朱嫦琳，薛雄燕，陳展?jié)?，谷愉愉，許揚(yáng)揚(yáng)，李煒煊

(1佛山市第一人民醫(yī)院，廣東佛山528000；2首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院)

血清HBcrAg、線性化HBsAg對(duì)隱匿性乙型肝炎的診斷價(jià)值

朱嫦琳1，薛雄燕1，陳展?jié)?，谷愉愉2，許揚(yáng)揚(yáng)1，李煒煊1

(1佛山市第一人民醫(yī)院，廣東佛山528000；2首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院)

目的 探討血清乙肝病毒核心相關(guān)抗原(HBcrAg)及線性化乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)對(duì)隱匿性乙型肝炎(OBI)的診斷價(jià)值。方法 選擇OBI患者63例(OBI組)、體檢健康者150例(對(duì)照組)，采用化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析法檢測(cè)兩組血清HBcrAg、線性化HBsAg，采用熒光定量PCR法檢測(cè)血清HBV DNA。采用受試者工作特征(ROC)曲線分析HBcrAg、線性化HBsAg二者單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)OBI的診斷效能。結(jié)果 OBI組和對(duì)照組血清HBcrAg陽(yáng)性率分別為90.5%和10.7%，線性化HBsAg陽(yáng)性率分別為42.9%和6.0%，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為125.5、42.9，P均<0.05)。相關(guān)分析顯示，HBV DNA與HBcrAg、HBV DNA、線性化HBsAg均呈正相關(guān)(R2分別為0.471 4、0.122 2、0.086 8，P<0.05或<0.01)。ROC曲線分析顯示，血清HBcrAg、線性化HBsAg診斷OBI的曲線下面積(AUC)分別為0.911(95%CI為0.864～0.946)、0.683(95%CI為0.616～0.745)，二者聯(lián)合檢測(cè)診斷OBI的AUC為0.895(95%CI為0.846～0.933)，血清HBcrAg對(duì)OBI的診斷效能顯著優(yōu)于線性化HBsAg(Z=6.134，P<0.05)，二者聯(lián)合檢測(cè)并不能提高其對(duì)OBI的診斷效能(Z=0.657，P>0.05)。當(dāng)血清HBcrAg、線性化HBsAg的最佳臨界值分別為100 U/mL、0.48 IU/mL時(shí)，血清HBcrAg診斷OBI的敏感性顯著高于線性化HBsAg(χ2=121.4，P<0.05)，特異性稍低于線性化HBsAg(χ2=3.034，P>0.05)，二者聯(lián)合檢測(cè)診斷OBI的敏感性和特異性較單獨(dú)檢測(cè)HBcrAg并未明顯提高(χ2分別為1.322、3.802，P均>0.05)。結(jié)論 血清HBcrAg與HBV DNA存在良好的相關(guān)性，對(duì)OBI的診斷效能優(yōu)于線性化HBsAg，但聯(lián)合檢測(cè)HBcrAg、線性化HBsAg并不能提高其診斷效能；血清HBcrAg可單獨(dú)作為診斷OBI的血清學(xué)指標(biāo)。

隱匿性乙型肝炎；乙肝病毒核心相關(guān)抗原；線性化乙型肝炎病毒表面抗原

隱匿性乙型肝炎(OBI)是乙肝病毒(HBV)感染的一種特殊形式，表現(xiàn)為乙肝病毒表面抗原(HBsAg)陰性而HBV DNA陽(yáng)性[1]。OBI可通過(guò)垂直傳播、輸血、器官移植等途徑傳播病毒，且與慢性肝病、肝癌等發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[2，3]。由于一般血清HBV標(biāo)志物不能有效檢出OBI[4]，目前診斷OBI時(shí)需采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)HBV DNA[5]，基層醫(yī)院無(wú)法開(kāi)展。乙肝病毒核心相關(guān)抗原(HBcrAg)包含乙肝病毒核心抗原(HBcAg)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)和p22cr蛋白，與肝組織cccDNA含量、HBV DNA具有良好的相關(guān)性[6]。線性化HBsAg是經(jīng)過(guò)理化因素處理HBsAg，使其結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，內(nèi)部隱藏的抗原表位被暴露，可提高HBV檢出率[7]。本研究探討血清HBcrAg、線性化HBsAg對(duì)OBI的診斷價(jià)值，旨在為OBI診斷提供更便捷的方法。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2008年3月～2015年12月佛山市第一人民醫(yī)院收治的OBI患者63例(OBI組)。均符合OBI診斷標(biāo)準(zhǔn)，即HBsAg陰性、HBV DNA陽(yáng)性。排除合并急慢性肝炎、肝硬化、肝癌及其他肝臟疾病者。其中，男37例、女26例，年齡19～63(33.2±13.1)歲。同期選擇在該院體檢的健康者150例(對(duì)照組)，男92例、女58例，年齡18～65(34.6±12.9)歲。兩組性別、年齡具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均知情同意。

1.2 血清HBcrAg、線性化HBsAg檢測(cè) 所有研究對(duì)象清晨空腹采集肘靜脈血4～5 mL，3 000 r/min離心15 min，分離血清，-80 ℃冰箱保存待測(cè)。血清HBcrAg、線性化HBsAg檢測(cè)采用LUMIPULSE G1200型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)及配套試劑，血清HBV DNA檢測(cè)采用ABI公司7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。所有操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。結(jié)果判定：HBcrAg>100 U/mL為陽(yáng)性，線性化HBsAg>5 IU/mL為陽(yáng)性，HBV DNA>500 copies/mL為陽(yáng)性；計(jì)算HBcrAg及線性化HBsAg陽(yáng)性率，并分析HBV DNA、HBcrAg及線性化HBsAg之間的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。采用受試者工作特征(ROC)曲線分析HBcrAg和線性化HBsAg對(duì)OBI的診斷效能，并確定最佳臨界值(cut-off值)，ROC曲線下面積(AUC)比較采用Hanley和McNeilZ檢驗(yàn)。ROC曲線分析采用MedCalc15.2.2軟件。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清HBcrAg及線性化HBsAg陽(yáng)性率比較 OBI組和對(duì)照組血清HBcrAg陽(yáng)性率分別為90.5%(57/63)、10.7%(16/150)，線性化HBsAg陽(yáng)性率分別為42.9%(27/63)、6.0%(9/150)。兩組HBcrAg、線性化HBsAg陽(yáng)性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為125.5、42.9，P均<0.01)。

2.2 HBV DNA、HBcrAg及線性化HBsAg的關(guān)系 HBV DNA與HBcrAg經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后，Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示，所有研究對(duì)象HBV DNA與HBcrAg、線性化HBsAg均呈正相關(guān)關(guān)系(R2分別為0.471 4、0.122 2，P均<0.01)，HBcrAg與線性化HBsAg亦呈正相關(guān)關(guān)系(R2=0.086 8，P<0.01)。見(jiàn)圖1。

圖1 HBV DNA、HBcrAg及線性化HBsAg的關(guān)系

2.3 血清HBcrAg及線性化HBsAg的ROC曲線分析 血清HBcrAg、線性化HBsAg及二者聯(lián)合檢測(cè)診斷OBI的ROC曲線見(jiàn)圖2。血清HBcrAg診斷OBI的AUC為0.911(95%CI為0.864～0.946)，線性化HBsAg診斷OBI的AUC為0.683(95%CI為0.616～0.745)，二者聯(lián)合檢測(cè)診斷OBI的AUC為0.895(95%CI為0.846～0.933)，血清HBcrAg對(duì)OBI的診斷效能明顯高于線性化HBsAg(Z=6.134，P<0.01)，二者聯(lián)合檢測(cè)并不能提高其對(duì)OBI的診斷效能(Z=0.657，P>0.05)。以血清HBcrAg、線性化HBsAg的最佳臨界值(cut-off值)分別為100 U/mL、0.48 IU/mL時(shí)，血清HBcrAg診斷OBI的敏感性、特異性分別為91.94%、89.40%，線性化HBsAg診斷OBI的敏感性、特異性分別為41.94%、94.04%，二者聯(lián)合檢測(cè)的敏感性、特異性分別為88.71%、82.72%。血清HBcrAg診斷OBI的敏感性高于線性化HBsAg(χ2=121.4，P<0.01)，但特異性稍低于線性化HBsAg(χ2=3.034，P>0.05)；二者聯(lián)合檢測(cè)診斷OBI的敏感性和特異性并未比單獨(dú)檢測(cè)HBcrAg有所提高(χ2分別為1.322、3.802，P均>0.05)。

圖2 血清HBcrAg、線性化HBsAg及二者聯(lián)合檢測(cè)診斷OBI的ROC曲線分析

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界約1/3的人群存在既往感染HBV證據(jù)，其中超過(guò)1/3的HBV攜帶者來(lái)自我國(guó)，是我國(guó)急慢性肝炎、肝硬化和肝癌等患者人數(shù)眾多的主要原因之一[8]。OBI是HBV感染的一種特殊形式，表現(xiàn)為血清HBV DNA陽(yáng)性、HBsAg陰性，可伴有或不伴有anti-HBc陽(yáng)性，是HBV通過(guò)輸血傳播的重要原因之一。OBI的感染率與HBV流行率密切相關(guān)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)HBsAg陽(yáng)性率高達(dá)7.2%，HBV DNA陽(yáng)性率亦逐年遞增[9，10]。HBsAg的高流行狀態(tài)提示OBI感染率可能較高。前期研究發(fā)現(xiàn)，HBsAg陰性而anti-HBc陽(yáng)性的人群中，HBV DNA的陽(yáng)性率高達(dá)70.4%[11]；廣州血液中心調(diào)查發(fā)現(xiàn)，篩檢HBsAg陽(yáng)性后，OBI的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)仍有0.061%[12]；深圳市血液中心對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行HBV DNA篩查發(fā)現(xiàn)，初次獻(xiàn)血者OBI發(fā)生率達(dá)0.105%[13]。以上結(jié)果提示，OBI在我國(guó)并不少見(jiàn)。OBI患者以現(xiàn)有的HBsAg檢測(cè)方法結(jié)果均為陰性，但肝臟中存在HBV DNA復(fù)制，血清中也能檢測(cè)到HBV DNA，極有可能發(fā)生HBV感染，是導(dǎo)致經(jīng)HBsAg篩查后仍有HBV傳播風(fēng)險(xiǎn)的主要原因之一[14,15]。此外，在實(shí)際臨床工作中，HBsAg篩查為陰性者多不進(jìn)行HBV DNA定量檢查，導(dǎo)致OBI漏診。

血清HBcrAg并非一種蛋白，其主要包含HBcAg、HBeAg和p22cr蛋白，這3種蛋白共享149個(gè)由前C/C區(qū)編碼的氨基酸序列，其中p22cr蛋白常存在于HBV DNA陰性的病毒顆粒中。有研究發(fā)現(xiàn)，血清HBcrAg水平與肝組織cccDNA、HBV DNA及其他病毒學(xué)標(biāo)志物均具有良好的相關(guān)性，可用于評(píng)價(jià)乙肝患者病情和患者肝組織學(xué)狀態(tài)[16,17]。HBcrAg最初的檢測(cè)方法為酶聯(lián)免疫分析法，其與PCR法檢測(cè)HBV DNA具有相似的敏感性[18]。目前檢測(cè)HBcrAg最常用的方法為化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析法，即使用單克隆抗體制成固相抗體，用另一株單克隆抗體標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶作為酶標(biāo)抗體，利用雙抗體夾心原理，通過(guò)測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度計(jì)算樣品中HBcrAg的含量[19]，由于不受anti-HBc、anti-HBe和前C區(qū)突變的影響，敏感性和特異性均較高，且檢測(cè)為全自動(dòng)化，無(wú)需專用實(shí)驗(yàn)室和專人操作[20]。線性化HBsAg是經(jīng)過(guò)理化因素處理過(guò)的HBsAg。傳統(tǒng)HBsAg檢測(cè)方法所用抗體主要針對(duì)的抗原表位可能發(fā)生突變而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果假陰性。線性化HBsAg檢測(cè)時(shí)，樣本通過(guò)變性處理，使其結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，原來(lái)隱藏在內(nèi)部的抗原表位被暴露，采用針對(duì)這些表位的單抗復(fù)合物作為檢測(cè)抗體，可大大提高HBV的檢出率。有研究發(fā)現(xiàn)，線性化HBsAg與傳統(tǒng)HBsAg具有良好的相關(guān)性，可檢測(cè)經(jīng)抗病毒治療患者血清中的HBsAg，且敏感性比傳統(tǒng)方法提高10倍以上[21]。因此，線性化HBsAg檢測(cè)可作為因病毒變異或受HBsAg檢測(cè)方法限制，而導(dǎo)致無(wú)法進(jìn)行OBI檢測(cè)的良好補(bǔ)充手段。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，OBI組血清HBcrAg、線性化HBsAg陽(yáng)性率均高于對(duì)照組，其中血清HBcrAg陽(yáng)性率高達(dá)90.5%，表明血清HBcrAg對(duì)OBI診斷有較強(qiáng)的提示作用。由于受方法學(xué)限制，OBI患者血清HBsAg未能通過(guò)現(xiàn)有方法有效檢出，可能造成臨床上漏診，而HBcrAg檢測(cè)可對(duì)其有效補(bǔ)充，大大提高OBI的檢出率。本研究還發(fā)現(xiàn)，血清HBV DNA、HBcrAg、線性化HBsAg三者兩兩均呈正相關(guān)關(guān)系，但HBcrAg與HBV DNA相關(guān)性更高。由于本研究納入的研究對(duì)象均未發(fā)生過(guò)急慢性肝炎且未經(jīng)過(guò)任何抗肝炎治療，因此認(rèn)為，在自然狀態(tài)下HBcrAg與HBV DNA相關(guān)性良好，可反映血清HBV DNA水平，與文獻(xiàn)[20，22]報(bào)道基本一致。提示在開(kāi)展HBV DNA檢測(cè)條件不足時(shí)，血清HBcrAg可作為較理想的替代手段。ROC曲線分析顯示，血清HBcrAg對(duì)OBI的診斷效能顯著優(yōu)于線性化HBsAg，二者聯(lián)合檢測(cè)并不能提高其對(duì)OBI的診斷效能，以血清HBcrAg的cut-off值為100 U/mL時(shí)，其診斷OBI的敏感性和特異性分別達(dá)到91.94%、89.40%，故臨床上可單獨(dú)用血清HBcrAg水平診斷OBI，而單獨(dú)或同時(shí)檢測(cè)血清線性化HBsAg對(duì)OBI的診斷價(jià)值不大。

綜上所述，血清HBcrAg在自然狀態(tài)下與HBV DNA存在良好的相關(guān)性，由于其檢測(cè)操作簡(jiǎn)便，干擾因素少，敏感性和特異性高，無(wú)需專用實(shí)驗(yàn)室和專人操作等，可在無(wú)法開(kāi)展HBV DNA檢測(cè)時(shí)作為替代檢測(cè)。血清HBcrAg對(duì)OBI的診斷效能較好，可單獨(dú)作為診斷OBI的血清學(xué)指標(biāo)。由于本研究納入樣本量較少、樣本類型略有不足等，其結(jié)論仍需更多大樣本、多中心的研究數(shù)據(jù)進(jìn)一步驗(yàn)證。

[1] Kim H, Lee SA, Kim DW, et al. Naturally occurring mutations in large surface genes related to occult infection of hepatitis B virus genotype C[J]. PLoS One, 2013,8(1):e54486.

[2] Covolo L, Pollicino T, Raimondo G, et al. Occult hepatitis B virus and the risk for chronic liver disease: a meta-analysis[J]. Dig Liver Dis, 2013,45(3):238-344.

[3] El Chaar M, Candotti D, Crowther RA, et al. Impact of hepatitis B virus surface protein mutations on the diagnosis of occult hepatitis B virus infection[J]. Hepatology, 2010,52(12):1600-1610.

[4] 張振華，趙西平，夏劍波，等.隱匿性乙型肝炎病毒感染者血清表面抗體性質(zhì)鑒定[J].中華肝臟病雜志，2011，19(7)：506-510.

[5] Torbenson M, Thomas DL. Occult hepatitis B[J]. Lancet Infect Dis, 2002,2(8):479-486.

[6] Wong DK, Tanaka Y, Lai CL, et al. Hepatitis B virus core-related antigens as markers for monitoring chronic hepatitis B infection[J]. J Clin Microbiol, 2007,45(12):3942-3947.

[7] Shinkai N, Tanaka Y, Matssuura K, et al. Evaluation and application of a newly developed highly sensitive HBsAg chemiluminescent enzyme immunoassay for chronic hepatitis B patients[J]. Rinsho Byori, 2010,58(11):1078-1084.

[8] 高春芳，吳孟超.乙型肝炎病毒感染標(biāo)志物的檢測(cè)現(xiàn)狀和思考[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，38(3)：145-147.

[9] Liu C, Chang L, Ji H, et al. Prevalence of HBV DNA among 20 million seronegative blood donations in China from 2010 to 2015[J]. Sci Rep, 2016(6):36464.

[10] Liu J, Zhang S, Wang Q, et al. Seroepidemiology of hepatitis B virus infection in 2 million men aged 21-49 years in rural China: a population-based, cross-sectional study[J]. Lancet Infect Dis, 2016,16(1):80-86.

[11] Zhu CL, Liu P, Chen T, et al. Presence of immune memory and immunity to hepatitis B virus in adults after neonatal hepatitis B vaccination[J]. Vaccine, 2011,29(44):7835-7841.

[12] 李仲平，王溪，鄭優(yōu)榮，等.廣州地區(qū)HBsAg陰性無(wú)償獻(xiàn)血血液輸血傳播HBV殘余風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[J].廣東醫(yī)學(xué)，2014，35(3)：442-445.

[13] 周姍，杜鵬，鄭欣，等.2010年至2012年深圳地區(qū)獻(xiàn)血者隱匿性乙型肝炎病毒感染的分子病毒學(xué)特征[J].中華傳染病雜志，2015，33(3)：150-153.

[14] Zhang Z, Zhang L, Dai Y, et al. Occult hepatitis B virus infection: influence of S protein variants[J]. Virol J, 2016(13):10.

[15] Wang Z, Zeng J, Li T, et al. Prevalence of hepatitis B surface antigen (HBsAg) in a blood donor population born prior to and after implementation of universal HBV vaccination in Shenzhen, China[J]. BMC Infect Dis, 2016,16(1):498.

[16] Matsuzaka T, Tatsuki I, Otani M, et al. Significance of hepatitis B virus core-related antigen and covalently closed circular DNA levels as markers of hepatitis B virus re-infection after liver transplantation[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2013,28(7):1217-1222.

[17] Seto WK, Wong DK, Fung J, et al. Linearized hepatitis B surface antigen and hepatitis B core-related antigen in the natural history of chronic hepatitis B[J]. Clin Microbiol Infect, 2014,20(11):1173-1180.

[18] Kimura T, Rokuhara A, Sakamoto Y, et al. Sensitive enzyme immunoassay for hepatitis B virus core-related antigens and their correlation to virus load[J]. J Clin Microbio, 2002,40(2):439-445.

[19] Tanaka E, Matsumoto A, Yoshizawa K, et al. Hepatitis B core-related antigen assay is useful for monitoring the antiviral effects of nucleoside analogue therapy[J]. Intervirology, 2008,51(Suppl 1):3-6.

[20] Park Y, Hong DJ, Shin S, et al. Performance evaluation of new automated hepatitis B viral markers in the clinical laboratory: two quantitative hepatitis B surface antigen assays and an HBV core-related antigen assay[J]. Am J Clin Pathol, 2012,137(5):770-777.

[21] Hosoka T, Suzuki F, Kobayashi M, et al. HBcrAg is a predictor of post-treatment recurrence of hepatocellular carcinoma during antiviral therapy[J]. Liver Int, 2010,30(10):1461-1470.

[22] Maasoumy B, Wiegand SB, Jaroszewicz J, et al. Hepatitis B core-related antigen (HBcrAg) levels in the natural history of hepatitis B virus infection in a large European cohort predominantly infected with genotypes A and D[J]. Clin Microbiol Infect, 2015,21(6):606.

Diagnostic value of serum HBcrAg and linearized HBsAg for occult hepatitis B virus infection

ZHUChanglin1,XUEXiongyan,CHENZhanze,GUYuyu,XUYangyang,LIWeixuan

(1TheFirstPeople’sHospitalofFoshan,Foshan528000,China)

Objective To investigate the value of serum hepatitis B virus core-related antigens (HBcrAg) and linearized hepatitis B surface antigen (HBsAg) in diagnosis of occult hepatitis B virus infection (OBI) in Chinese population. Methods HBcrAg and linearized HBsAg levels were measured by chemiluminescence enzyme immunoassay (CLEIA) in 63 patients with OBI (OBI group) and 150 healthy people (control group). The serum HBV DNA was detected by fluorescence quantitative PCR. Receiver operating characteristics (ROC) was analyzed to calculate diagnostic accuracy of HBcrAg and combination with linearized HBsAg. Results Serum HBcrAg and linearized HBsAg were detected in 90.5% and 42.9% of the OBI group, and 10.7%, 6.0% of the control group, respectively (χ2=125.5, 42.9, allP<0.05). There were positive correlation between HBV DNA and HBcrAg, HBV DNA and linearized HBsAg, HBcrAg and linearized HBsAg, respectively (R2=0.471 4, 0.122 2, 0.086 8,P<0.05 orP<0.01). HBcrAg had better area under the ROC curves (AUC) [0.911 (95%CI: 0.864-0.946)] than linearized HBsAg [0.683 (95%CI: 0.616-0.745),Z=6.134,P<0.05]. The AUC of combined detection was 0.895 (95%CI: 0.846-0.933), and no significant improvement was found (Z=0.657,P>0.05). The optimal HBcrAg and linearized HBsAg cutoff values were 100 U/mL and 0.48 IU/mL, respectively. The sensitivity of HBcrAg in diagnosis of OBI was significantly higher than that of linearized HBsAg (χ2=121.4,P<0.01), while specificity was a little lower (χ2=3.034,P>0.05). Combined detection in diagnosis of OBI did not show any improvement than single detection of HBcrAg or linearized HBsAg in sensitivity or specificity (χ2=1.322, 3.802, allP>0.05). Conclusion There is a good correlation between serum HBcrAg and HBV DNA, and HBcrAg is more sensitive than linearized HBsAg or combined detection in diagnosis of OBI, which can be used as a good serological marker for the diagnosis of OBI.

occult hepatitis B virus infection; Hepatitis B virus core-related antigens; linearized hepatitis B surface antigen

廣東省醫(yī)學(xué)科研基金立項(xiàng)項(xiàng)目(B2015127)。

朱嫦琳(1985-)，女，主管技師，研究方向?yàn)槊庖邔W(xué)與分子生物學(xué)。E-mail： changlin_zhu@126.com

李煒煊(1960-)，男，主任技師，研究方向?yàn)樯庖邔W(xué)。E-mail： lwx21cn@163.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.08.003

R512.6

A

1002-266X(2017)08-0009-04

2016-07-07)