分離[5]。

本研究采用超高效合相色譜法同時(shí)測(cè)定黃芪中的幾種主要黃酮類化合物， 實(shí)驗(yàn)表明， 本方法靈敏度高、操作快速準(zhǔn)確、重復(fù)性好、實(shí)用性強(qiáng)， 是一種新型的分析儀器， 可為黃酮類化合物的定性與定量檢測(cè)提供了廣泛的選擇性， 也是一種高效可行的色譜檢測(cè)方法。本次實(shí)驗(yàn)采用的是采用超高效合相色譜法對(duì)毛蕊異黃酮苷、槲皮素、山奈酚、毛蕊異黃酮、芒柄花苷、芒柄花素進(jìn)行測(cè)定， 其中甘肅的毛蕊異黃酮苷、毛蕊異黃酮、芒柄花苷含量比陜西的高。而內(nèi)蒙古黃芪的干燥根具有味甘， 性溫， 歸肺、脾經(jīng)的效果；且具有補(bǔ)氣固表、斂瘡生肌的作用。在臨床上適用于氣虛水腫、氣虛乏力、表虛自汗、慢性腎炎蛋白尿、糖尿病等癥。該方法的精密度、重復(fù)性以及考察的結(jié)果比較穩(wěn)定， 而且可靠。有研究表明[6]， 黃酮類成分作為其有效成分之一， 它不僅具有降血脂、抗菌抗病毒、抗氧自由基的作用， 而且還具有抗缺血， 以及改善血象的作用。

綜上所述， 應(yīng)用超高效合相色譜技術(shù)測(cè)定中藥黃芪中黃酮類化合物的成分效果令人十分滿意， 不但操作簡便， 精確度高， 而且具有較高的可行性， 值得在臨床中廣泛推行。

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