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全自動(dòng)微生物鑒定儀在淋球菌鑒定中的價(jià)值

2017-03-13 20:47:40
大醫(yī)生 2017年8期
關(guān)鍵詞:奈瑟淋球菌淋病

張 梅

(江蘇省儀征市疾病預(yù)防控制中心,江蘇儀征 211400)

淋病奈瑟氏菌是引起淋病的病原體,從患者標(biāo)本中檢測(cè)出淋病奈瑟氏菌是淋病確診的主要依據(jù),所以培養(yǎng)法被認(rèn)為是確診淋病的“金標(biāo)準(zhǔn)”。因女性宮頸、陰道與外界相通,雜菌比較多,其染色特性及形態(tài)特征與淋球菌很難區(qū)分,涂片鏡檢法很難鑒別雜菌和淋球菌。世界衛(wèi)生組織明確規(guī)定,篩查女性患者不能僅用涂片法。本文通過比較傳統(tǒng)手工法培養(yǎng)法以及全自動(dòng)微生物鑒定儀鑒定法在淋球菌檢測(cè)的應(yīng)用。以了解全自動(dòng)微生物鑒定儀在鑒定淋球菌方法的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

(1)標(biāo)本來源

儀征市2013年1月—2015年12月份儀征市性病門診疑似淋病的女性患者宮頸分泌物樣本共計(jì)58例,同時(shí)用傳統(tǒng)手工培養(yǎng)法和儀器法進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測(cè)。

(2)培養(yǎng)基與儀器設(shè)備

淋球菌分離培養(yǎng)板由珠海市銀科醫(yī)學(xué)工程有限公司提供;革蘭氏染色液、觸酶和葡萄糖由北京路橋試劑股份有限公司提供;全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)、VITEK NH卡及藥敏鑒定卡由法國(guó)物梅里埃公司(bioMerieux)提供;上述培養(yǎng)基、試劑、材料均在有效期內(nèi)。

1.2 檢驗(yàn)方法

(1)常規(guī)手工法

女性陰道分泌物標(biāo)本采樣后,迅速接種于預(yù)溫至37℃的淋球菌分離培養(yǎng)板上,將拭子緊貼在培養(yǎng)基表面滾動(dòng)涂布約四分之一培養(yǎng)皿,然后分區(qū)用接種環(huán)劃線,在培養(yǎng)皿上得到單個(gè)細(xì)菌菌落。將接種后的標(biāo)本,立即放置在35~36℃[1]、5%~10% CO2氣袋中加濕培養(yǎng)24~48 h后。形成圓形、光滑、凸起、濕潤(rùn)、灰白色不透明的菌落,邊緣不整齊,進(jìn)一步分離,取純培養(yǎng)物進(jìn)行涂片,革蘭染色鏡檢,為革蘭氏陰性球菌,呈腎形或卵圓形,成對(duì)排列。做觸酶氧化酶試驗(yàn)陽性、葡萄糖分解實(shí)驗(yàn)經(jīng)18~24 h ,35~36℃確定為淋球菌。

(2)儀器法

挑取可疑純培養(yǎng)菌落,革蘭氏染色后鏡檢為革蘭氏陰性雙球菌,然后按儀器規(guī)定的操作說明書進(jìn)行菌液配制,將填充好的鑒定卡(NH卡)以及藥敏鑒定卡一并上機(jī),6~8 h后結(jié)果為99%可能性淋病奈瑟氏菌,極好的鑒定結(jié)果。

藥敏結(jié)果顯著頭孢類對(duì)頭孢曲松、頭孢西丁較敏感性,分別為97.68%,97.46%,對(duì)青霉素、四環(huán)素的敏感性較差,分別為15.27%,5.98%。

2 結(jié)果

通過菌落在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特性,革蘭氏染色結(jié)果、氧化酶、觸媒、糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)反應(yīng)等手工試驗(yàn)從58例疑似病例中檢出35例檢出淋球菌。全自動(dòng)微生物鑒定儀在58份可疑樣本中同樣檢出35例淋球菌,其中在結(jié)果準(zhǔn)確性上兩者無明顯差異,但是手工法平均用時(shí)72 h,而儀器法平均用時(shí)54 h比手工檢測(cè)法少用18 h,并且能夠同時(shí)得出藥敏結(jié)果,可以及時(shí)診斷,盡快治療。

3 討論與結(jié)論

培養(yǎng)法因?yàn)槭艿礁鱾€(gè)因素的制約,雖然準(zhǔn)確性較高,但是檢出率并不是很高,本次實(shí)驗(yàn)只有60.34%。有23例疑似病人未檢出淋球菌,經(jīng)分析可能導(dǎo)致其未檢出的原因?yàn)椋海?)對(duì)樣本采集人員的要求:淋球菌常寄生于柱狀上皮中,所以取樣時(shí)應(yīng)取尿道口,挑取宮頸管內(nèi)的柱狀上皮細(xì)胞,避免采集陰道表面的鱗狀上皮細(xì)胞。未成年小孩取尿道口或陰道口標(biāo)本?;继幏置谖锾鄷r(shí),先應(yīng)用無菌生理鹽水清洗,除去大部分雜菌,也能提高檢出率。尿道口取樣,盡量用灌酸鈣拭子,不用棉拭子。一般醫(yī)療單位由醫(yī)生在門診或住院部取樣送檢,取樣未按要求,化驗(yàn)師只復(fù)查培養(yǎng),這也是難以培養(yǎng)出淋球菌的可能原因。淋病奈瑟菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高,抵抗力差,采集后保存時(shí)限短,容易死亡并自溶。因此標(biāo)本的采集送檢是關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。所以臨床醫(yī)生在采集標(biāo)本送檢的過程中應(yīng)該規(guī)范操作,送檢合格的標(biāo)本,提高淋病奈瑟氏菌的檢出率。(2)對(duì)患者的要求:采樣時(shí)盡量采集未用抗生素的標(biāo)本。許多患者由于對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)不夠,在發(fā)病后常常先使用抗生素,癥狀沒有緩解時(shí)才到醫(yī)院治療,此時(shí)取患者的分泌物標(biāo)本時(shí)是很難培養(yǎng)出淋球菌的。(3)對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員的要求:淋球菌的培養(yǎng)比較苛刻,初次培養(yǎng)需要有5%~10% CO2的氣體環(huán)境并要保持一定的濕度,所以在培養(yǎng)過程中一定要規(guī)范操作程序,常常有一個(gè)環(huán)節(jié)沒有規(guī)范操作就會(huì)導(dǎo)致淋球菌的檢出率下降。因此在培養(yǎng)過程中應(yīng)用儀器法,能更好的控制操作的全過程,可以減少由于檢驗(yàn)人員的個(gè)人經(jīng)驗(yàn)主義而導(dǎo)致的漏檢。此外,傳統(tǒng)手工法對(duì)于檢驗(yàn)人員的素質(zhì)也是有很高的要求,但是儀器法,只要熟知儀器操作程序,就能得到滿意的結(jié)果。這樣能方便快捷的提高培養(yǎng)法的檢出率。

所以儀器在微生物鑒定方面起到越來越重要的作用,建議有條件的實(shí)驗(yàn)室可以配備全自動(dòng)微生物鑒定儀,能在淋球菌鑒定中起到很大的作用,結(jié)合其他實(shí)驗(yàn),例如:PCR實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)等對(duì)淋球菌實(shí)現(xiàn)更快速、準(zhǔn)確的鑒定,并及時(shí)提供藥敏結(jié)論,才能更好的指導(dǎo)臨床用藥[2]。

[1] 鄧沖.分離培養(yǎng)法與涂片鏡檢法在診斷女性淋球菌感染的臨床應(yīng)用比較[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(14):1853-1854.

[2] 黃輝如.惠州地區(qū)淋球菌對(duì)抗菌藥物的敏感性測(cè)定及多重耐藥分析 [J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2015,36(15):2273-2275.

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