付靜濤，吳美玲，畢江華，趙增元，李英杰，肖西山

奶牛隱性乳房炎病原菌分離鑒定試驗(yàn)

付靜濤1，吳美玲2，畢江華3，趙增元3，李英杰4，肖西山1

(1.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，北京 102442；2.北京市延慶區(qū)畜牧技術(shù)推廣站，北京 102100；3.石家莊天泉良種奶牛有限公司，石家莊 050000；4.北京市延慶區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 102100）

為給北京某郊區(qū)奶牛隱性乳房炎的綜合防治提供依據(jù)，本試驗(yàn)在該郊區(qū)采集了128份隱性乳房炎乳樣，并對(duì)主要病原菌種類及分布情況進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：（1）環(huán)境性細(xì)菌和傳染性細(xì)菌是該地區(qū)隱性乳房炎的主要病原菌。傳染性細(xì)菌中以金黃色葡萄球菌為主（規(guī)模牛場(chǎng)、小區(qū)和散養(yǎng)戶分別為9．98%、15．99%和11．96%）；環(huán)境性細(xì)菌中以停乳鏈球菌（小區(qū)高達(dá)10．41%）、沙雷氏菌（小區(qū)高達(dá)31．51%）和大腸桿菌（小區(qū)高達(dá)8．46%）為主；（2）在傳染性細(xì)菌和環(huán)境性細(xì)菌的檢出比率中，小區(qū)為最高（分別為18．81%和55．53%），其次是散養(yǎng)戶（分別為17．39%和34．52%），最低的是規(guī)模牛場(chǎng)（分別為13．19%和17．49%）。

奶牛；隱性乳房炎；病原菌；分離鑒定

奶牛乳房炎主要是由于病原微生物侵入奶牛乳腺組織所引起的奶牛乳房炎癥。引起奶牛乳房炎的病原微生物種類繁多，有細(xì)菌、真菌、病毒、支原體等，但主要由細(xì)菌引起[1～3]。奶牛乳房炎分為臨床型乳房炎和隱性乳房炎，而隱性乳房炎患牛的乳房和乳汁均無(wú)肉眼可見變化，需要用特殊試驗(yàn)才能判定，會(huì)給牧場(chǎng)造成嚴(yán)重?fù)p失。據(jù)世界奶牛協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì)，世界范圍內(nèi)奶牛乳房炎的發(fā)病率約高達(dá)50%，中國(guó)奶牛隱性乳房炎的陽(yáng)性率為46.4%～85.7%[4]。雖然國(guó)內(nèi)外的學(xué)者都在積極地尋找有效的辦法來(lái)控制奶牛乳房炎，但都未獲得成功。隱性乳房炎具有病因復(fù)雜、隱蔽性強(qiáng)、不易被發(fā)現(xiàn)等特點(diǎn)，應(yīng)及時(shí)檢測(cè)、及時(shí)治療。病原微生物是導(dǎo)致隱性乳房炎的最主要病因，所以及時(shí)準(zhǔn)確掌握病區(qū)奶牛隱性乳房炎病原菌的種類很關(guān)鍵。本試驗(yàn)從奶牛場(chǎng)采集隱性乳房炎患牛的奶樣并進(jìn)行主要病原菌的分離鑒定，旨在獲得本地區(qū)奶牛隱性乳房炎病原菌的系統(tǒng)資料，為指導(dǎo)臨床合理用藥和提高防治效果提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 樣品

采用北京乳房炎試驗(yàn)（BMT）法，對(duì)北京市某郊區(qū)的奶牛規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)殖小區(qū)和部分散養(yǎng)戶的泌乳牛群進(jìn)行隱性乳房炎檢測(cè)，依據(jù)“一個(gè)乳區(qū)出現(xiàn)弱陽(yáng)性+以上者判為陽(yáng)性”的標(biāo)準(zhǔn)，共采集了128份陽(yáng)性奶樣。

1．2 主要儀器與試劑

普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、5%羊血液瓊脂培養(yǎng)基、細(xì)菌生化鑒定管，部分生化試劑自備。

1．3 細(xì)菌的培養(yǎng)、分離和鑒定

表1 細(xì)菌的培養(yǎng)特性

表2 菌株的生化鑒定

將奶樣分別劃線培養(yǎng)于上述3種培養(yǎng)基上，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h，觀察、記錄菌落的生長(zhǎng)情況，對(duì)菌落進(jìn)行編號(hào)。再經(jīng)革蘭氏染色、鏡檢，觀察細(xì)菌的染色特性和形態(tài)，初步判定細(xì)菌的種類。然后對(duì)單個(gè)菌落進(jìn)行克隆培養(yǎng)，生化鑒定。

2 結(jié)果

2．1 分離培養(yǎng)結(jié)果

將奶樣分別接種于3種不同的培養(yǎng)基，根據(jù)細(xì)菌的培養(yǎng)特性、菌落形態(tài)、革蘭氏染色特性和細(xì)菌的形態(tài)學(xué)觀察，進(jìn)行初步判定。結(jié)果見表1。

2．2 生化鑒定結(jié)果

對(duì)已通過(guò)培養(yǎng)特性和形態(tài)學(xué)觀察且初步鑒定的菌株進(jìn)行生化鑒定。鑒定結(jié)果和細(xì)菌檢出率分別見表2、3。

3 討論

據(jù)報(bào)道，引起奶牛隱性乳房炎的主要為細(xì)菌、真菌、病毒等病原微生物，多達(dá)80多種[5]。較常見的有21種，其中細(xì)菌14種，真菌及病毒7種。有些病原菌雖經(jīng)常存在于乳房?jī)?nèi)，但不一定引起發(fā)病。

本試驗(yàn)只進(jìn)行了細(xì)菌分離，其結(jié)果與相關(guān)報(bào)道一致[6]。分離的細(xì)菌可以分成兩類：一類為環(huán)境致病菌；另一類為傳染性病原菌。前者包括沙雷氏菌、大腸桿菌、停乳鏈球菌等，主要通過(guò)牛體、泥土、糞便等傳播。傳染性病原菌包括無(wú)乳鏈球菌與金黃色葡萄球菌等，主要通過(guò)擠奶過(guò)程，如經(jīng)擦洗乳房用的毛巾、水等接觸傳播。因此，保持牛舍內(nèi)外清潔和牛體衛(wèi)生，避免擠奶過(guò)程中的交叉感染，是預(yù)防乳房炎的重要措施；同時(shí)，及早發(fā)現(xiàn)及時(shí)治療，減少傳染源也是很重要的控制手段。

表3 主要細(xì)菌的檢出率

傳染性細(xì)菌中以金黃色葡萄球菌為主（規(guī)模牛場(chǎng)、小區(qū)和散養(yǎng)戶分別為9.98%、15.99%和11.96%），可以看出，金黃色葡萄球菌仍然是奶牛乳房炎主要的葡萄球菌屬致病菌。環(huán)境性細(xì)菌中以停乳鏈球菌（小區(qū)高達(dá)10.41%）、沙雷氏菌（小區(qū)高達(dá)31.51%）和大腸桿菌為主，這與倪春霞[4]等人的報(bào)道是一致的；在傳染性細(xì)菌和環(huán)境性細(xì)菌的檢出比率中，小區(qū)為最高（18.81%和55.53%），其次是散養(yǎng)戶（分別為17.39%和34.52%），最低的是規(guī)模牛場(chǎng)（分別為13.19%和17.49%），由此可見，規(guī)模場(chǎng)隱性乳房炎奶牛的細(xì)菌感染率略低于小區(qū)和散養(yǎng)戶，這與飼養(yǎng)管理因素有關(guān)。

4 結(jié)論

（1）細(xì)菌分離鑒定的結(jié)果表明，環(huán)境性細(xì)菌和傳染性細(xì)菌是該地區(qū)隱性乳房炎的主要病原菌。傳染性細(xì)菌中以金黃色葡萄球菌為主；環(huán)境性細(xì)菌中以停乳鏈球菌、沙雷氏菌和大腸桿菌為主。

（2）在傳染性細(xì)菌和環(huán)境性細(xì)菌的檢出比率中，小區(qū)為最高，其次是散養(yǎng)戶，最低的是規(guī)模牛場(chǎng)，由此可見，隱性乳房炎奶牛的細(xì)菌感染率，規(guī)模場(chǎng)低于小區(qū)和散養(yǎng)戶。

[1] Kalmus P,Viltrop A,Aasmae B, et al． Occurrence of clinical mastitis in primiparous Estonian dairy cows in different housing conditions[J]． Acta Vet Scand,2006,48(1):21．

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[5] 東秀珠,蔡妙英．常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M]．北京:科學(xué)出版2001:77-78．

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第二屆“牛人“攝影大賽作品 《綠色安達(dá)》——王成強(qiáng) 貝因美

S858.23

A

1004-4264（2017）01-0036-03

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.01.010

2016-08-15

北京市農(nóng)委“菜籃子”工程項(xiàng)目（20140204）；北京市農(nóng)委科技計(jì)劃項(xiàng)目（20140146）；北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院院級(jí)課題（XY-YF-16-06）；北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院院級(jí)課題（XYYF-15-18）。

付靜濤（1970-），男，漢族，碩士研究生，推廣副教授。研究方向?yàn)椴菔硠?dòng)物繁殖技術(shù)及繁殖疾病診治。