徐煥華+汪美汐+譚洪玲+王宇光+湯響林+肖成榮+李樺+高月+馬增春

[摘要]探究臨床用量的復(fù)方黃黛片及大劑量君藥雄黃對大鼠肝臟主要藥物代謝酶（CYP450）酶活性的影響及在mRNA水平的調(diào)控作用。以Wistar大鼠為研究對象，受試藥物給予14 d后，采用Cocktail體外孵育法結(jié)合HPLC-MS/MS技術(shù)對大鼠肝中CYP1A2，CYP2B，CYP3A，CYP2C各亞酶的活性進(jìn)行測定，并利用實時熒光定量PCR技術(shù)對上述亞型的mRNA水平表達(dá)進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，復(fù)方黃黛片顯著誘導(dǎo)CYP1A2，CYP2B酶活性，抑制CYP3A酶活性，結(jié)果與mRNA的表達(dá)具有一致性，但其單味藥卻呈現(xiàn)出弱于其甚至是相反的現(xiàn)象；不同劑量的雄黃組之間對酶活性及mRNA的表達(dá)結(jié)果亦呈現(xiàn)非常顯著的不一致性。這些現(xiàn)象可能與復(fù)方黃黛片的配伍增效或減毒有關(guān)。CYP450酶的研究結(jié)果亦可以提示，復(fù)方黃黛片與其他藥物合用時有可能產(chǎn)生藥物相互作用。

[關(guān)鍵詞]復(fù)方黃黛片； 雄黃； 細(xì)胞色素P450； 肝微粒體； 酶活性

[Abstract]To investigate the effect of clinical dose of Realgar-Indigo Naturais formula （RIF） and large-dose of Realgar on main drug-metabolizing enzymes CYP450s of rat liver， as well as its regulatory effect on mRNA expression. Wistar rats were administrated orally with tested drugs for 14 days. A Cocktail method combined with HPLC-MS/MS was used in the determination of 4 cytochrome P450 isozymes （CYP1A2， CYP2B， CYP3A and CYP2C） in liver of the rats， and the mRNA expression levels of the above subtypes were detected by real-time fluorescent quantitative PCR. The results showed that RIF can significantly induce CYP1A2 and CYP2B enzyme activity， and inhibit CYP3A enzyme activity. This result was consistent with the mRNA expression. However， its single compound showed weaker or even contrary phenomenon. Different doses of Realgar also showed significant inconsistencies on CYP450 enzymes activity and mRNA expression. These phenomena may be relevant with RIF compatibility synergies or toxicity reduction. The results can also prompt drug interactions when RIF is combined with other medicines in application.

[Key words]Realgar-Indigo Naturalis formula； realgar； cytochrome P450； liver microsome； enzyme activity

細(xì)胞色素P450（cytochrome P450， CYP450）氧化酶系統(tǒng)是參與機體絕大多數(shù)藥物、外源性物質(zhì)和內(nèi)源性物質(zhì)進(jìn)行Ⅰ相氧化代謝的主要酶類^[1-2]，臨床使用的藥物有90%以上由其代謝^[3]。因此，該酶在藥物代謝以及藥物相互作用的研究中有著重要地位。近年來，由于中藥應(yīng)用推廣呈現(xiàn)良好態(tài)勢，而藥源性損害事件也屢有報道^[4]，因此，基于P450酶系統(tǒng)的中藥與其活性成分以及組分配伍的安全性和療效研究具有十分重要的意義 [5-7]。對確有療效的有毒中藥的相關(guān)研究更為重要。

含砷制劑（雄黃、砒霜）在臨床治療急性早幼粒細(xì)胞白血?。╝cute promyelocytic leukemia， APL）時表現(xiàn)出較好的療效^[8-9]，復(fù)方黃黛片（RIF）就是含砷制劑的主要代表藥物。其由國醫(yī)大師黃世林發(fā)明，由雄黃、青黛、丹參和太子參組成，臨床主治為清熱解毒，益氣生血，用于初治的APL，療效顯著。復(fù)方黃黛片中君藥雄黃作為確有療效的有毒中藥，尤為受到關(guān)注。目前對復(fù)方黃黛片的研究大多聚焦于臨床及藥理作用的分子機制，因此，本實驗針對CYP450酶系統(tǒng)，通過觀察給藥后大鼠體重、血液指標(biāo)、CYP各亞酶酶活性水平及mRNA轉(zhuǎn)錄水平等的變化，初步探究臨床用量的復(fù)方黃黛片與其各組分以及大劑量君藥雄黃對大鼠肝臟主要藥物代謝酶的影響。

1 材料

1.1 藥品與試劑

復(fù)方黃黛片（每片含水飛雄黃39.2 mg，青黛90.4 mg，丹參108.0 mg，太子參32.4 mg，硬脂酸鎂2.7 mg）由安徽省天康藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號150402；水飛雄黃購于北京華邈中藥工程技術(shù)開發(fā)中心，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所馬百平研究員鑒定；青黛、丹參、太子參均購自北京同仁堂藥業(yè)股份有限公司；CYP同工酶CYP1A2，CYP2B6，CYP3A4，CYP2C9的特異性底物以及相應(yīng)代謝產(chǎn)物的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)非那西丁/對乙酰氨基酚（phenacetin/acetaminophen）、安非他酮/羥基安非他酮（bupropion/hydroxybupropion）、咪達(dá)唑侖/1′-羥基咪達(dá)唑侖（midazolam/1′-hydroxymidazolam）、甲苯磺丁脲/4-羥基甲苯磺丁脲（tolbutamide/4-hydroxytolbutamide）來源于USP標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或Sigma公司；NAPDH購于Roche公司；鹽酸普萘洛爾標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)購于中國食品藥品檢定研究院；甲醇和乙腈均為色譜級，購于Fisher公司；Ultra RNA提取試劑盒和BCA蛋白定量試劑盒均購于CWBIO公司；逆轉(zhuǎn)錄、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試劑盒為TransScript公司產(chǎn)品；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 分組及給藥

雄性Wistar大鼠（SPF級），體重（200±10） g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，許可證號SCXK（軍）-2012-0004。大鼠給予標(biāo)準(zhǔn)飼料和水，飼養(yǎng)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院27號院動物實驗室，12 h日夜節(jié)律。飼養(yǎng)3 d后利用SAS隨機分組程序根據(jù)體重隨機分為正常對照組（NC組）、苯巴比妥組（PB組）、復(fù)方黃黛片組（RIF組）、雄黃臨床用量組（RCD組）、雄黃大劑量組（RLD組，為雄黃臨床用量的20倍）、青黛臨床用量組（QD組）、丹參臨床用量組（DS組）、太子參臨床用量組（TZS組），每組8只。各實驗組劑量依據(jù)復(fù)方黃黛片臨床使用劑量設(shè)置，并折算成大鼠的等效劑量。其中NC組灌胃純凈水；PB組于實驗結(jié)束前3 d連續(xù)腹腔注射給予苯巴比妥溶液，劑量為80 mg·kg^-1·d^-1；RCD組（104.4 mg·kg^-1·d^-1）、RLD組（2 088.0 mg·kg^-1·d^-1）、QD組（241.2 mg·kg^-1·d^-1） 3個組別的藥材水飛雄黃和青黛成品均為超細(xì)粉，按照上述劑量計算，直接稱取藥材粉末適量，配制成所需濃度的混懸液即可；RIF組（720.0 mg·kg^-1·d^-1）和TZS組（86.4 mg·kg^-1·d^-1）的藥物分別粉碎后研成細(xì)粉，過100目篩后加純凈水制成混懸液；DS組（288.0 mg·kg^-1·d^-1）供試液制備方法為：精密稱取丹參，加10倍量純凈水，煎煮4次，每次2 h，濾液合并，52 ℃減壓濃縮至所需濃度。灌胃給藥（5 mL·kg^-1），連續(xù)14 d，于第15天處死動物，采血用于血液分析和血清生化分析，取肝臟并制備肝微粒體。

2 方法

2.1 動物體重

于分組時、給藥前、給藥第7天和解剖前分別稱量各組動物體重。

2.2 血象和血清生化指標(biāo)檢測

采用Sysmex 2000i型血細(xì)胞分析儀檢測大鼠常規(guī)血象，另采用日立7180型生化分析儀分析丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、總膽紅素（TBIL）、肌酐（CREA）等生化指標(biāo)。

2.3 cocktail 探針法測定各實驗組對大鼠肝臟CYP450酶活性水平的影響

2.3.1 肝微粒體的制備 肝微粒體的制備采用差速離心法^[10]。大鼠禁食不禁水12 h，頸椎脫臼處死，迅速剪開腹腔，腹腔靜脈采血，結(jié)扎上腔靜脈，用4 ℃生理鹽水由門靜脈灌洗至肝臟呈土黃色。將肝臟剪碎，按1∶4加入TMS緩沖液（Tris-base 12.11 g，MgCl₂·6H₂O 1.21 g，蔗糖137 g，溶于2 L超純水中，濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.5，儲存于4 ℃?zhèn)溆茫≈袆驖{，勻漿液于4 ℃，12 000×g離心20 min，棄沉淀，留上清。上清液于4 ℃，105 000×g離心60 min，棄上清，沉淀部分即為所需的肝微粒體。按初始勻漿時每克肝組織加入1 mL Tris-HCl儲存液（Tris-base 12.12 g，EDTA-2Na 0.37 g，加入蒸餾水800 mL，濃鹽酸調(diào)節(jié)pH為7.5，加入200 mL甘油混合均勻，儲存于4 ℃?zhèn)溆茫?，重懸微粒體，冰浴，玻璃勻漿管手動勻漿，使肝微粒體分散均勻，分裝于凍存管中，-80 ℃保存。微粒體蛋白濃度采用BCA法定量，定量方法參照BCA蛋白定量試劑盒。

2.3.2 肝微粒體孵育體系 同時檢測4種主要的CYP450亞型（CYP1A2，CYP2B6，CYP3A4，CYP2C9）活性變化。孵育體系總體積200 μL，其中肝微粒體蛋白總質(zhì)量濃度為0.5 g·L^-1，NADPH終濃度為1 mol·L^-1，CYP450特異性探針?biāo)幬餄舛纫来螢榉悄俏鞫。?0 μmol·L^-1）、安非他酮（25 μmol·L^-1）、甲苯磺丁脲（25 μmol·L^-1）、咪達(dá)唑侖（2.5 μmol·L^-1），不足部分以K₂HPO4/KH₂PO4緩沖液（0.05 mol·L^-1，pH 7.4）補足體系至200 μL。在37 ℃水浴中預(yù)孵育5 min，加入同時預(yù)孵育5 min的NAPDH啟動反應(yīng)，繼續(xù)孵育30 min。孵育完成后加入冰冷的由甲醇-乙腈（1∶1）配制的含內(nèi)標(biāo)鹽酸普萘洛爾800 μg·L^-1的終止劑溶液200 μL停止反應(yīng)，渦旋1 min，13 000×g，4 ℃離心20 min，取上清液進(jìn)樣檢測，測得酶活性。

2.3.3 代謝產(chǎn)物HPLC-MS/MS檢測條件^{[11] 色譜條件：流動相A（含0.1%甲酸和5 mmol·L-1甲酸銨的純水），流動相B（含0.1%甲酸的乙腈），梯度洗脫，0～1.5 min，30%B，1.5～3.5 min，30%～95%B，3.5～3.6 min，95%～30%B，3.6～4.5 min，30%B，流速0.45 mL·min-1；柱溫25 ℃；進(jìn)樣體積10 μL。}

質(zhì)譜條件：以電噴霧電離離子源（ESI源），采用質(zhì)譜多級反應(yīng)檢測（multiple reaction monitoring， MRM）方式檢測，毛細(xì)管電壓4 000 V，毛細(xì)管溫度320 ℃，霧化電壓25 psi（1 psi=6.895 kPa），干燥氣流速10 L·min^-1，其他質(zhì)譜分析參數(shù)見表1。

2.4 熒光定量PCR技術(shù)測定各受試物對大鼠肝臟CYP450酶mRNA水平的影響

2.4.1 肝組織總RNA的提取 大鼠處死后迅速取出肝臟，至于液氮中預(yù)凍，-80 ℃保存。按CWBIO公司Ultra RNA提取試劑盒說明書提取肝臟總RNA。電泳分析表明18S和28S條帶清晰可見，A260/A280在1.8～2.0，總RNA片段完整未降解，可用。

2.4.2 逆轉(zhuǎn)錄（RT）反應(yīng) RNA上樣量為1 μg，依據(jù)測得的RNA濃度計算加入的體積，另加入2×TS Reaction Mix 10 μL，RT/RI Enzyme Mix 1 μL，Anchored Oligo（dT）₁₈ 1 μL，RNase-free Water補足反應(yīng)體系至20 μL，混勻。逆轉(zhuǎn)錄條件為42 ℃，30 min，85 ℃，5 min，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物-20 ℃保存待用。

2.4.3 實時定量PCR（RT-qPCR）反應(yīng)測定mRNA表達(dá)水平 RT-qPCR反應(yīng)依據(jù)TransScript公司qPCR試劑盒說明書進(jìn)行，反應(yīng)總體系20 μL，分別為：逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA 2 μL，2×TransStart Green qPCR SuperMix 10 μL，F(xiàn)orward Primer 0.4 μL，Reverse Primer 0.4 μL，Passive Reference Dye 0.4 μL，ddH₂O 6.8 μL。RT-qPCR反應(yīng)條件為：94 ℃，30 s，94 ℃，5 s，60 ℃，30 s，循環(huán)40次，以GAPDH作為內(nèi)參基因。mRNA表達(dá)水平用比較閾值法進(jìn)行定量分析，所擴增的目的基因誘導(dǎo)或抑制的倍數(shù)=2-ΔΔCt，即RQ。單次試驗平行3個復(fù)孔，實驗重復(fù)3次。特異性引物序列見表2。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

數(shù)據(jù)用±s表示，采用SAS 8.1軟件兩因素析因設(shè)計的方差分析進(jìn)行組間比較，采用Graphpad prism軟件作圖。

3 結(jié)果

3.1 對大鼠體重的影響

分組時和給藥前各實驗組動物體重一致，與正常對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異；給藥第7天時，與正常對照組相比，雄黃大劑量組體重偏小非常顯著（P<0.01），太子參組體重增加，且有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；解剖前，除雄黃大劑量組體重偏小非常顯著（P<0.01），其余各實驗組與正常對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異，結(jié)果見表3。

3.2 對血象和血清生化指標(biāo)的影響

對血象數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，與正常對照組比較，其余各實驗組血象均無明顯改變，其值均在大鼠血象正常參考范圍內(nèi)；對血清生化指標(biāo)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，雄黃大劑量組表征肝臟功能的3個指標(biāo)ALT，AST，ALP較正常對照組均有升高，P分別為0.07，0.07，0.03，雄黃臨床用量組ALP與正常對照組比較顯著升高，提示雄黃對肝臟功能可能存在潛在影響，后續(xù)相同劑量相同給藥時間的另一批試驗中，對主要臟器的組織病理學(xué)進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)雄黃大劑量組肝臟細(xì)胞出現(xiàn)輕微的細(xì)胞變性，其余主要臟器未見明顯改變，結(jié)果見表4。

3.3 復(fù)方黃黛片和大劑量雄黃對大鼠肝微粒體CYP450酶活性的影響

結(jié)果顯示臨床用量的復(fù)方黃黛片及大劑量雄黃連續(xù)給藥14 d后，與正常對照組比較，復(fù)方黃黛片組和大劑量雄黃組均能顯著誘導(dǎo)CYP1A2酶活性（P<0.05），而雄黃臨床用量對酶活性沒有顯著影響，丹參組非常顯著的抑制了CYP1A2酶活性（P<0.01）；復(fù)方黃黛片組，雄黃大劑量組，青黛組和丹參組均能顯著誘導(dǎo)CYP2B的酶活性（P<0.05），但臨床用量的雄黃組及太子參組對CYP2B酶的活性具有非常顯著的抑制作用（P<0.01）；對于CYP3A的酶活性，除臨床用量的雄黃組于正常對照組比較無差異外，其余各實驗組均具有非常顯著的抑制CYP3A酶活性的作用（P<0.01）；復(fù)方黃黛片組對CYP2C的酶活性無顯著的誘導(dǎo)作用，大劑量雄黃組對CYP2C的酶活性具有非常顯著的誘導(dǎo)作用（P<0.01），結(jié)果見表5。

3.4 對CYP450酶各亞型mRNA表達(dá)的影響

結(jié)果顯示：PB組作為陽性對照組可顯著誘導(dǎo)各亞型mRNA的表達(dá)（P<0.01），與NC組比較，對于CYP1A2來說，各實驗組均顯著誘導(dǎo)CYP1A2 mRNA的表達(dá)（P<0.01），其中RIF組與RLD組誘導(dǎo)作用最為顯著，是RCD組的3.1倍；對于CYP2B1/2來說，RIF組、RLD組、QD組和DS組對CYP2B1/2 mRNA的表達(dá)有非常顯著的誘導(dǎo)作用，RCD組和TZS組對CYP2B1/2 mRNA的表達(dá)無明顯誘導(dǎo)作用；對于CYP2C11來說，RLD組能顯著誘導(dǎo)CYP2C11 mRNA的表達(dá)（P<0.01），RIF組和QD組對CYP2C11 mRNA的表達(dá)無明顯誘導(dǎo)作用，RCD組、DS組和TZS組對CYP2C11 mRNA的表達(dá)有顯著抑制作用（P<0.01），對于CYP3A1來說，各實驗組對CYP3A1 mRNA的表達(dá)均有非常顯著的抑制作用（P<0.01），雄黃大劑量組的抑制作用最為明顯，結(jié)果見圖1。

4 討論

在急性早幼粒細(xì)胞白血病的治療中，復(fù)方黃黛片經(jīng)常作為主藥與全反式維甲酸、地西他濱、沙利度胺、維A酸等諸多藥物合用^[12-13]，由此可能產(chǎn)生的潛在藥物相互作用不容忽視，本實驗對CYP450酶的研究結(jié)果能在一定程度上對復(fù)方黃黛片與其他藥物合用時有可能產(chǎn)生的藥物相互作用提供啟示。

在人體眾多CYP亞型中，CYP1A2，CYP2C9，CYP2B，CYP3A4 4種亞型占到由P450酶介導(dǎo)的藥物代謝的80%^[14-15]。在本研究中，選擇大鼠作為實驗對象，盡管其和人類在CYP450酶的亞型種類，表達(dá)和催化活性上確實存在差異，但是其依然作為一種被推薦使用的動物模型用于預(yù)測藥物在人體內(nèi)的代謝行為。且理論上說，人體CYP亞型CYP1A2，CYP2C9，CYP2B6，CYP3A4與鼠CYP亞型CYP1A2，

CYP2C11，CYP2B1/2，CYP3A1相對應(yīng)具有同源性^[2]。與此同時，上述幾種亞型在嚙齒類動物的外源性物質(zhì)活化與減毒過程中也扮演十分重要的角色。因此選擇大鼠作為實驗對象是合理的。

復(fù)方黃黛片對CYP1A2和CYP2B1/2 mRNA的表達(dá)均有顯著誘導(dǎo)作用，與此同時，復(fù)方中的單味藥卻表現(xiàn)出弱于復(fù)方的誘導(dǎo)作用甚至抑制作用；對CYP2C11 mRNA的表達(dá)無誘導(dǎo)作用，但雄黃（臨床用量）組、丹參組和太子參組卻受到顯著抑制；在CYP3A1 mRNA的表達(dá)上，各實驗組均受到不同程度的顯著抑制。大劑量雄黃組對CYP1A2，2B1/2，2C11 mRNA的表達(dá)有顯著的誘導(dǎo)作用，對CYP3A1的表達(dá)有顯著抑制作用，且抑制程度均高于其他實驗組。已檢測的酶活性數(shù)據(jù)也印證了上述結(jié)果。上述多個現(xiàn)象表明，復(fù)方黃黛片及其方中各組分對4種CYP酶mRNA的表達(dá)存在顯著的不一致，這種不一致性可能是由方中各組分的協(xié)同或拮抗作用產(chǎn)生的。而且這一作用可能在轉(zhuǎn)錄環(huán)節(jié)就已經(jīng)開始，并影響到酶活性。

基于CYP450酶的藥物相互作用與中藥組分配伍之間的毒效關(guān)系有著緊密聯(lián)系，課題組前期用現(xiàn)代藥理學(xué)方法證實了甘草“調(diào)和諸藥”的科學(xué)內(nèi)涵^[7]，課題組發(fā)現(xiàn)甘草及其主要成分甘草酸對CYP3A均能產(chǎn)生明顯的誘導(dǎo)作用，且確證了甘草效應(yīng)成分通過與PXR受體結(jié)合，繼而誘導(dǎo)CYP3A酶活性而加速了方劑中其他配伍中藥有效成分的代謝而起到調(diào)節(jié)諸藥，甚至是解毒的作用。本研究中，復(fù)方及單組分對CYP450酶活性及mRNA表達(dá)影響的不一致性，或許能從CYP450酶的角度揭示復(fù)方黃黛片組方的科學(xué)內(nèi)涵。但這還有待下一步的深入研究。

為進(jìn)一步研究君藥雄黃對CYP450酶的影響，本實驗設(shè)計了雄黃大劑量給藥組。梁愛華^[16]和陸遠(yuǎn)富^[17]的研究均表明，科學(xué)評價雄黃的毒性，其劑量設(shè)置的合理范圍應(yīng)當(dāng)在10～16倍。綜合考慮，為避免在14 d給藥期間出現(xiàn)過度不良反應(yīng)，又期望能看到對大鼠的輕微損害，結(jié)合預(yù)實驗結(jié)果，選擇臨床用量的20倍作為雄黃的大劑量組。結(jié)果顯示，雄黃大劑量組大鼠體重增長速度明顯低于其余實驗組，且ALT，AST，ALP等指標(biāo)均有明顯改變。后續(xù)實驗證實，此時已經(jīng)有輕微的肝損害發(fā)生?；诖饲疤幔治鲂埸S大劑量組對CYP450酶活性及mRNA表達(dá)的影響，結(jié)果表明雄黃大劑量組與臨床用量的雄黃組表現(xiàn)出顯著差異，提示雄黃對CYP450酶的影響可能與劑量相關(guān)，且雄黃大劑量組在CYP3A酶活性和mRNA表達(dá)水平上均顯著低于雄黃臨床用量組，而CYP3A是藥物代謝中最為重要的酶亞型，臨床上60%的藥物需經(jīng)CYP3A代謝排出體外^[18]，雄黃大劑量組出現(xiàn)肝臟細(xì)胞輕微變性，肝功能生化指標(biāo)的改變可能與CYP3A酶活性受到抑制導(dǎo)致雄黃不能順利排出體外而引起蓄積毒性有關(guān)。在本研究中，未設(shè)置線性劑量的雄黃組也是實驗的不足之處，但本實驗仍然為下一步的深入研究提供了可靠線索。且在后續(xù)研究中已經(jīng)證實，雄黃隨著劑量增大，對CYP3A酶的活性抑制增強，且具有線性相關(guān)，對其余3種CYP450酶活性其結(jié)果未呈現(xiàn)線性相關(guān)。相關(guān)實驗結(jié)果已另文發(fā)表。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Chen X M， Wei M， Zhang H M， et al. Effect of vanillin and ethyl vanillin on cytochrome P450 activity in vitro and in vivo[J].Food Chem Toxicol，2012，50（6）：1897.

[2]Han Y L， Li D， Ren B， et al. Evaluation of impact of Herba Erigerontis injection， a Chinese herbal prescription， on rat hepatic cytochrome P450 enzymes by cocktail probe drugs[J].J Ethnopharmacol，2012，139：104.

[3]Badal S， Williams S A， Huang G， et al. Cytochrome P450 1 enzyme inhibition and anticancer potential of chromene amides from Amyris plumieri[J].Fitoterapia，2011，82（2）：230.

[4]童瑞敏.何首烏及其制劑致藥物性肝損傷20例分析[J].山東中醫(yī)雜志，2015，34（12）：928.

[5]Wang Y G， Zhou J M， Ma Z C， et al. Pregnane X receptor mediated-transcription regulation of CYP3A by glycyrrhizin： a possible mechanism for its hepatoprotective property against lithocholic acid-induced injury[J]. Chem Biol Interact，2012，200（1）：11.

[6]趙春，李銀生，蔣美琳，等.細(xì)胞色素P450與外源物的相互作用研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2014，31（8）：1020.

[7]高月.基于藥物代謝酶的中藥毒性與毒理研究[J].毒理學(xué)雜志，2005，19（3）：175.

[8]Torka P， Al Ustwani O， Wetzler M， et al. Swallowing a bitter pill-oral arsenic trioxide for acute promyelocytic leukemia[J].Blood Rev，2016，30（3）：201.

[9]孫峰，陳楠楠，成玉斌.復(fù)方黃黛片治療急性早幼粒細(xì)胞白血病204例經(jīng)驗總結(jié)[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報，2008，6（6）：639.

[10]許龍龍，湯響林，馬增春，等.決明子水提液對大鼠肝臟CYP450酶的影響[J].中國中藥雜志，2016，41（8）：1504.

[11]梁淼.基于P450酶的四物湯配伍規(guī)律研究[D].南寧：廣西醫(yī)科大學(xué)，2014.

[12]韋惠琴，鐘衛(wèi)一.復(fù)方黃黛片聯(lián)合全反式維甲酸治療初發(fā)急性早幼粒細(xì)胞白血病的療效[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2013，15（11）：1864.

[13]謝瑋，龐纓，葉絮，等.復(fù)方黃黛片聯(lián)合沙利度胺治療難治或復(fù)發(fā)多發(fā)性骨髓瘤臨床觀察[J].廣州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，43（5）：28.

[14]Ingelman-Sundberg M. Pharmacogenetics of cytochrome P450 and its applications in drug therapy： the past， present and future[J].Trends Pharmacol Sci，2004，25（19）：193.

[15]Lewis D F. P450 structures and oxidative metabolism of xenobiotics[J].Pharmacogenomics，2003，4（4）：387.

[16]梁愛華，李春英，王金華，等.雄黃的毒性研究[J].中國中藥雜志，2011，36（12）：1889.

[17]陸遠(yuǎn)富，時京珍，石京山，等.科學(xué)評價含雄黃、朱砂中成藥的安全性[J].中國中藥雜志，2011，36（24）：3402.

[18]徐芝秀，石秀英，金科濤，等.甘草與海藻提取液合用對CYP3A1/2酶活性及mRNA表達(dá)的影響[J].中國藥師，2007，10（6）：515.

[責(zé)任編輯 曹陽陽]