楊謹(jǐn)瑜，李月，嚴(yán)歡，陶松，金照剛，王生奎

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明650201）

昆明某豬場豬高致病性藍(lán)耳病的診斷和預(yù)防

楊謹(jǐn)瑜，李月，嚴(yán)歡，陶松，金照剛，王生奎

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，昆明650201）

云南省昆明市某豬場2016年1月頻發(fā)育肥豬死亡，保育豬生長發(fā)育不良、高熱、厭食以及母豬繁殖障礙等為主要臨床癥狀的疾病。為了查明該豬場豬只致病原因，筆者通過對病死豬進行臨床診斷、病理剖檢，以及采集病料進行豬圓環(huán)病毒2型、豬冠狀病毒以及豬高致病性藍(lán)耳病病毒的RT-PCR檢測。檢測結(jié)果顯示，從病死豬只肺臟、脾臟等器官組織中擴增出豬繁殖與呼吸綜合征病毒目的條帶，與陽性目的條帶相吻合，結(jié)合臨床癥狀以及病理剖檢結(jié)果分析，該豬場病死豬為豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染所致。

豬高致病性藍(lán)耳??；傳染??；RT-PCR；預(yù)防

豬高致病性藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株引起的一種豬的繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)障礙的傳染病，臨床特征以高熱、高發(fā)病率、高死亡率為主，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的威脅。該病只感染豬，各年齡階段和品種的豬均易感。病豬和帶毒豬是本病主要傳染源，其傳播迅速，主要經(jīng)呼吸道感染，病毒也可通過胎盤和精液傳播[1]。并表現(xiàn)出多樣性,其特征為厭食、發(fā)熱，帶毒母豬和感染母豬可表現(xiàn)出發(fā)情障礙，如出現(xiàn)滯后產(chǎn)、不發(fā)情等現(xiàn)象，懷孕后期發(fā)生流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎；幼齡仔豬發(fā)生呼吸系統(tǒng)疾病和大量死亡。仔豬發(fā)病率可達100%、死亡率可達50%以上，母豬流產(chǎn)率可達30%以上，育肥豬也可發(fā)病死亡[2-5]。

近年來，臨床上PRRS的發(fā)生和流行已經(jīng)越來越普遍，防控難度和疫情的復(fù)雜程度日益加劇。其呈現(xiàn)出新的特點：陰性豬場愈來愈少，PRRS已成為大部分豬場常在疫病，豬場一片藍(lán)；由于感染豬只的免疫功能受到影響，豬群對疾病的抵抗力就下降，特別是近年來加上豬圓環(huán)病毒2型的感染，更加重了對豬群免疫功能的損害[7]。豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染豬群的同時繼發(fā)豬瘟病毒、圓環(huán)病毒、流感病毒和副豬嗜血桿菌等其他病毒和細(xì)菌的混合或共同感染,因此雖然我們找到了主要的病因,但對此病的處理仍相當(dāng)復(fù)雜,想要單純依靠高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗完全控制該病是不現(xiàn)實的,我們?nèi)耘f需要制定出綜合全面的防治計劃。本文對云南昆明廠口村某養(yǎng)豬場的發(fā)病豬進行豬高致病性藍(lán)耳病的診斷和防治。

1 發(fā)病情況

主訴豬場約有300多頭豬，只接種過豬瘟、豬丹毒、豬肺疫三聯(lián)活疫苗而其他免疫均未涉及，其中有20多頭豬于2016年1月30日發(fā)生育肥豬高死亡率，保育豬生長發(fā)育不良、死亡率高的現(xiàn)象，使用多種藥物進行治療，但均無效。獸醫(yī)與畜主商量后決定對兩頭病死豬進行病理剖檢。

2 臨床診斷

發(fā)病豬高燒、喘、四肢無力、鼻腔有鐵銹色分泌物、個別豬只關(guān)節(jié)腫大、有神經(jīng)癥狀、大便干燥而后期拉稀。

3 病理剖檢

對2頭已死亡的育肥豬進行病理剖檢，剖檢結(jié)果如下：肺腫脹、呈橡皮樣，有干酪樣點狀物、大面積出血、彌漫性間質(zhì)性肺炎；心包積液、可見脾臟淤血且邊緣出現(xiàn)梗死灶；腎臟呈土黃色，表面有出血斑，剖開后腎臟乳頭充血；喉頭充血、下頜淋巴結(jié)腫大出血，懷疑該豬只疑似感染豬高致病性藍(lán)耳病。

4 實驗室診斷

4.1 實驗室檢測所需用品及設(shè)備

AxyPrep體液病毒DNA/RNA小量試劑盒：由康寧生命學(xué)（吳江）有限公司提供；高速低溫離心機；超凈工作臺；PCR儀；電泳儀；紫外凝膠成像儀；移液槍；PE管；電腦多用電泳儀。

4.2 樣品

取剖檢豬只的肺臟、脾臟、淋巴結(jié)、腎臟部分組織剪碎進行充分研磨、用雙抗水稀釋，倒入2mlPE離心管以12000r/min離心5分鐘，取上清液200μL。

4.3 檢測步驟

流程為：核酸提取→制備體系→RT-PCR→電泳。

本實驗采用試劑盒為康寧生命科學(xué)（吳江）有限公司提供的AxyPrep體液病毒DNA/RNA小量試劑盒。操作步驟按照試劑盒說明書。(上引物、下引物均由云南省動物疫病預(yù)防控制中心內(nèi)部提供）

5 結(jié)果與分析

實驗室檢測結(jié)果如下圖所示：

圖豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-PCR檢測結(jié)果

1-2：送檢樣本5：陽性對照6：陰性對照M：mark

結(jié)果分析：豬圓環(huán)病毒2型PCR以及豬冠狀病毒RT-PCR檢測結(jié)果均為陰性，豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-PCR擴增條帶為485bp,組織病料經(jīng)病毒RNA提取后經(jīng)反轉(zhuǎn)錄PCR擴增產(chǎn)物進行檢測得到485bp目的條帶與陽性對照相吻合（見圖）

根據(jù)臨床癥狀以及病理剖檢的結(jié)果，該豬場發(fā)病豬判定為疑似豬高致病性藍(lán)耳??；根據(jù)RT-PCR檢測送檢樣本為豬高致病性藍(lán)耳病陽性，因此該豬場發(fā)病豬只確診為豬高致病性藍(lán)耳病。

6 討論

6.1 豬高致病性藍(lán)耳病的危害

該病已成為危害我國養(yǎng)豬業(yè)的第一大疾病，也是危害世界養(yǎng)豬業(yè)的最重要疾病。豬繁殖與呼吸綜合征是免疫抑制性疾病，可以造成免疫抑制和多系統(tǒng)衰竭，且由于該病毒不斷變異，缺乏典型癥狀，機體免疫抑制易繼發(fā)多種混合感染，如豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒和圓環(huán)病毒、副嗜血桿菌等病原混合感染，使得豬群的發(fā)病情況更加復(fù)雜?，F(xiàn)如今，病毒混合感染已成為主流，臨床診斷更為困難，若采用單一的診斷方法，難免造成漏診和誤診，貽誤疾病的診斷和治療，導(dǎo)致疫病蔓延。

6.2 RT-PCR等實驗方法

本次試驗應(yīng)用RT-PCR快速測定病原核酸，不僅具有操作簡便、特異性強和花費低等特點，對于大量的臨床樣品分析和流行病學(xué)調(diào)查具有很強的實用價值，更為優(yōu)勢的是其在診斷區(qū)分不同毒株等方面顯示了其巨大的優(yōu)越性，是目前最有效快捷的檢測方法。

6.3 發(fā)病原因分析

6.3.1 近期豬場外來人員出入頻繁，防疫措施不徹底。

6.3.2 豬舍保暖設(shè)施較差，豬群密度大，通風(fēng)不好，空氣污濁，呼吸道疾病容易發(fā)生。

6.3.3 2015年12月大雪以及多次寒潮來襲，直接導(dǎo)致豬群發(fā)生了嚴(yán)重的冷應(yīng)激，這成為本次豬病發(fā)生的主要原因。

6.3.4 實地調(diào)查后發(fā)現(xiàn)，周邊其他豬場也有類似該豬場豬只的臨床發(fā)病情況，該豬場有部分原因是病毒經(jīng)水平傳播進入該豬場，經(jīng)呼吸道感染，導(dǎo)致該豬場該病的發(fā)生和流行。

6.4 PRRS的預(yù)防與控制

加強生物安全體系建設(shè)是豬群疫病防控的重要措施，而豬高致病性藍(lán)耳病的疫病防控策略，應(yīng)該實行更加嚴(yán)格的生物安全措施，嚴(yán)格控制豬群的活動范圍以及引種等工作的把關(guān)。通過它可減少引入致病性病原的可能性，并且從現(xiàn)有環(huán)境中去除病原體，切斷傳播途徑，是一種系統(tǒng)的、連續(xù)的管理方法，也是最有效、最經(jīng)濟的控制疫病發(fā)生和傳播的方法，其總目標(biāo)是保持畜群的高生產(chǎn)性能，發(fā)揮最大的經(jīng)濟效益[6-8]。全方位做好豬場生物安全，制定和推行科學(xué)免疫程序，并且強制地推動種豬場PRRS的凈化工作。我國PRRS的控制任重而道遠(yuǎn)，需要獸醫(yī)行政部門、學(xué)術(shù)界、企業(yè)界和生產(chǎn)界統(tǒng)一認(rèn)識、達成共識，樹立正確而又科學(xué)的防控理念[6]。

6.5 要從觀念上改變養(yǎng)殖模式

只有加強免疫防控、彌補生物安全體系漏洞以及使用天然中草藥提取物預(yù)防[9-10]，做好各種疫苗免疫工作，搞好生物安全措施，及時清除傳染源，切斷傳播途徑，加強豬群飼養(yǎng)管理，提高疫病綜合防控措施等才能更好地控制和預(yù)防豬高致病性藍(lán)耳病的發(fā)生，繼而達到消滅豬繁殖與呼吸綜合征病毒的最終目的[11-13]。

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S858.28

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1003-8655（2017）01-0076-02

楊謹(jǐn)瑜（1994--），碩士研究生，研究方向為臨床獸醫(yī)，郵箱：295185887@qq.com

王生奎（1963--），碩士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要從事獸醫(yī)臨床診斷學(xué)、獸醫(yī)內(nèi)科學(xué)、獸醫(yī)臨床教學(xué)及科研工作。郵箱：544628182@qq.com