張 梅

（江蘇省儀征市疾病預(yù)防控制中心，江蘇儀征 211400）

淋病奈瑟氏菌是引起淋病的病原體，從患者標(biāo)本中檢測(cè)出淋病奈瑟氏菌是淋病確診的主要依據(jù)，所以培養(yǎng)法被認(rèn)為是確診淋病的“金標(biāo)準(zhǔn)”。因女性宮頸、陰道與外界相通，雜菌比較多，其染色特性及形態(tài)特征與淋球菌很難區(qū)分，涂片鏡檢法很難鑒別雜菌和淋球菌。世界衛(wèi)生組織明確規(guī)定，篩查女性患者不能僅用涂片法。本文通過比較傳統(tǒng)手工法培養(yǎng)法以及全自動(dòng)微生物鑒定儀鑒定法在淋球菌檢測(cè)的應(yīng)用。以了解全自動(dòng)微生物鑒定儀在鑒定淋球菌方法的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

（1）標(biāo)本來源

儀征市2013年1月—2015年12月份儀征市性病門診疑似淋病的女性患者宮頸分泌物樣本共計(jì)58例，同時(shí)用傳統(tǒng)手工培養(yǎng)法和儀器法進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測(cè)。

（2）培養(yǎng)基與儀器設(shè)備

淋球菌分離培養(yǎng)板由珠海市銀科醫(yī)學(xué)工程有限公司提供；革蘭氏染色液、觸酶和葡萄糖由北京路橋試劑股份有限公司提供；全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)、VITEK NH卡及藥敏鑒定卡由法國(guó)物梅里埃公司（bioMerieux）提供；上述培養(yǎng)基、試劑、材料均在有效期內(nèi)。

1.2 檢驗(yàn)方法

（1）常規(guī)手工法

女性陰道分泌物標(biāo)本采樣后，迅速接種于預(yù)溫至37℃的淋球菌分離培養(yǎng)板上，將拭子緊貼在培養(yǎng)基表面滾動(dòng)涂布約四分之一培養(yǎng)皿，然后分區(qū)用接種環(huán)劃線，在培養(yǎng)皿上得到單個(gè)細(xì)菌菌落。將接種后的標(biāo)本，立即放置在35～36℃[1]、5%～10% CO2氣袋中加濕培養(yǎng)24～48 h后。形成圓形、光滑、凸起、濕潤(rùn)、灰白色不透明的菌落，邊緣不整齊，進(jìn)一步分離，取純培養(yǎng)物進(jìn)行涂片，革蘭染色鏡檢，為革蘭氏陰性球菌，呈腎形或卵圓形，成對(duì)排列。做觸酶氧化酶試驗(yàn)陽性、葡萄糖分解實(shí)驗(yàn)經(jīng)18～24 h ，35～36℃確定為淋球菌。

（2）儀器法

挑取可疑純培養(yǎng)菌落，革蘭氏染色后鏡檢為革蘭氏陰性雙球菌，然后按儀器規(guī)定的操作說明書進(jìn)行菌液配制，將填充好的鑒定卡（NH卡）以及藥敏鑒定卡一并上機(jī)，6～8 h后結(jié)果為99%可能性淋病奈瑟氏菌，極好的鑒定結(jié)果。

藥敏結(jié)果顯著頭孢類對(duì)頭孢曲松、頭孢西丁較敏感性，分別為97.68%，97.46%，對(duì)青霉素、四環(huán)素的敏感性較差，分別為15.27%，5.98%。

2 結(jié)果

通過菌落在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特性，革蘭氏染色結(jié)果、氧化酶、觸媒、糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)反應(yīng)等手工試驗(yàn)從58例疑似病例中檢出35例檢出淋球菌。全自動(dòng)微生物鑒定儀在58份可疑樣本中同樣檢出35例淋球菌，其中在結(jié)果準(zhǔn)確性上兩者無明顯差異，但是手工法平均用時(shí)72 h，而儀器法平均用時(shí)54 h比手工檢測(cè)法少用18 h，并且能夠同時(shí)得出藥敏結(jié)果，可以及時(shí)診斷，盡快治療。

3 討論與結(jié)論

培養(yǎng)法因?yàn)槭艿礁鱾€(gè)因素的制約，雖然準(zhǔn)確性較高，但是檢出率并不是很高，本次實(shí)驗(yàn)只有60.34%。有23例疑似病人未檢出淋球菌，經(jīng)分析可能導(dǎo)致其未檢出的原因?yàn)椋海?）對(duì)樣本采集人員的要求：淋球菌常寄生于柱狀上皮中，所以取樣時(shí)應(yīng)取尿道口，挑取宮頸管內(nèi)的柱狀上皮細(xì)胞，避免采集陰道表面的鱗狀上皮細(xì)胞。未成年小孩取尿道口或陰道口標(biāo)本?；继幏置谖锾鄷r(shí)，先應(yīng)用無菌生理鹽水清洗，除去大部分雜菌，也能提高檢出率。尿道口取樣，盡量用灌酸鈣拭子，不用棉拭子。一般醫(yī)療單位由醫(yī)生在門診或住院部取樣送檢，取樣未按要求，化驗(yàn)師只復(fù)查培養(yǎng)，這也是難以培養(yǎng)出淋球菌的可能原因。淋病奈瑟菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高，抵抗力差，采集后保存時(shí)限短，容易死亡并自溶。因此標(biāo)本的采集送檢是關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。所以臨床醫(yī)生在采集標(biāo)本送檢的過程中應(yīng)該規(guī)范操作，送檢合格的標(biāo)本，提高淋病奈瑟氏菌的檢出率。（2）對(duì)患者的要求：采樣時(shí)盡量采集未用抗生素的標(biāo)本。許多患者由于對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)不夠，在發(fā)病后常常先使用抗生素，癥狀沒有緩解時(shí)才到醫(yī)院治療，此時(shí)取患者的分泌物標(biāo)本時(shí)是很難培養(yǎng)出淋球菌的。（3）對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員的要求：淋球菌的培養(yǎng)比較苛刻，初次培養(yǎng)需要有5%～10% CO2的氣體環(huán)境并要保持一定的濕度，所以在培養(yǎng)過程中一定要規(guī)范操作程序，常常有一個(gè)環(huán)節(jié)沒有規(guī)范操作就會(huì)導(dǎo)致淋球菌的檢出率下降。因此在培養(yǎng)過程中應(yīng)用儀器法，能更好的控制操作的全過程，可以減少由于檢驗(yàn)人員的個(gè)人經(jīng)驗(yàn)主義而導(dǎo)致的漏檢。此外，傳統(tǒng)手工法對(duì)于檢驗(yàn)人員的素質(zhì)也是有很高的要求，但是儀器法，只要熟知儀器操作程序，就能得到滿意的結(jié)果。這樣能方便快捷的提高培養(yǎng)法的檢出率。

所以儀器在微生物鑒定方面起到越來越重要的作用，建議有條件的實(shí)驗(yàn)室可以配備全自動(dòng)微生物鑒定儀，能在淋球菌鑒定中起到很大的作用，結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)，例如：PCR實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)等對(duì)淋球菌實(shí)現(xiàn)更快速、準(zhǔn)確的鑒定，并及時(shí)提供藥敏結(jié)論，才能更好的指導(dǎo)臨床用藥[2]。

[1] 鄧沖.分離培養(yǎng)法與涂片鏡檢法在診斷女性淋球菌感染的臨床應(yīng)用比較[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（14）：1853-1854.

[2] 黃輝如.惠州地區(qū)淋球菌對(duì)抗菌藥物的敏感性測(cè)定及多重耐藥分析 [J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36（15）：2273-2275．